广东省自然科学基金(36835)
- 作品数：17 被引量：118H指数：6
- 相关作者：朱兴全邹丰才林瑞庆陈宁宋慧群更多>>
- 相关机构：华南农业大学江苏农牧科技职业学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家杰出青年科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- SRAP分子标记及其应用概述被引量：54
- 2006年
- 序列相关扩增多态性(SRAP)是近年来发展起来的一种新型分子标记系统,它具有简便、中等产量、高共显性、重复性、易于分离条带及测序等优点,最大的特点是它针对的是基因的阅读框区域(ORFs)。SRAP标记中,引物的设计是关键,它是基于两个引物的扩增,上游引物长17bp,对外显子进行特异扩增,下游引物长18bp,特异扩增的是内含子及启动子区域,由于个体不同以及物种之间的内含子、启动子之间间隔长度不同而产生多态性。两个引物均由5P端14～15bp的核心序列,和3’端3个选择性碱基组成,其中核心序列又由长为10～11bp的无特异性的填充序列以及CCGG(正向引物中),或AATT(反向引物中)组成。且正向和反向引物中的填充序列必须不同。扩增的过程采用复性变温法,前5个循环复性温度为35℃,后30～35个循环则为50℃,扩增后的DNA片段可用聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分离,EB、银染或放射自显影检测。目前SRAP已开始在植物种质资源鉴定评价、种缘进化关系、遗传图谱构建、基因定位、重要性状标记以及比较基因组学方面得到成功应用。
- 李巧燕林瑞庆朱兴全
- 关键词：分子标记PCR
- 利用抑制消减杂交技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因被引量：22
- 2005年
- 为了筛选线虫的性别特异性基因,为线虫乃至寄生虫的性别控制提供新的工具,本研究选择猪蛔虫(Ascarissuum)为模型,分别提取雌性和雄性成虫的mRNA后,采用Clontech公司的PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构建猪蛔虫雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库,并采用地高辛(DIG)标记的cDNA探针进行Southern杂交检验所构建文库的消减效率。结果表明,雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库均具有很强的性别特异性。随机从各库中各抽取25个克隆进行测序及在线BLAST分析,发现在25个雄虫ESTs中有20个已知ESTs,5个新的ESTs;25个雌虫ESTs中有11个已知ESTs,还有8个可能为新基因。猪蛔虫性别差异表达的消减cDNA文库的成功构建,为进一步研究性别特异基因的功能奠定了基础。
- 吴绍强邹丰才翁亚彪宋慧群林瑞庆朱兴全
- 关键词：抑制消减杂交技术蛔虫CDNA文库
- 表达谱基因芯片技术及其在兽医学上的应用
- 20世纪90年代初兴起的人类基因组计划(HGP),其研究重心现已从结构基因组迈向了功能基因组的研究。揭示生命的本质,阐明基因的功能是后基因时代的重要任务,随之而产生的基因芯片(gene chip)技术,为功能基因组学研究...
- 邹丰才吴绍强李明伟朱兴全
- 文献传递
- 表达谱基因芯片技术及其在兽医学上的应用被引量：5
- 2005年
- 邹丰才吴绍强李明伟朱兴全
- 关键词：基因芯片技术表达谱功能基因组学研究人类基因组计划基因组测序
- 寄生虫功能基因组学研究的几种方法
- 随着人类基因组计划及各种模式生物基因组计划的完成,对生物基因组的研究已从结构基因组学逐步转向了功能基因组学。对于寄生虫而言,由于其基因众多,生活史较复杂,而体外培养技术还不完善;相对于其它学科,其功能基因组学的研究进展较...
- 朱兴全黄翠琴邹丰才林瑞庆陈宁周鹏宋慧群
- 文献传递
- AFLP技术及其在寄生虫学上的应用被引量：1
- 2005年
- 扩增片断长度多态性(amplifiedfragmentlengthpolymorphism,AFLP)是1993年由Zabeau和Vos犤1犦发明并发展起来的一种检测DNA多态性的新方法。它克服了限制性片段长度多态性(RFLP)和PCR的缺点,结合了RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性。该方法问世后很快应用于动物犤2～10犦、植物犤11～14犦、微生物犤15～19犦、寄生虫犤5,16,18,20犦等生物的遗传育种、构建遗传图谱、遗传多样性分析、基因定位、分类等方面的研究。本文简要介绍了这种技术的原理、特点及在寄生虫学上的应用。
- 魏冬霞邓艳马妮妮朱兴全
- 关键词：AFLP技术寄生虫学
- 单核苷酸多态性及其检测方法被引量：5
- 2005年
- 单核苷酸多态性( single nucleotide polymorphism s,SNP)是指一些物种正常个体的基因组DNA中单碱基对位置存在序列的变异(等位基因) ,是最新发展起来的第3代遗传标记,在遗传育种、基因作图、基因定位等方面具有广泛的作用。作者简要介绍了SNP的特点。
- 邓艳魏东霞朱兴全
- 关键词：单核苷酸多态性寄生虫
- 应用cDNA微阵列芯片技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因的研究被引量：9
- 2006年
- 采用cDNA微阵列芯片技术,从所构建的猪蛔虫雌、雄成虫cDNA消减文库分别挑取1 044和1 119个克隆,PCR扩增其插入片段,经纯化后点样于预先处理好的基片上(双点杂交),制备成cDNA微阵列芯片。将分别标记荧光素Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的雌虫和雄虫cDNA探针,与制备好的cDNA芯片杂交(平行进行反标杂交试验)。根据每个点杂交后的Ratio值,筛选出双点杂交和正反标中都同时具有表达差异的基因克隆共1 559个。将表达差异最明显的前831个克隆进行测序,获得720个有效序列,经生物信息学分析发现,雄虫特异表达的主要精子蛋白和雌虫特异表达的卵巢信息蛋白的基因序列多数与新杆属线虫存在同源性,有31个可能是新的ESTs。性别差异表达基因及其相关生物信息的获得为下一步研究基因功能奠定了基础。
- 邹丰才吴绍强廖申权林瑞庆李明伟宋慧群黄翠琴朱兴全
- 关键词：表达谱分析
- 单核苷酸多态性及其检测方法
- 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)是指一些物种的正常个体的基因组DNA 中单碱基对位置存在序列的变异(等位基因)。作为第三代遗传标记,它具有数量多,分布广泛,密度高,...
- 邓艳魏冬霞朱兴全
- 文献传递
- 猪蛔虫不同发育期幼虫的收集方法研究被引量：3
- 2006年
- 目的研究猪蛔虫不同发育期幼虫的收集方法。方法采用7.5%次氯酸钠氧化感染期蛔虫卵,37℃过夜后,用灭菌生理盐水离心数次,充分洗去次氯酸钠,将沉淀用玻璃珠在振荡器上振荡至全部卵壳破裂,幼虫孵出。用淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法将幼虫与卵壳分离,最后收集底层的脱鞘第三期(L3)幼虫。在贝尔曼原理的基础上,在漏斗中加入低浓度(0.4%)琼脂凝胶,分别将绞碎的含幼虫的猪肝、肺和小肠内容物及其肠粘膜平均分装在数个漏斗中,放入40℃温箱中孵育3h,待大部分幼虫游离到管底,最后用400目分样筛过滤分离肝中的L3,用300目分样筛过滤分离肺中的L3,用200目分样筛过滤分离肠内容物及其粘膜上的第四期幼虫(L4)。结果次氯酸钠氧化加玻璃珠震荡法能够使感染期蛔虫卵几乎完全脱壳,配合淋巴细胞分离液的密度梯度离心法能收集到纯度较高且活力较强的体外脱鞘幼虫。与传统贝尔曼氏分离法相比,采用低浓度琼脂糖凝胶液能获得杂质少、高纯度的猪内脏中的不同发育期幼虫。结论次氯酸钠氧化加玻璃珠震荡法是体外脱鞘分离感染期幼虫的一种较为理想的方法,通过在漏斗内加低浓度的琼脂凝胶的方法是从猪内脏中获得高纯度的不同发育期幼虫的一种有效的方法。本方法不仅适用于猪蛔虫,而且对其它动物和人的寄生线虫幼虫的收集也有参考价值。
- 黄翠琴陈宁邹丰才林瑞庆朱兴全
- 关键词：次氯酸钠玻璃珠琼脂凝胶
