国家教育部博士点基金(200045)
- 作品数：16 被引量：75H指数：6
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- 日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ-p15亚单位的分离和序列分析被引量：7
- 2002年
- 目的 分离和鉴定日本血吸虫 (Schistosomajaponisum ,Sj)新基因。 方法 应用表达序列标签 (Expressedse quencetags ,ESTs)法随机筛选SjcDNA文库 ,通过PCR直接序列测定技术和同源性比较对阳性插入片段进行鉴定。采用亚克隆技术和生物信息学分析对日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录延长因子SⅢ -p15亚单位进行结构和功能的鉴定。结果 我们从SjcDNA文库中随机筛选到一个cDNA克隆 ,它含有一个 371个碱基组成的阅读框 ,编码 118个氨基酸 ,与哺乳动物等的RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ - p15亚单位具有较高的同源性 ,且具有该因子所特有的氨基酸序列 ,表明我们已经获得了日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ - p15亚单位。 结论 获得了日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ - p15亚单位的全长cDNA序列 。
- 包俊英余新炳吴忠道
- 关键词：日本血吸虫CDNA
- 日本血吸虫(大陆株)成虫基因表达谱的研究被引量：13
- 2002年
- 报告作者 1998年至 2 0 0 0年有关日本血吸虫 (大陆株 )成虫基因表达谱研究的结果 ,主要包括 :已测定 5 5 1条EST ,其中 5 19条EST已送入国际基因数据库 (GenBank/dbEST) ,并获得了GenBank的登录号。经同源整合后 ,5 19条EST序列归类为 388个基因序列 ,其中 ,2 4条 (6 19%)为日本血吸虫已知基因序列 ;18条 (4 6 4 %)EST与曼氏血吸虫已知基因序列同源 ,90条 (2 3 19%)EST与其它生物的已知基因序列同源 ,同源基因包括精氨酸酶、酰胺酸酶、微纤维蛋白、肌动蛋白、细胞色素C氧化酶、二硫异构酶、加长因子、热激蛋白 70、Y盒结合蛋白和抗凋亡因子等。其余的 2 5 6条 (6 5 98%)EST在Gen Bank中未发现有已知基因的同源序列。将非日本血吸虫同源序列EST或未检索到同源序列的EST初步定义为日本血吸虫亲基因 /未知基因序列EST ,共 36 4条。已克隆日本血吸虫精氨酸酶基因、Y 盒结合蛋白基因和抗凋亡 1因子 3个新基因的全长cDNA ,其GenBank的登录号分别为AF4 0 2 6 15、AF36 7371和AF33376 5。本研究结果丰富了血吸虫基因组数据 ,并为进一步筛选日本血吸虫疫苗候选基因或药物靶位提供了科学依据。
- 吴忠道余新炳徐劲李焱李晖婷周俊梅包俊英卞国武郑亦男邵筱彭寨玉
- 关键词：日本血吸虫成虫基因表达谱
- 日本血吸虫FKBP12基因的克隆及其免疫组织定位
- 2006年
- 目的克隆日本血吸虫(Sj)FKBP12基因全长cDNA,并进行免疫组织定位。方法从成虫RNA中RT-PCR扩增SjFKBP12基因完整的编码阅读框后,将其分别克隆入pGEX-4T-1和pEGFP-N1载体中;DNA免疫后制备抗血清,间接免疫荧光法对FKBP12进行组织定位。结果将SjFKBP12基因成功克隆入pGEX-4T-1和pEGFP-N1载体中;FKBP12定位于Sj成虫的被膜上。结论成功克隆了SjFKBP12基因,并对FKBP12蛋白在Sj成虫中进行组织定位,为将其进行疫苗等研究打下了基础。
- 李孜余新炳吴忠道胡旭初
- 关键词：日本血吸虫中国大陆株克隆免疫定位
- 日本血吸虫Dad1 cDNA和DNA序列的比较分析被引量：1
- 2002年
- 目的 对日本血吸虫新基因Dad1进行深入分析。方法 抽提日本血吸虫成虫DNA做模板 ,根据SJDad1的开放读框序列设计一对引物进行扩增 ,将扩增产物克隆测序 ,应用BLAST2软件进行SJDad1的cDNA和DNA序列比较。结果 SJDad1的cDNA和DNA序列有一个碱基的差异 :距起始密码子ATG 339位cDNA该处是A ,而在DNA序列该处是G。结论 日本血吸虫Dad1不含内含子 ,cDNA和DNA序列的单碱基差异可能与RNA编辑有关。
- 李焱吴忠道余新炳孟玮李晖婷
- 关键词：日本血吸虫
- 序列标签法寻找日本血吸虫新基因被引量：3
- 2002年
- 目的 寻找日本血吸虫新的疫苗候选分子 ,通过构建基因的反义核酸表达载体进行基因性质功能研究。 方法 运用表达序列标签法寻找并获得日本血吸虫新基因 ,对未知基因进行功能分析 ,并构建反义真核表达载体。 结果 获得表达序列标签 JAYL0 2 30的全长 c DNA序列 ,其推导氨基酸序列与人类和猪等生物的抗凋亡因子 1具有同源性 ,将之反向克隆入真核表达载体 p EGFP- N3中。 结论 表达序列标签法与生物信息技术结合有利于寻找新基因 。
- 李焱余新炳吴忠道李晖婷包俊英邵筱
- 关键词：日本血吸虫表达序列标签反义核酸克隆
- 日本血吸虫p50亲免素基因的扩增及其免疫学特性
- 2006年
- 目的扩增日本血吸虫(Sj)p50亲免素(IP)基因全长cDNA和DNA序列,进行原核克隆和研究其免疫学特性。方法从Sj成虫RNA中RT-PCR扩增Sjp50亲免素基因完整的编码阅读框,从Sj成虫基因组中扩增其DNA序列,对其cDNA序列和DNA序列进行比较分析,寻找内含子。将其cDNA序列克隆入pET30a(+)体中,原核表达并纯化表达产物,Western-blot比较重组蛋白与Sj体内相应天然蛋白的免疫原性和免疫反应性,间接免疫荧光法对p50亲免素进行组织定位。结果Sjp50IP基因DNA序列与cDNA相比,有6个内含子;重组p50IP与Sj体内的天然蛋白具有相同的免疫学特性,该蛋白位于Sj成虫的被膜上。结论成功扩增得到了Sjp50IP基因的全长编码区的cDNA序列和DNA序列,其DNA序列中有6个内含子;重组Sjp50IP的免疫学特性支持将该基因作为疫苗进行进一步的研究。
- 李孜余新炳吴忠道徐劲胡旭初
- 关键词：日本血吸虫中国大陆株免疫学特性
- 日本血吸虫thioredoxin基因的克隆和表达被引量：3
- 2004年
- 目的结合分子生物学和生物信息学方法筛选鉴定日本血吸虫新基因。方法从日本血吸虫(Schistosomajaponicum,大陆株)成虫cDNA文库中获取表达序列标签(expressedsequencetag,EST),用电子拼接的方法延伸序列,用NCBI提供的BLASTx程序和Genbank数据库进行同源性分析以筛选基因;设计特异性引物从日本血吸虫成虫mRNA中扩增筛选基因并预测和分析;扩增产物克隆到原核表达载体并表达。结果筛选出日本血吸虫Thioredoxin全长基因并对其进行了序列分析,克隆全长cDNA至PET原核载体并表达成功。结论结合EST、电子延伸和传统的分子生物学方法是高效筛选S.japonicum功能基因的有效策略。
- 邵筱余新炳吴忠道王海梁柏年李宝华
- 关键词：日本血吸虫THIOREDOXIN基因克隆基因表达硫氧还蛋白
- 应用EST和电子克隆策略研究血吸虫表达基因谱被引量：15
- 2005年
- 目的开展血吸虫表达基因谱的研究,寻找新的疫苗候选分子和药物靶标。方法应用表达序列标签(EST)和电子克隆策略。结果获得了552个EST序列和487个电子延伸序列,其中104个EST序列在延伸前未表现同源性,而延伸后表现出有意义的同源性;获得了日本血吸虫基因表达谱的信息以及发现了有潜在药物和疫苗价值的新基因序列。结论本研究为日本血吸虫基因表达谱的研究提供更有效的研究思路。
- 邵筱吴忠道刘翰腾邹赛德余新炳
- 关键词：日本血吸虫新基因表达序列标签电子克隆
- 日本血吸虫新基因Sj Dad1的DNA免疫动物保护性实验研究被引量：8
- 2002年
- 目的 观察日本血吸虫未知基因SjDad1的DNA免疫保护动物实验效果 ,探讨其作为疫苗候选分子的可能性。方法 构建SjDad1的真核表达载体 pEGFP -N3 -SjDad1,两次质粒DNA免疫BALB/c小鼠后给予小鼠日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,设置生理盐水对照组 (NS)和pEGFP -N3 对照组 ,攻击感染后 4 2天处死小鼠 ,计算减虫率和减卵率。结果 双酶切和PCR反应以及测序结果证实重组真核表达载体 pEGFP -N3 -SjDad1构建成功 ,DNA免疫动物的保护实验证明 pEGFP -N3 -SjDad1与生理盐水组相比对小鼠没有显著的减虫作用 (P >0 0 5 ) ,减卵效果具有显著性意义 (P <0 0 1) ,减卵率是6 5 74 %。结论 日本血吸虫 pEGFP -N3 -SjDad1有抗血吸虫生殖作用 ,具有疫苗研究开发价值。
- 李焱余新炳吴忠道孟玮陈慧红彭寨玉
- 关键词：日本血吸虫DNA免疫动物实验免疫保护
- 日本血吸虫p50亲免素基因克隆、表达及纯化被引量：1
- 2005年
- 目的扩增、原核克隆和表达日本血吸虫(Sj)p50亲免素基因全长cDNA,并进行表达产物的纯化。方法从成虫RNA中RT-PCR扩增Sjp50亲免素基因完整的编码阅读框后,将其克隆入pET 30 a(+)原核表达载体中,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导高表达后用亲和层析柱对表达产物进行纯化。结果将Sjp50亲免素基因成功克隆入pET 30 a(+)表达载体中;诱导表达并成功纯化出重组Sjp50亲免素蛋白。结论成功克隆Sjp50亲免素基因,并表达和纯化得到了p50亲免素蛋白,为研究Sjp50亲免素的功能及其进行疫苗等研究奠定了基础。
- 李孜余新炳吴忠道徐劲胡旭初
- 关键词：日本血吸虫中国大陆株克隆表达纯化
