江苏省普通高校研究生科研创新计划项目(CXZZ110815)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：陈海高向东姚文兵陆颖菲刘静娴更多>>
- 相关机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：江苏省普通高校研究生科研创新计划项目国家教育部博士点基金江苏省“青蓝工程”资助基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 蛋白质中赖氨酸衍生物定点引入的应用研究进展
- 2013年
- 赖氨酸是蛋白质的翻译后修饰位点以及多种酶活性中心关键残基,与蛋白质的结构与功能密切相关。应用遗传密码扩充技术,由来自于M.barkeri的吡咯赖氨酰tRNA合成酶(PylRS)和吡咯赖氨酰tRNA(tRNA-Pyl)构成非天然氨基酸定点引入系统,可以实现蛋白质中赖氨酸残基的定点修饰,在蛋白质中定点引入乙酰基等翻译后修饰基团、光反应基团、正交反应基团和光谱活性基团等。目前该系统已在大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞中及线虫体内成功地将10种赖氨酸衍生物编码入蛋白质中,为研究蛋白质翻译后修饰、定点标记和定点修饰、蛋白质相互作用提供了有力的工具。综述了应用该系统在蛋白质中定点引入赖氨酸衍生物的应用研究进展,并分析了该系统与目前最常用的系统相比的优势所在。
- 陆颖菲陈海姚文兵高向东
- 关键词：翻译后修饰
- 含有对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素的表达及纯化
- 2012年
- 优化定点引入对叠氮苯丙氨酸的詹氏甲烷球菌属正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统,使用优化后的正交系统在大肠杆菌内表达并纯化在特定氨基酸位点引入对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素突变体。首先将正交酪氨酰tRNA合成酶启动子-15区的TATAA序列突变为TTAA序列,同时将正交酪氨酰tRNA合成酶的第286位天冬氨酸突变为精氨酸以提高对抑制型tRNA反密码子CUA的识别力。然后将质粒pST和pET32a-mhEn转化到大肠杆菌DH10BDE3中得到重组工程菌。该重组菌在含有对叠氮苯丙氨酸的培养基中培养,并经IPTG诱导表达人内皮抑素突变体。利用镍亲和色谱纯化获得人内皮抑素突变体,纯度大于90%。通过对正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统的优化,有效提高了系统引入对叠氮苯丙氨酸的效率,人内皮抑素突变体的表达量有了显著提高。
- 刘静娴田浤姚文兵陈海尹骏高向东
