国家教育部博士点基金(20050631007)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
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- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 稳定表达BCR／ABL的小鼠BaF3-P210细胞株的建立及其生物学特性的研究被引量：12
- 2008年
- 目的构建能稳定表达BCR/ABL的小鼠转化细胞株BaF3-P210,并初步探讨BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。方法将含有bcr/abl基因的逆转录病毒载体转染到包装细胞,收集病毒感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆,获得稳定表达BCR/ABL的转基因BaF3-P210细胞。用PCR、DNA测序、RT-PCR和Westernblot检测bcr/abl基因在靶细胞中的整合和表达;用台盼蓝细胞计数法、流式细胞仪(FCM)和MTT法研究BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。结果bcr/abl基因整合在BaF3细胞基因组中,BaF3-P210细胞能稳定表达bcr/abl基因及其蛋白。与对照组相比,BaF3-P210细胞增殖速度增快(P<0.05);G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞比例增高(P<0.05);经STI571处理后的细胞增殖抑制率为(54.08±1.90)%(P<0.05),早期凋亡率为(12.35±2.04)%(P<0.05)。结论成功构建的能稳定表达BCR/ABL的小鼠BaF3-P210转化细胞株具有增殖能力增强、细胞周期进程加速和对STI571敏感的恶性表型特征。
- 史梦冯文莉张文萍王小中黄世锋曾建明温健萍陶昆陈新敏曹唯希黄宗干
- 关键词：慢性粒细胞白血病BCR/ABL融合基因逆转录病毒载体
- Apg-2基因沉默对BaF3-MIGR1及BaF3-P210细胞增殖的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨Apg-2基因沉默对pMIGR1空载体感染的BaF3-MIGR1细胞及稳定表达Bcr-Abl融合基因的BaF3-P210细胞增殖的影响,为进一步研究Apg-2在Bcr-Abl阳性的CML细胞中的作用奠定基础。方法针对Apg-2基因609～629、845～865和2 110～2 130核苷酸合成3条shRNA序列Hspa41、Hspa42、Hspa43,同时合成阴性对照序列HspaHK,电穿孔转染BaF3-MIGR1和BaF3-P210细胞,经G418筛选稳定抑制细胞株,RT-PCR和Western blot检测细胞中Apg-2基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平;Am-blue法检测细胞增殖;甲基纤维素法检测细胞克隆形成能力;流式细胞技术检测细胞周期的变化。结果转染的3条shRNA质粒中,shRNA-Hspa42的干扰效果最佳。Apg-2表达抑制后,BaF3-P210细胞的增殖与克隆形成能力均明显下降(P<0.05),处于G1期细胞的百分率明显升高(P<0.05),处于S期的细胞百分率明显下降(P<0.05);而BaF3-MIGR1细胞的增殖与克隆形成能力均明显增强(P<0.05),处于S期的细胞百分率明显升高(P<0.05)。结论干扰Apg-2基因的表达可抑制Bcr-Abl阳性细胞BaF3-P210的增殖,而对Bcr-Abl阴性细胞BaF3-MIGR1的增殖起促进作用。
- 陈熙钟梁肖青李春莉李亚娟王海霞冯文莉
- 关键词：RNA干扰BCR-ABL细胞增殖
- bcr-abl对白血病K562细胞DNA损伤修复的影响
- 目的：从 DNA 损伤修复的角度探讨 bcr-abl 融合蛋白在慢性粒细胞白血病发病和耐药中的作用。方法：(1)建立 K562细胞的实验性 DNA 损伤模型：K562细胞分别用1、10、100、 1000μmol/L 终...
- 史梦冯文莉曾建明王小中张文萍黄世峰罗红伟朱喜丹
- 文献传递
- RNA干扰Apg-2基因表达对BaF3-MIGR1和BaF3-p210细胞凋亡的影响
- 2013年
- 目的探讨RNA干扰Apg-2基因表达对BaF3-MIGR1和BaF3-p210(Bp210)细胞凋亡的影响。方法取BaF3-MIGR1和Bp210、稳定抑制Apg-2表达的BaF3-MIGR1-Hspa42和Bp210-Hspa42细胞及阴性对照Bp210-HspaHK和BaF3-MIGR1-HspaHK细胞,采用瑞特染色法观察各组细胞的形态学变化;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;Western blot法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平。结果干扰Apg-2基因表达后,细胞出现肿胀、胞浆空泡、核染色质聚集、核碎裂,部分细胞可见凋亡小体,处于有丝分裂中期细胞明显减少。与BaF3-MIGR1和Bp210细胞相比,BaF3-MIGR1-Hspa42和Bp210-Hspa42细胞的凋亡率显著增加(P<0.05);Bcl-2蛋白的表达水平下调,Bax蛋白的表达水平无明显变化。结论干扰Apg-2基因表达可促进BaF3-MIGR1和Bp210细胞凋亡增加,其可能是通过降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平来实现的。
- 陈熙钟梁肖青王欣李春莉冯文莉
- 关键词：RNA干扰慢性粒细胞白血病BCR-ABL融合基因细胞凋亡
- 酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响被引量：1
- 2008年
- 目的建立人类慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562细胞在伊马替尼（Imatinib mesylate）处理前、后的DNA损伤模型，探讨伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响。方法用噻唑蓝（MTT）法确定伊马替尼预处理K562细胞的浓度；用免疫印迹法（Western blot）检测伊马替尼处理后K562细胞BCR／ABL的磷酸化状态，以反映BCR-ABL酪氨酸激酶活性受抑制情况；用彗星实验检测不同浓度过氧化氢（H2O2）诱导的K562细胞、伊马替尼预处理K562细胞的DNA损伤模型；用彗星实验对各组细胞在DNA损伤后的修复进行动态观测。结果MTT实验结果显示，伊马替尼预处理K562细胞的最佳终浓度为1μmol／L，作用时间24h；Westernblot实验结果显示，该浓度的伊马替尼可有效抑制BCR／ABL融合蛋白第177位酪氨酸激酶磷酸化，密度比为0．100±0．018，与对照组（0．425±0．039）相比，降低了（77．11±5．59）％，差异有统计学意义（t=4．57，P〈0．05）；彗星实验确定了各组细胞DNA损伤模型的建立条件，采用10μmol／L终浓度的H2O2对K562细胞和伊马替尼预处理后K562细胞进行染毒，H2O2作用温度和时间为4℃、10min。修复结果显示，经伊马替尼预处理的K562细胞修复时间为120min，与未处理组修复时间60min相比，前者DNA损伤修复时间明显延长（F=97．79，P〈0．05）。结论本研究建立了伊马替尼处理前、后的白血病K562细胞的DNA损伤模型，BCR／ABL融合蛋白的酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼能减弱K562细胞的DNA损伤后修复能力。
- 史梦冯文莉黄世峰曾建明王小中温健萍张文萍陶昆陈新敏曹唯希黄宗千
- 关键词：K562细胞哌嗪类DNA修复
- 顺铂对bcr/abl转化BaF3-P210细胞DNA损伤与修复能力的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:研究顺铂(cisplatin,Cis)对白血病BaF3-MIGR1细胞和bcr/abl转化BaF3-P210细胞中DNA损伤修复能力的影响。方法:锥虫蓝染色法检测2种细胞经0.5、1、5、10、20和40μg/mL Cis处理0、2、4、6、8、12、24和48 h时的存活率,免疫荧光法检测上述6种浓度Cis处理细胞8 h后诱导的γH2AX焦点数,Western印迹法检测DNA修复0、4、12和24 h后的γH2AX蛋白表达情况。结果:随着Cis处理时间和剂量增加,2种细胞的存活率降低,BaF3-P210转化细胞的存活率比BaF3-MIGR1细胞高(P<0.05);随着Cis剂量上升,2种细胞的γH2AX焦点数上升,BaF3-P210转化细胞的焦点数比BaF3-MIGR1细胞少(P<0.05);随着DNA修复时间延长,2种细胞的γH2AX蛋白表达均下调,BaF3-P210转化细胞的γH2AX蛋白表达量比BaF3-MIGR1细胞低。结论:Cis对BaF3-MIGR1细胞和BaF3-P210转化细胞的损伤呈时间、剂量效应,2种细胞的γH2AX焦点数与损伤之间存在剂量效应,bcr/abl可增强BaF3-P210转化细胞的DNA修复能力。
- 朱喜丹史梦袁颖曾建明黄世峰陶崑冯文莉
- 关键词：顺铂
- bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:建立稳定表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210的DNA损伤模型,探讨bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响.方法:彗星实验检测不同浓度H2O2诱导的BaF3-P210细胞的DNA损伤建立DNA损伤模型,以空载体转染BaF3-MIGR1细胞为对照;用彗星实验对两组细胞在DNA损伤后的修复进行不同时间段的动态观测.结果:彗星实验确定了细胞DNA损伤模型的建立条件是:采用50μmol/L终浓度的H2O2对BaF3-MIGR1细胞和BaF3-P210细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间均为4℃,10min.BaF3-P210细胞与BaF3-MIGR1细胞相比DNA损伤后修复时间缩短,在损伤后60min即可达到完全修复,而后者在损伤后120min才能完全修复(P<0.05).结论:建立了表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210细胞的DNA损伤模型,并发现bcr/abl融合蛋白可增强BaF3-P210细胞的DNA损伤后修复能力.
- 史梦冯文莉黄世峰曾建明王小中温健萍张文萍陶昆陈新敏曹唯希黄宗干
- 关键词：DNA损伤DNA修复
