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悬浮搅拌法培养和扩增诱导多能干细胞被引量：1: 2013年; 目的建立一种新的搅拌培养法，大量培养、快速扩增诱导多能干细胞（iPSCs）。方法采用搅拌式细胞培养器悬浮培养iPSCs，每4d为1个周期，第4天检测细胞聚集球的直径；经8次传代后，计算细胞倍增时间和细胞数量，经实时定量聚合酶链反应（Real一timePCR）检测多能性标志物0ct4、Nanog和性别决定区Y框蛋白2（SOX2）mRNA表达，免疫荧光法检测0ct4蛋白表达，组织染色法检测碱性磷酸酶（AIJP）活性。结果搅拌式培养iPSCs，细胞倍增时间为（20．82±1．27）h；培养1d后，细胞形成微小聚集球，经1个周期4d的培养，细胞球直径达到最大（184．1±7．2）±m，经传代8次，可以扩增到起始细胞数量的1014倍；Real-timePCR和免疫组织化学结果显示这些iPSCs仍然高表达多能性标记。结论这种新方法能够快速、大量扩增iPSCs，并且这样培养的iPSCs能够保持其多能性。; 俞悦游伟王学浩; 关键词：多能干细胞细胞扩增

猪诱导多能干细胞的制备和无饲养层培养: 2013年; 目的建立猪诱导多能干细胞（piPSCs）系，优化培养条件。方法猪皮肤成纤维细胞（PF）经慢病毒介导表达人多能性因子Oct4（hOct4）、人性别决定区Y框蛋白2（hSox2）、人Kruppel样因子4（hKlf4）和he—Myc，诱导成为piPSCs，挑选克隆培养于piPSCs培养基中，观察piPSCs生长状态；免疫荧光法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测piPSCs多能性基因表达；观察拟胚体（EB）、畸胎瘤形成能力。结果piPSCs呈典型的克隆状生长，克隆呈圆形或椭圆形，边界清晰。克隆内细胞排列紧密。细胞体积小，核大，细胞核／质比高；piPSCs高表达人多能性基因，以转染2d后基因表达水平为标准值1，hOct4、hc-Myc、hSox2、hKlf4的相对表达水平分别为1．14、0．89、0．74和0．86，而PF几乎不表达这些人源性基因；piPSCs也高表达猪多能性标记Sox2（pSox2）、pNanog和pLin28（以转染2d后基因表达水平为标准值1，相对表达水平分别为29．62、2．81、7．46）；piPSCs还表达碱性磷酸酶（ALP）活性；体外悬浮培养能形成EB；接种体内能形成畸胎瘤。结论成功获得piPSCs系，能稳定增殖，保持自我更新及多向分化潜能。; 游伟卢守莲王学浩俞悦; 关键词：多能干细胞

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江苏省教育厅自然科学基金(10KJB320006)