福建省科技计划项目(2009N2003)
- 作品数：8 被引量：27H指数：3
- 相关作者：林天龙刘晓东龚晖许斌福葛均青更多>>
- 相关机构：福建省农业科学院福建农林大学深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：福建省科技计划项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 迟钝爱德华菌鞭毛基因克隆表达及其免疫学活性分析
- 2012年
- 从鳗源迟钝爱德华菌Edwardsiella tarda菌株ETY的基因组克隆到其鞭毛基因(flagella gene,ETF)。该基因开放阅读框为1 257bp,编码419个氨基酸,推导的蛋白分子量为43.951kD。ELISA和Western-blotting试验证实表达的蛋白与迟钝爱德华菌菌株ETY表达的鞭毛蛋白具有相同的抗原性和免疫原性。免疫攻毒保护试验证明:经表达产物(ETF-rxA融合蛋白)与ISA佐剂结合免疫的日本鳗鲡对爱德华菌ETY的免疫保护率可达到100%。本试验首次成功实现了ETF基因的高效表达,并初步证实了迟钝爱德华菌鞭毛可诱导产生免疫保护,为进一步研制合适的高效的迟钝爱德华菌鞭毛亚单位疫苗奠定了基础。
- 张晓佩方勤美龚晖林天龙
- 关键词：鞭毛克隆
- 鳗鲡疱疹病毒ORF95基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：6
- 2012年
- 鳗鲡疱疹病毒(Anguillae herpesvirus,AngHV)是淡水鳗鲡的主要病毒性疾病病原之一。根据鳗鲡疱疹病毒(AngHV-1)的基因组序列(GenBank:NC-013668)设计引物,扩增鳗鲡疱疹病毒福建株(AngHV-FJ)ORF95基因的开放阅读框序列,克隆至pMD19-T载体;经限制性内切酶酶切和测序鉴定,进一步将其克隆至原核表达载体pET-32a,构建了表达质粒32a-ORF95,将其转化表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导,实现了ORF95在大肠杆菌中的高效表达。在0.1mmol.L-1 IPTG、23℃诱导14h的条件下,可溶性ORF95蛋白的表达量较高,经镍柱纯化获得了高纯度的融合蛋白。
- 李友娟葛均青宋铁英林天龙
- 关键词：基因克隆原核表达
- 提高迟钝爱德华氏菌细胞生物量的发酵条件研究被引量：1
- 2010年
- 以胰大豆蛋白胨培养基(TSB)为基础培养基,采用单因素和正交试验方法优化提高鳗源迟钝爱德华氏菌ETY细胞生物量的培养基与培养条件。通过试验,获得迟钝爱德华氏菌ETY的优化培养基配方为1 000mL水加入葡萄糖3.0g、胰蛋白胨10.0g、鱼粉蛋白胨10.0g、磷酸氢二钾2.5g、氯化钠5.0g;培养条件优化结果为接种量8%、温度25℃、pH 7.5、转速200r.min-1。迟钝爱德华氏菌ETY在此条件下培养20h,细胞生物量达1.575×1010 cfu.mL-1,较优化前培养的细胞生物量5.200×109 cfu.mL-1提高3倍。每吨液体培养基的成本较优化前下降41.36%。
- 李颖邱宏端龚晖谢航许斌福刘晓东
- 关键词：迟钝爱德华氏菌发酵
- 中华鳖虹彩病毒单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析被引量：5
- 2009年
- 以纯化的中华鳖虹彩病毒为抗原免疫Balb／C小鼠，取免疫鼠脾细胞经杂交融合获得了8个能稳定分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚级份分析结果表明，Mab2A4属IgA，Mab8E1是IgG2a，其他的6株单抗Mab1D3、Mab2H1、Mab3A1、MaMB5、Mab5E1和Mab6F2均为IgG1。酶联免疫吸附剂测定（ELISA）分析表明，8株单抗均能特异性地识别中华鳖虹彩病毒，与EPC、CO、FHM等宿主细胞不产生交叉反应，腹水抗体的ELISA效价在10^5～10^6。IFA分析表明，8株单抗中仅Mab5E1没有免疫荧光反应特性，其余7株单抗均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。中和试验结果证实8株单抗均没有中和病毒的特性。应用Western—blotting进行中华鳖虹彩病毒的抗原表位初步分析，结果显示：Mab1D3和Mab2A4分别识别分子量为84ku和35ku中华鳖虹彩病毒结构蛋白，Mab3A1能够同时识别分子量分别为14ku和16ku的两条多肽，说明这3株单抗结合位点是非构象依赖性抗原决定簇，其余单抗不具备Western—blotting反应特性。这些结果提示上述单抗对中华鳖虹彩病毒抗原特异、灵敏，可用于中华鳖虹彩病毒的检测和结构蛋白分析。
- 朱春华刘荭刘晓东杨金先郑在予林天龙
- 关键词：中华鳖虹彩病毒单克隆抗体抗原
- 多抗技术对多种鱼类血清免疫球蛋白的研究
- 2011年
- 亲和层析纯化鳜鱼血清免疫球蛋白,制备针对鳜鱼血清免疫球蛋白的兔多克隆抗体,采集常见经济鱼类血清25种,利用优球蛋白法纯化血清,通过间接ELISA的方法筛选与兔抗鳜鱼Ig反应的鱼类血清,结合变性还原条件与非变性非还原条件下的蛋白印迹试验显示:制备的兔抗鳜鱼Ig识别鲈形目中鳜鱼、加州鲈鱼、卵形鲳鲹、尼罗罗非鱼、花鲈、红罗非鱼、青石斑鱼、大黄鱼、黑鲷、斜带髭鲷、美国红鱼,鲽形目中的牙鲆、大菱鲆,鮋形目中的褐菖鮋血清免疫球蛋白的重链与轻链。而与鲤形目中的5种鱼,鲇形目中的4种鱼,鳗鲡目中的海鳗、欧洲鳗鲡反应条带较为复杂。嗜水气单胞菌外膜蛋白免疫刺激复合物(ISCOMs)免疫尼罗罗非鱼,间接ELISA法检测免疫组血清中的抗体,利用兔抗鳜鱼Ig多克隆抗体作为二抗,结果显示,与对照组相比,免疫组有较高的抗体水平。
- 王希龙龚晖林能锋王凡刘晓东林天龙
- 关键词：鱼类血清IG多克隆抗体蛋白印迹
- 赤点石斑鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析被引量：1
- 2011年
- 赤点石斑鱼血清免疫球蛋白经饱和硫酸铵沉淀,Sephrose-4B柱提纯后免疫BALB/c小鼠。经细胞融合和抗体分泌细胞筛选,获得2株抗石斑鱼免疫球蛋白的单克隆抗体,分别命名为Mab-8D6和Mab-2D3,两株单抗的亚级份均为IgG1,腹水抗体的ELISA效价为106,对纯化的石斑鱼免疫球蛋白的检测灵敏度为62ng,其中Mab-2D3只与石斑鱼免疫球蛋白发生特异性结合,而Mab-8D6除了与石斑鱼免疫球蛋白产生反应外,还能与褐菖鲉、鲈鱼、大黄鱼等海水鱼血清免疫球蛋白发生交叉反应,与锦鲤、欧洲鳗鲡血清免疫球蛋白产生微弱交叉反应。2株单抗Western-blotting反应特性相同,都只能识别非变性非还原条件下790kD大小的石斑鱼免疫球蛋白,而不能识别在变性条件下石斑鱼免疫球蛋白的重链和轻链。以上结果表明,Mab-2D3和Mab-8D6两株单抗所对应的抗原表位不同,Mab-2D3特异性强,所对应的抗原表位是石斑鱼免疫球蛋白所特有的;而Mab-8D6交叉反应结果提示石斑鱼与被测的几种海水鱼的免疫球蛋白进化亲缘关系较近。
- 陈红燕许斌福林能锋刘晓东陈强林天龙
- 关键词：赤点石斑鱼免疫球蛋白单克隆抗体
- BSA-ISCOMs对大黄鱼免疫机能及抗病力的影响被引量：2
- 2013年
- 利用免疫刺激复合物(ISCOMs)非特异免疫增强作用和可经黏膜呈递的特点,将BSA制备成ISCOMs(BSA-ISCOMs),大黄鱼连续口服免疫10d。免疫后第15d和30d采血,测血清部分非特异性免疫指标。结果显示,免疫后第15d,试验组血清SOD、补体C3、总蛋白含量显著高于对照组(P<0.05),γ-干扰素高于对照组,但差异不显著(P>0.05),溶菌酶则显著低于对照组(P<0.05);免疫后第30d,除溶菌酶外,试验组各指标与对照组差异不显著(P>0.05)。免疫完成后第30d,创伤弧菌(Vibrio vulnificus)攻毒结果显示,对照组死亡率100%,试验组死亡率26.7%,相对免疫保护率为73.3%。因此,口服BSA-ISCOMs在一定药效期限内能有效提高大黄鱼的免疫机能,增强抗病能力。
- 陈秀霞黄殿盛柯翎许斌福方冬兰龚晖
- 关键词：大黄鱼非特异性免疫
- 鳗鲡病毒性疾病病料中鳗鲡疱疹病毒的PCR检测被引量：19
- 2012年
- 结合流行病学、临床症状、病理变化等对2006～2012年收集的发病濒死鳗鲡病料进行分类,确定疑似鳗鲡病毒性疾病病料36份,提取病料主要内脏器官(肝、脾、肾)DNA,进行鳗鲡疱疹病毒的PCR检测。从"脱粘败血病"、"红头病"、"烂鳃病"的鳗鲡病料中检测到6份阳性结果,表明这些疾病可能是由鳗鲡疱疹病毒引起的。DNA测序结果显示,扩增的病毒DNA聚合酶基因片段与分离自台湾、日本及欧洲的病毒株完全一致,表明这些病毒可能为同一病毒株。
- 葛均青杨金先李友娟陈强林天龙
- 关键词：鳗鲡
