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江苏省医学重点学科基金(200723)
作品数:
1
被引量:1
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相关作者:
徐康
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宣世海
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2010
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纳米金辅助不对称PCR扩增幽门螺杆菌23S rRNA基因的优化和建立
被引量:1
2010年
目的:建立纳米金辅助不对称PCR方法扩增幽门螺杆菌23S rRNA基因,为建立基因芯片法检测幽门螺杆菌耐药基因提供试验平台。方法:将幽门螺杆菌23S rRNA基因转化至感受态大肠杆菌JM109,小量抽提阳性构建质粒DNA,以质粒DNA为模板,设计引物对23S rRNA基因进行不对称PCR扩增。对PCR条件中引物浓度及浓度比例、纳米金浓度等进行优化。结果:限制性引物与非限制性引物浓度比例为1∶60,限制性引物与非限制性引物浓度分别为0.04pmol/L、2.4pmol/L时可获得理想的单链和双链DNA,纳米金浓度为0.8nmol/L时非特异性产物最少,PCR的扩增效率最高。结论:通过对PCR扩增条件的优化,确立了扩增幽门螺杆菌23S rRNA基因纳米金辅助不对称PCR方法的最佳条件,为建立基因芯片法检测幽门螺杆菌耐药基因奠定基础。
宣世海
周洁
周玉贵
王琴
崔亚林
徐康
李明兰
王惠民
关键词:
螺杆菌
克隆
纳米金
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