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利用CRISPR/Cas9系统建立斑马鱼Spag6基因敲除模型被引量：2: 2018年; 目的采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9对斑马鱼的精子相关抗原6(Spag6)基因进行编辑,建立Spag6基因敲除斑马鱼模型。方法针对斑马鱼Spag6基因,利用生物信息学选取靶位点,构建向导RNA(gRNA)表达载体并体外转录,将gRNA和Cas9mRNA混合物显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中,24~48h提取基因组DNA,PCR扩增出目的片段,限制性酶切法初步检测基因打靶情况,最后进行测序分析确定编辑效果。结果取3个靶位点(S1、S2、S3)进行实验,选择gRNA浓度较高的S1和S3进行注射。限制性酶切及测序的结果显示S3已产生编辑效应。结论通过CRISPR/Cas9系统成功地获得Spag6基因编辑的突变体,为进一步探讨斑马鱼Spag6基因的体内功能奠定了基础。; 张世阳张志兵镇景开Megan Hept李为James A.Lister张玲曾婧; 关键词：斑马鱼

ARM结构的缺失对SPAG6在哺乳细胞中定位的影响: 2015年; 目的：本研究构建精子相关抗原6（SPAG6）基因全长及6个不同长短ARM序列的真核表达载体pEGFP-N2-SPAG6-△ARM，并使其在CHO细胞中表达，观察全长及6个ARM结构缺失后对真核细胞CHO细胞中SPAG6蛋白定位的影响。方法利用NCBI数据库，寻找小鼠SPAG6蛋白的保守功能区，分析全长蛋白序列，检索出SPAG6有7个ARM区域。利用PCR技术扩增出6个缺失不同ARM结构的SPAG6 cDNA，测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白基因的pEGFP-N2真核表达载体中，对阳性克隆进行酶切和测序鉴定，将构建的重组质粒转染到CHO细胞中，分别提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察7个不同SPAG6/GFP融合蛋白在CHO细胞内的定位。结果酶切和测序鉴定表明，全长及6个缺失不同长短ARM结构的真核表达质粒构建成功，转染实验发现重组质粒均能够在CHO细胞中表达，但仅全长表达产物定位于微管，缺失任何一个ARM区域都可影响在细胞中的微管定位。结论SPAG6在哺乳动物细胞内的正确定位依赖于全长。该研究为进一步研究SPAG6蛋白的结构与功能奠定基础。; 汪智琼张玲石玉琴李红飞张志兵; 关键词：不育

精子相关抗原6与肿瘤早期诊断的研究进展被引量：3: 2014年; 精子相关抗原6（SPAG6）为新发现的癌睾丸抗原（cancer-testis antigens, CTA）家族的一员，是一种具有巨大肿瘤早期诊断的前景蛋白。SPAG6基因是1999年Neilson等[1]在用男性不育患者的高滴度抗精子抗体血清来筛选睾丸表达基因文库时克隆出来的。目前发现SPAG6在肿瘤组织中的特异性表达，以及其能引起特异性的体液免疫应答的特点，均符合肿瘤生物标记物的筛选标准。因此该基因可能适用于肿瘤早期诊断。本文就国内研究相对较少的SPAG6的基本特征、功能以及其与肿瘤早期诊断作一下概述。; 平光伦汪智琼张玲石玉琴江高峰张双玲刘晙玭张志兵

精子相关抗原与肿瘤: 2016年; 癌-睾丸抗原是一种重要的肿瘤标记抗原,由于其表达特异性,以及在发挥抗肿瘤免疫作用的同时,不会对正常组织及生殖细胞产生危害,因此具有用于肿瘤免疫治疗的巨大潜力。其中精子相关抗原作为一种新型的癌-睾丸抗原已成为研究热点之一;精子相关抗原是一类主要表达于精子细胞的抗原,近年来研究表明在某些肿瘤组织中也可检测到其不同程度的表达;本文主要概述了几种研究较为深入的精子相关抗原的生物特性,及其在肿瘤组织中的表达情况以及对肿瘤生物学特性如病理分期、增殖、侵袭、转移等的影响;由于精子相关抗原在多种肿瘤组织中表达具有特异性,并且能够引起体液免疫应答,有可能成为肿瘤早期诊断及免疫治疗的理想靶分子。; 张双玲黄志雄江高峰黄芸; 关键词：癌-睾丸抗原肿瘤相关抗原恶性肿瘤

BC022687基因真核表达质粒的构建及在CHO细胞内的蛋白表达和定位被引量：1: 2013年; 目的:BC022687可能是调节纤毛形成的蛋白。本研究构建BC022687基因真核表达载体并探讨融合蛋白在细胞内表达及定位。方法:以小鼠睾丸cDNA文库为模板,PCR扩增全长BC022687编码序列,测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的pEGFP-C1真核表达载体中。将构建的重组质粒转染到CHO细胞中,提取细胞蛋白进行Western印迹检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察BC022687/GFP融合蛋白在CHO细胞内定位。结果:翻译BC022687蛋白的cDNA序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小950 bp。Western印迹检测到相对分子质量约为64 000的融合蛋白表达。BC022687/GFP融合蛋白在细胞内定位以细胞质为主,并在中心体、纤毛形成的模板表达。结论:成功构建BC022687全长基因真核表达载体,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。; 李红飞张玲石玉琴汪智琼江高峰宋世震付国庆张志兵; 关键词：中心体 CHO细胞

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