国家自然科学基金(3010008)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王宇明李俊刚陈耀凯更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 可回复性肝细胞永生化载体pCTGTKlox的构建与回复
- 2006年
- 可回复性永生化的基本原理是：先将永生化基因SV40T（猿猴病毒40大T抗原）导入原代细胞以获得永生化细胞株，使其获得体外增殖能力，然后再以特异性位点重组技术切除SV40T基因，使细胞株回复到永生化前的状态，这一技术已被用于多种哺乳动物细胞的永生化。本研究在以往研究的基础上，构建了包括雌激素受体（ER）与重组酶Cre的融合基因Cre-ER、永生化基因SV40T、加强型绿色荧光蛋白（EGFP）与胸苷激酶（TK）的融合基因EGFP—TK以及重组位点loxP序列的可回复性永生化逆转录病毒载体，旨在为肝细胞或其他细胞的可回复永生化奠定基础。
- 陈耀凯李俊刚王宇明
- 关键词：肝细胞逆转录病毒科永生化
- 不同类型饲用作物营养价值的比较研究
- 对三种类型饲用作物杂交苏丹草—皖草2号、墨西哥玉米和粮饲兼用玉米—农大108进行比较研究表明:皖草2号鲜干物质产量最高,分别高出墨西哥玉米和农大108 41595km·hm、163098.8kg·hm和7215kg·hm...
- 张晓艳董树亭王空军胡昌浩张吉旺
- 关键词：饲用作物饲用营养价值
- 文献传递
- 可回复性永生化逆转录病毒载体phTERTGPlox的构建与表达被引量：2
- 2007年
- 目的探讨以hTERT作为永生化基因、嘌呤霉素乙酰转移酶基因puro作为筛选基因、加强型绿色荧光蛋白EGFP作为报道基因、loxP作为重组位点构建可回复性永生化逆转录病毒载体,为建立可回复性永生化细胞株奠定基础。方法用NheⅠ酶切线性化pBABE-puro产生两个相同的黏端,与loxP双链混合连接构建成载体pBABE-puro-lox;用EcoRⅠ和BamHⅠ酶切下逆转录病毒载体pBABE-hTERT-puro上约3.5kbhTERT基因片段,插入pBABE-puro-lox载体的相应酶切位点之间,重组的新载体称为phTERTPlox;扩增出无终止密码子的EGFP基因片段并插入phTERTPlox,正确构建的载体命名为phTERTGPlox。转染包装细胞PT67并用嘌呤霉素选择培养,在荧光显微镜下观察绿色荧光细胞,免疫组化染色检测hTERT基因的表达。结果EcoRⅠ和NheⅠ双酶切鉴定phTERTGPlox形成4.0kb和5.3kb两个片段,转染PT67细胞荧光显微镜下可见散在多处绿色荧光细胞,免疫组化染色结果显示稳定转染的细胞胞核呈阳性染色。结论成功构建并表达可回复性永生化逆转录病毒载体phTERTGPlox。
- 李俊刚陈耀凯王宇明
- 关键词：永生化基因
