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结核分枝杆菌ESX-1分泌蛋白ESAT-6增强巨噬细胞吞噬功能被引量：1: 2013年; 【目的】研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)分泌蛋白ESAT-6(early secreted antigenictarget of 6 kDa)对巨噬细胞吞噬功能的影响。【方法】用重组质粒pFLAG-ESAT-6和pFLAG-EGFP转染RAW264.7细胞,经G418筛选,PCR、RT-PCR和Western blot鉴定,获得稳定表达flag-ESAT-6和flag-EGFP的RAW细胞系,然后用流式细胞术观察各稳转细胞系吞噬荧光微球的能力,并用共聚焦显微镜和菌落计数法检测稳转细胞系吞噬大肠杆菌(Escherichia coli)的能力。【结果】获得了稳定表达flag-ESAT-6的RAW-E6细胞系和表达flag-EGFP的RAW-EGFP细胞系;流式细胞术检测结果表明RAW-E6吞噬荧光微球的能力显著强于野生型细胞系RAW264.7和对照细胞系RAW-EGFP;菌落计数和激光共聚焦分析表明RAW-E6细胞系吞噬E.coli的能力也显著强于RAW264.7和RAW-EGFP。【结论】通过胞内表达发现结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6能够增强巨噬细胞的吞噬功能,这将为深入理解结核分枝杆菌的致病机制提供新的思路。; 屈野殷瑛李浩刘炬杨秀旭董大勇徐俊杰陈薇; 关键词：ESAT-6 巨噬细胞

稳定表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的RAW264.7细胞系的建立被引量：2: 2011年; 为研究结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis分泌蛋白ESAT-6(Early secreted antigenic target of 6 kDa)对巨噬细胞相关功能的影响,将正确构建的重组质粒pEGFP-C1-ESAT-6和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,经过G418筛选后建立稳定表达EGFP-ESAT6融合蛋白以及EGFP的细胞系,并通过RT-PCR、荧光显微镜及Western blotting方法,在基因和蛋白两个水平对所建立的稳转细胞系进行鉴定。结果证实EGFP-ESAT6融合基因成功整合入RAW264.7细胞基因组并能够稳定表达,为后续的ESAT-6调控巨噬细胞机理研究提供了平台。; 李浩殷瑛董大勇张军付玲蔡晨光王猛徐俊杰陈薇; 关键词：ESAT-6 RAW264.7 稳定转染

结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6对小鼠巨噬细胞凋亡的诱导作用被引量：2: 2014年; 【目的】研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)分泌蛋白ESAT-6(early secreted antigenic target of 6 kD)对小鼠巨噬细胞凋亡的影响及机理。【方法】应用流式细胞仪分析稳定表达ESAT-6和经重组ESAT-6蛋白作用的小鼠RAW264.7细胞的凋亡;应用Caspase-3检测试剂盒检测caspase-3活性变化;进一步应用Western blotting分析稳转细胞系ESAT-6表达情况。【结果】RAW-EGFP-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和RAW-EGFP细胞系(P<0.05);RAW-flag-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和相应对照细胞系(P<0.01)。10μg/ml重组ESAT-6可显著诱导RAW264.7细胞凋亡,而5μg/ml重组ESAT-6无明显诱导细胞凋亡效果。稳转细胞系RAW-flag-ESAT-6细胞内flag-ESAT-6浓度大约只有500 ng/ml。【结论】胞内低水平表达结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6可依赖caspase-3信号通路诱导小鼠RAW264.7细胞凋亡。; 屈野殷瑛李浩杨秀旭董大勇徐俊杰陈薇; 关键词：ESAT-6 CASPASE-3 流式细胞仪

结核分枝杆菌ESX分泌系统研究进展被引量：5: 2009年; 在结核分枝杆菌中存在能够使某些蛋白通过其高度疏水和通透性极差的细胞壁的分泌系统，其中ESX-1分泌系统负责ESAT-6（early secreted antigenic target of 6 kD）和CFP-10（culture filtrate protein of 10kD）的分泌．这两种蛋白能够形成1：1的二聚体结构，并且是结核分枝杆菌重要的毒力因子．近年来陆续发现其他一些蛋白也由ESX-1分泌系统所分泌．在结核分枝杆菌中还存在其他4种类似ESX-1的分泌系统ESX-2～ESX-5．ESX分泌系统也在其他革兰氏阳性菌和放线菌中被发现，有学者按照公认的术语称其为Ⅶ型分泌系统．本文综述了结核分枝杆菌ESX分泌系统的组成和分子机制，以及分泌蛋白与宿主的相互作用等方面的研究进展．; 李浩徐俊杰陈薇; 关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 CFP-10

结核分枝杆菌ESX-1分泌蛋白对巨噬细胞调控作用被引量：3: 2012年; 近年来结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculo-sis,MTB）多重耐药性（multi-drug resistance,MDR）的不断出现以及艾滋病人群对MTB易感性的增加,导致患结核病的人数迅速增加,死亡率也在不断上升,大有死灰复燃的趋势,这促使科研工作者加速了新疫苗研制和新药物的开发,而与之相关的就是对关的就是对结核分枝杆菌致病机理和发病机制的深人研究提出了非常紧迫的要求。; 屈野徐俊杰陈薇; 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞

结核分枝杆菌ESAT-6抗原鼠单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：3: 2011年; 目的:制备重组结核分枝杆菌ESAT-6抗原鼠单克隆抗体。方法:采用杂交瘤技术,获得了12株针对结核分枝杆菌ESAT-6抗原的鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株,对其中的5株进行了小鼠腹水的制备及相关鉴定。结果:5株单克隆抗体的腹水效价达到1:512 000～1:1 024 000,纯化后纯度高于90%,抗体亚类(型)均为IgG1/κ型,ELISA结果显示制备的单克隆抗体与结核分枝杆菌ESAT-6抗原可发生特异反应。结论:制备了结核分枝杆菌ESAT-6抗原鼠单克隆抗体,为结核分枝杆菌ESAT-6的生物学功能研究奠定了基础。; 刘树玲杨秀旭李浩任军李建民付玲徐俊杰陈薇; 关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 杂交瘤单克隆抗体

结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠单克隆抗体的制备及初步鉴定: 2011年; 目的:制备抗结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb。方法:采用杂交瘤技术,获得了11株针对结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb杂交瘤细胞株,对其中的5株进行了小鼠腹水的制备及相关鉴定。结果:5株mAb的腹水效价达到1∶32 000～1∶512 000,将这5株mAb进行了纯化,纯化后纯度大于90%,抗体亚类(型)均为IgG1/κ型,ELISA结果显示制备的mAb与结核分枝杆菌Rv3881c抗原可发生特异反应。结论:制备了抗结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb,为结核分枝杆菌Rv3881c生物学功能的研究奠定基础。; 刘树玲李浩任军付玲李建民侯利华徐俊杰陈薇; 关键词：结核分枝杆菌杂交瘤 MAB ELISA

结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达及膜定位研究被引量：1: 2011年; 从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因,克隆入pET21a(+)载体。将成功构建的pET21a(+)-ESAT-6重组质粒转化入感受态BL21(DE3)中,经诱导表达后,使用SDS-PAGE和Western blot鉴定。超声破碎后发现目的蛋白以可溶性表达形式存在,经过Ni-NTA柱和DEAE-SepharoseTMFast Flow柱纯化,获得纯度约为95%的重组ESAT-6蛋白。将目的蛋白和RAW264.7细胞共孵育后,使用免疫荧光技术发现ESAT-6蛋白能够直接和RAW264.7的细胞膜结合。; 李浩殷瑛毛亚丽董大勇张军付玲郭继红徐俊杰陈薇; 关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 纯化免疫荧光

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