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国家科技重大专项(2008zx10004-012)
作品数:
1
被引量:5
H指数:1
相关作者:
李凤娟
阚飙
王多春
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相关机构:
中国疾病预防控制中心传染病预防控制所
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发文基金:
国家自然科学基金
国家科技重大专项
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相关领域:
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2014
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非O1非O139群霍乱弧菌多重PCR和SYBRGreen实时PCR检测方法的建立
被引量:5
2014年
目的建立检测非01非0139群霍乱弧菌的多重PCR和SYBRGreen实时PCR方法。方法分别以霍乱弧菌的外膜蛋白基因(omplV)、01和0139群O抗原编码基因(帕)设计引物,建立多重PCR和SYBRGreen实时PCR方法,评价两种方法检测非01非0139群霍乱弧菌的特异性、重复性和一致性及最低检测菌量。结果建立了检测非01非0139群霍乱弧菌的多重PCR和SYBRGreen实时PCR方法,根据特异性条带(多重PCR)和特异性熔解温度(SYBRGreen实时PCR),两种方法均能特异性检测非01非0139群霍乱弧菌,并能鉴别其他弧菌(5种)和肠道杆菌(3种);两种方法的最低检测菌量分别为7×10。cfu/ml(多重PCR)和7×10^2cfu/ml(SYBRGreen实时PCR),差异有统计学意义(P〈O.05);对实时PCR的重复性检测,批内变异系数(cV)为0.22%~0.92%,批间CV为O.27%~1.41%;经370株非01非0139群霍乱弧菌的检测,两种方法的一致性均为100%。结论建立的两种方法其特异性、敏感性及重复性均好,可适用于不同条件下非01非0139群霍乱弧菌的检测和鉴定。
李凤娟
阚飙
王多春
关键词:
多重PCR
SYBR
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