上海市卫生局科技发展基金(044100)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
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- 中国人类风湿关节炎与PADI4功能基因多态性及部分HLA-DRB1等位基因相关性研究被引量：10
- 2009年
- 目的分析类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）中4型肽精氨酸转亚胺基酶（peptidylargininedeiminaseⅣ，PADI4）功能基因多态性，探讨PADI4基因多态性与RA易感性的关系，以及编码与RA易感性相关HLA共同表位（sharedepitope，SE）的HLA—DRB1等位基因与PADI4基因多态性的相关性。方法采用逆转录合成cDNA、DNA测序和T载体克隆方法分析67例RA患者、81名正常人PAD髓基因外显子4个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs），包括PADi4_89＊A／G，PADI4_90＊C／T，PADI4_92＊C／G，PADI4_104＊C／T；采用PCR-序列特异性引物方法分析HLA—DRB1＊01、＊04、＊10基因型。结果RA患者PAD／489、90、104位基因多态性分布与正常对照组比差异有统计学意义，携带PADI4少见等位基因者对RA的危险性较携带常见等位基因者显著增加；分析编码SE等位基因与PADI4 SNPs的相关性发现，SE＋／PADI4_89G-携带者较SE-／PADI4_89e携带者发生RA的危险性高4．7倍（OR=4．7，95％CI：1．6～13．4，P=0．003），携带SE＋／PADI4_89G＋者高5．6倍（OR=5．6，95％CI：2．0～15．7，P=0．003）。在PADI4_90、92、104位均出现相似的情况。结论PADI4功能基因多态性与中国人RA的易感性相关，编码SE的HLA—DRB1等位基因仍然是RA的重要遗传标记，而且HLA—DRB1等位基因与PADI4的少见等位基因间可能存在一定的协同作用。
- 范列英宗明卢添宝杨蔺丁媛媛马建伟
- 关键词：类风湿关节炎
- 部分HLA-DRB1等位基因与抗环瓜氨酸肽抗体及类风湿因子的相关性被引量：3
- 2008年
- 目的探讨类风湿性关节炎(RA)中人类白细胞抗原(HLA)-DRB1共同表位(SE)与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、类风湿因子(RF)的相关性。方法研究对象包括120例RA患者、146名健康对照者,采用引物特异性聚合酶链反应(PCR-SSP)分析HLA-DRB1*01、*04、*10基因型,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CCP抗体,免疫比浊法测定RF含量。结果在RA组中CCP抗体阳性率(85.8%)与RF(77.5%)差异无统计学意义,但特异性显著高于RF。SE等位基因与CCP抗体一致率为75%,两者间存在相关性,且在CCP抗体阳性的RA中SE阳性者CCP抗体水平[(158.5±147.1)RU/mL]显著高于SE阴性者[(88.2±67.0)RU/mL]。在CCP抗体阳性RA患者中,SE等位基因与RF无显著相关性。结论SE等位基因与增加CCP抗体产生存在显著相关,与RF无相关性,CCP抗体与RF无相关性。
- 范列英宗明丁媛媛马建伟卢添宝
- 关键词：抗环瓜氨酸肽抗体人类白细胞抗原DRB1基因类风湿因子类风湿性关节炎
- RNAi表达载体干扰四型肽精氨酸脱亚氨基酶基因在HL-60细胞系中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的:设计针对PADI-4基因的RNAi表达载体,抑制PADI-4基因在HL-60细胞中的表达,初步确定PADI-4基因在类风湿性关节炎发生发展中的作用,为后续研究奠定实验基础。方法:设计并合成4对针对PADI-4基因编码区的核苷酸链,核苷酸链经体外退火后形成双链SiRNA,克隆进入pSiRNA-hH1neo G2空载体后转化入GT116细胞,通过蓝白斑筛选后,挑取白斑进行扩增,抽提质粒并对重组质粒进行双酶切分析。以脂质体转染法,分别将pSiRNA-hH1neo G2空载体和4个重组质粒载体转染进入HL-60细胞系,于转染的第3、5、7、10、14天后收集细胞,抽提细胞总RNA后,反转录成cDNA,用Real-time PCR技术检测各实验组HL-60细胞内PADI-4基因mRNA水平的表达情况,并做统计分析。结果:经Acc65Ⅰ和HindⅢ双酶切鉴定,重组质粒中已经插入目的片段,为合格质粒;转染pSiRNA表达载体后,HL-60细胞系中PADI-4基因mRNA表达水平下降,其中以第3号载体的干扰效果最优,干扰效率达到62%。结论:成功构建针对PADI-4基因的pSiRNA表达载体,并且筛选出干扰效率最好的载体,为后续研究PADI-4基因在类风湿性关节炎中的作用奠定实验基础。
- 张慧范列英卢天宝宗明吕红根杨蔺
- 关键词：SIRNARNA干扰HL-60细胞系
- 肽精氨酸脱亚胺基酶Ⅳ基因表达与抗环瓜氨酸肽抗体的相关性研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨类风湿性关节炎（RA）中四型肽精氨酸脱亚胺基酶（peptidylarginine deiminaseIV，PAD14）基因表达与白细胞抗原共同表位（shared epitope，SE）、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、类风湿因子（RF）的相关性，编码RA易感。方法用实时荧光定量逆转录（FQ—RT）-PCR检测70例RA患者、38例疾病对照患者和91名健康体检者外周血单个核细胞中PAD14基因的表达水平，巢氏PCR分析HLA-DRB1＊01、＊04、＊10基因型，ELISA测定血清抗CCP抗体含量，免疫比浊法测定血清RF含量。结果RA组PADl4基因相对表达量为3．43±1．97，分别高于健康对照组的1．524-0．95（t=-8．259，P=0．000）和疾病对照组的1．41±0．79（t=-8．357，P=0．000）。RA患者抗CCP抗体阳性组（3．40±1．97）与阴性组PAD14表达量差异无统计学意义（3．78±2．15，t=0．453，P=0．688），疾病对照患者抗CCP抗体阳性组（1．34±0．93）与阴性组PAD14表达差异也无统计学意义（1．25±0．79，t=0．568，P=0．476）；RA组和健康对照组中SE等位基因阳性与阴性者PAD14表达量（RA组：3．88±1．81，1．02±0．47；健康对照组：1．52±0．95，1．07±0．70）比较，差异有统计学意义（RA组t=-10．382，P=0．000；健康对照组t=-2．457，P=0．016）；RA组内RF阳性者与RF阴性者中PAD14表达差异有统计学意义（t=-3．521，P=0．001），但疾病对照组与健康对照组比较，差异无统计学意义（t值分别为0．385和-1．144，P均〉0．05）。RA组中PAD14表达量与抗CCP抗体含量间的差异无相关性（r=0．083，P=0．640），在抗CCP抗体阳性状况下SE表型（t=-0．690，P=0．493）、RF变化（t=1．330，P=0．189）不影响RA患者血清中抗CCP抗体浓度。结论RA患者体内存在PAD14过量表达，PAD14基因表达量与SE等位有显著相关性，且与RF也有一定相关性，抗CCP抗体含量与PAD14表达量无相关性。
- 范列英宗明孙立山韩捷杨蔺卢添宝叶勤
- 关键词：抗环瓜氨酸肽抗体HLA-DR抗原
- 四型肽精氨酸转亚胺基酶功能基因多态性及其表达与类风湿关节炎相关性研究被引量：4
- 2008年
- 目的探讨四型肽精氨酸转亚胺基酶（PADI4）功能基因多态性及其表达与类风湿关节炎（RA）的相关性。方法采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测70例RA患者、81名健康对照者外周血单个核细胞（PBMC）中PADI4基因的表达水平，采用DNA测序和TA载体克隆方法分析PADI4基因外显子内第89、90、92、104位点单核苷酸多态性（SNPs）。结果4个SNPs中除了PADI4_92位点外，携带PADI4少见等位基因者发生RA的易感性显著高于携带常见等位基因者；在所研究对象中分别由4个位点上的常见等位基因（ACCC）和少见等位基因（GTGT）组成的功能基因型为主要基因型。与ACCC型比较，携带GTGT型者发生RA危险性显著增高（P〈0．01）。RA组PADI4基因表达水平显著高于正常对照组（P〈0．05），并且在RA组和对照组中携带PADI4少见等位基因者PADI4的表达水平显著高于携带常见等位基因者。结论PADI4功能基因多态性及其基因表达与中国人RA易感性相关，PADI4功能基因多态性影响基因表达。
- 范列英卢添宝宗明韩捷马建伟丁媛媛叶勤
- 关键词：基因表达
