河南省科技攻关计划(0424410033)
- 作品数：5 被引量：23H指数：3
- 相关作者：李珊珊卢创新阎爱华郭燕萍王新华更多>>
- 相关机构：郑州大学第一附属医院郑州大学奥斯陆大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家教育部“211”工程更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 反转录病毒载体介导RNA干扰抑制EphA2在Hela细胞中的蛋白表达
- 2007年
- 目的:课题前期发现EphA2和配体EphrinAl在宫颈鳞癌细胞和肿瘤相关血管内皮细胞均呈高表达,为基因治疗宫颈癌提供了理想的靶向。以此为基础,利用反转录病毒载体介导的RNA干扰抑制EphA2在Hela宫颈癌细胞中的蛋白表达。方法:实验于2006-01/06在河南省肿瘤病理重点实验室完成。①实验材料:PA317细胞、Hela229细胞购自上海生化细胞所,小鼠NIH3T3细胞为本室保存。EphA2兔抗人多克隆抗体,Actin兔抗人多克隆抗体(美国SantaCruz公司)。②实验方法:从EphA2的mRNA全序列中筛选出1个19nt的靶序列,设计双链发夹结构。以siRNA互补双链寡核苷酸,构建反转录病毒表达载体pSIREN-EphA2,提取质粒,用BglⅡ和EcoRⅠ双酶切进行鉴定。选择经酶切鉴定的正确克隆测序。挑选pSIREN-EphA2抗性克隆细胞扩增,检测转染后Hela细胞中EphA2蛋白的表达水平。结果:①pSIREN-EphA2重组质粒的酶切鉴定:双酶切后形成328bp和6182bp两条电泳条带。②pSIREN-EphA2重组质粒测序:结果与已知序列完全一致。③EphA2蛋白的表达:经Westernblot分析,重组pSIREN-EphA2转染的Hela细胞中EphA2蛋白表达水平明显降低。结论:通过反转录病毒载体介导的RNA干扰,能够抑制EphA2在Hela细胞中的蛋白表达,为以EphA2为靶点的宫颈癌基因治疗提供新的思路和手段。
- 吴丹李珊珊索振河
- 关键词：EPHA2反转录病毒载体RNA干扰
- 食管鳞癌细胞系中STAT3的激活及VEGF和Bcl-2的表达被引量：9
- 2006年
- 目的:探讨信号转导子及转录活化子3(STAT3)在食管鳞癌细胞系中的激活情况以及STAT3与其下游靶基因产物VEGF和Bcl-2的表达情况。方法:采用免疫细胞化学法和Westernblotting法检测两株食管鳞癌细胞系中STAT3及p-Stat3(STAT3蛋白的活化形式),VEGF和Bcl-2蛋白的表达情况,并采用凝胶电泳迁移率(elec-trophoreticmobilityshiftassay,EMSA)法检测两株食管鳞癌细胞核中STAT3与DNA的结合活性。结果:食管鳞癌细胞中存在激活的STAT3信号传导通路,通路蛋白STAT3、p-STAT3及其下游靶基因产物VEGF,Bcl-2在细胞中均有表达,蛋白在细胞核中具有较高的DNA结合活性。结论:两种食管鳞癌细胞系中均有组成性激活的STAT3信号通路,提示STAT3信号通路可能在食管鳞癌发生、发展中起重要作用。
- 王新华李珊珊阎爱华卢创新郭燕萍
- 关键词：食管鳞癌血管内皮生长因子BCL-2
- RNA干扰抑制EphA2癌基因在结肠腺癌HCT-8细胞系中的表达被引量：8
- 2006年
- 目的利用RNA干扰(RNAi)技术抑制EphA2癌基因在结肠腺癌HCT8细胞系中的表达,以期为肿瘤的基因治疗提供新的思路和手段。方法构建逆转录病毒表达载体pSIRENEphA2,应用逆转录病毒载体介导的RNAi技术抑制EphA2癌基因在结肠腺癌细胞HCT8中的表达,同时利用Western免疫印迹和免疫组织化学SP法分别检测转染后HCT8细胞中EphA2蛋白的表达水平。结果从EphA2mRNA序列中筛选出有效的siRNA序列,并设计了互补双链寡核苷酸发夹结构,成功构建了EphA2siRNA的逆转录病毒表达载体,重组逆转录病毒载体pSIRENEphA2经酶切鉴定结果正确;测序分析证实插入的EphA2siRNA的方向及序列正确。Western免疫印迹和免疫组织化学方法分析,与对照空载体及未转染细胞相比,重组pSIRENEphA2转染的HCT8细胞中EphA2蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论通过逆转录病毒载体介导的RNAi能够抑制HCT8细胞中EphA2的蛋白表达,为以EphA2为靶向的结直肠癌的基因治疗提供了新的思路和手段。
- 陈壬寅李珊珊
- 关键词：结肠肿瘤RNA干扰
- 转录调节因子Ets-1在结直肠癌组织中的表达
- 2007年
- 目的:研究Ets-1在结直肠组织中的表达,探讨其与结直肠癌发生和发展的关系。方法:采用免疫组织化学S-P法,检测Ets-1在80例病理活检和手术切除结直肠癌标本中的表达。结果:Ets-1蛋白在结直肠癌组织中的表达明显高于其正常黏膜组织(P<0.05),在癌深度浸润组的表达明显高于浅度浸润组(P<0.05),而与肿瘤的分化程度和淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:Ets-1蛋白的高表达可能与结直肠癌的癌变及浸润的发生有关。
- 赵阿红陈壬寅宋一民尹玉慧
- STAT3在食管鳞癌细胞系中的激活及其靶基因产物的表达被引量：8
- 2006年
- 目的分析食管鳞癌细胞系中信号传导及转录活化因子3(STAT3)在不同食管鳞癌细胞系中的激活状态及其对食管鳞癌细胞的生存及转化作用,探讨是否在不同类型的食管鳞癌细胞系中存在组成性激活的STAT3信号通路。方法采用Western blotting检测两株食管鳞癌细胞中STAT3及磷酸化STAT3(p-STAT3),血管内皮生长因子(VEGF)和 BCl-2蛋白的表达情况,并采用凝胶电泳迁移率(EMSA)法检测两株食管鳞癌细胞核中p-STAT3蛋白与其特异的 DNA序列结合能力。RT-PCR法检测STAT3、VEGF7和BCl-2 mRNA的表达。结果食管鳞癌细胞中存在激活的STAT3 信号传导通路,通路蛋白STAT3、p-STAT3及其下游靶基因产物VEGF、BCl-2在两种食管鳞癌细胞中均有表达, p-STAT3蛋白在细胞核中具有较高的DNA结合活性。RT-PCR结果表明,STAT3、VEGF和BCl-2的mRNA在细胞中也存在过表达。结论本研究发现在两种食管鳞癌细胞系中均有组成性激活的STAT3信号通路,提示STAT3信号通路可能在食管鳞癌发生、发展中起重要作用。
- 王新华李珊珊阎爱华卢创新郭燕萍
- 关键词：食管鳞癌血管内皮生长因子BCI-2
