福建省自然科学基金(C04010011)
- 作品数：12 被引量：39H指数：4
- 相关作者：贺淹才刘爱花刘治江李红然刘嘉更多>>
- 相关机构：华侨大学更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 采用易错PCR对粘质沙雷氏菌几丁质酶C进行定向进化被引量：8
- 2010年
- 以重组E.coliBL21(DE3)pLysS/pET22b-Chi C为亲本,采用易错聚合酶链反应(PCR)技术,对粘质沙雷氏菌几丁质酶C基因(Chi C)进行定向进化研究.经过两轮易错PCR后,建立突变体文库,进行平板初筛、包涵体复性及酶活检测复筛,获得一酶活较高的突变酶(Mut-Chi C),其催化活性为亲本重组酶的1.9倍,比活力为出发菌酶活的3.3倍.对突变酶的酶学性质进行初步研究,其最适pH值为5.0,最适温度为60℃,而出发菌该酶的最适温度为40℃.进化酶基因经DNA测序并通过软件与亲本型酶基因进行分析比对,表明突变酶Mut-Chi C基因发生点突变,使4处氨基酸被取代,且均为有义突变.
- 刘治江贺淹才李红然刘嘉施腾鑫
- 关键词：粘质沙雷氏菌分子定向进化包涵体
- 天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor中几丁质酶C(Chi C)的生物信息学分析
- 2006年
- 利用生物信息学的方法,分析天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor中几丁质酶C(Chi C)的一些基本性质,并针对链霉菌属菌种的几个几丁质酶基因做了进化树,进而验证了天蓝色链霉菌中至少8种几丁质酶的分类;同时对天蓝色链霉菌Streptomy-ces coelicolor中几丁质酶C(Chi C)蛋白的高级结构作出了预测,得到其编码的属于18家族的蛋白质高级结构图谱。
- 魏巍贺淹才方柏山
- 关键词：几丁质酶天蓝色链霉菌进化树
- 重组粘质沙雷氏菌几丁质酶C的纯化及酶学性质被引量：1
- 2010年
- 为从已构建的重组大肠杆菌pET-22b-chiC获得高纯的几丁质酶C,通过降低培养温度,提高粘质沙雷氏菌几丁质酶C的可溶性表达.表达产物经镍柱亲和层析(IMAC)和Phenyl-Sepharose疏水层析(HIC)分离纯化后,得到电泳纯的几丁质酶.酶学性质研究表明,纯化的几丁质酶C为单体蛋白,相对分子质量为51.8ku;最适pH值为5.0,最适温度为55℃,在55℃的条件下保温4 h后仍有90%以上的酶活力.研究结果还表明,Cu2+,Hg2+,Co2+,Mg2+对酶活力均有明显抑制作用,而Fe2+,Zn2+,Sn2+,Ba2+对酶活力有一定促进作用,Mn2+对酶活力明显促进作用.
- 刘嘉贺淹才施腾鑫李梓君王珍珠
- 关键词：粘质沙雷氏菌分离纯化酶学性质
- 重组产几丁质酶C工程菌包涵体的复性被引量：2
- 2011年
- 将重组产几丁质酶C(Chi C)的菌体通过固定金属鳌合层析(IMAC),对目的蛋白进行初步纯化;然后采用透析法、凝胶过滤柱层析法和金属鳌合柱层析法对包涵体进行复性.结果表明,逐渐降低变性剂尿素浓度进行透析复性,酶液的酶活力为58.85μkat.L-1,比活为0.425 mkat.g-1,蛋白回收率为95.3%.使用SepHacry S-200作为复性凝胶介质复性,酶液的酶活力为30.37μkat.L-1,比活为0.620 mkat.g-1,蛋白回收率为72.9%.通过金属螯合层析法复性,酶液的酶活力为55.59μkat.L-1,比活为1.917 mkat.g-1,蛋白回收率为43.2%.
- 蔡婀娜贺淹才刘治江李红然
- 关键词：包涵体复性透析法
- 土壤产几丁质酶菌株的筛选鉴定及产酶条件被引量：4
- 2007年
- 利用几丁质为碳源,从土壤中筛选出3株产几丁质酶菌株,其中酶活最高的为一株革兰氏阴性菌.对该菌株应用16S rDNA法进行鉴定,结果为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia).通过单因素优化法和均匀设计法实验,结果表明,以质量分数0.5%的胶体几丁质为碳源,质量分数1.0%的蛋白胨为氮源,及30℃和pH值为7.2,发酵60 h的条件是菌株的最合适产酶条件.此时,胞外几丁质酶酶活力最高.
- 张荣奎贺淹才刘爱花魏巍李红然
- 关键词：嗜麦芽窄食单胞菌几丁质酶发酵条件
- 嗜麦芽窄食单胞菌产生的几丁质酶的特性被引量：4
- 2008年
- 从土壤中筛选出一株产几丁质酶的革兰氏阴性细菌，通过16S rDNA法对酶活力最高的菌株C进行鉴定，确定为嗜麦芽窄食单胞菌（S．maltophilia）菌株．通过单因素优化法和均匀设计法确定S．maltophilia产几丁质酶的最佳条件：在pH值为7．0的基础培养基中添加质量分数为1．0％的酵母膏、质量分数为0．5％的胶体几丁质，于180r·min^-1，30℃的摇床中培养60h．对硫酸铵沉淀获得的粗酶进行酶学性质研究，结果表明，该几丁质酶的最适反应温度为50℃，最适反应pH值为7．2，在55℃以上的温度条件下容易失活．通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，确定S．maltophilia几丁质酶的相对分子质量为6．8×10^3；以筛选的S．maltophilia菌株的总DNA为模板，利用聚合酶链式反应（PCR）扩增出几丁质酶DNA测序；应用生物信息学手段推导S．maltophilia几丁质酶为分泌型蛋白酶，预测其等电点pI值为5．42，相对分子质量为6．8×10^3（与实验纯化的酶蛋白电泳结果一致）．预测该酶氨基酸序列具有信号肽区（氨基酸残基1～41）、Ⅲ型几丁质结合区（残基47-92）、多囊肾病域（107～194）、类纤维连接蛋白Ⅲ型区（Fn3，201～278）和18家族糖基水解域等5个结构功能区，5个区域被富含Ala，Gly，Pro，Ser和Thr的短序列连接起来；在第400～500个氨基酸残基间有一个螺旋结构．
- 贺淹才刘爱花张荣奎刘治江
- 关键词：几丁质酶嗜麦芽窄食单胞菌发酵培养分子结构生物信息学
- 产几丁质酶菌株的分离与鉴定及产酶条件优化被引量：3
- 2009年
- 从土壤中分离到一株产几丁质酶的细菌LL-C.该菌经16S rDNA序列同源性分析及形态培养特征、生理生化特征分析,鉴定为Luteibacter rhizovicinus,属于黄单胞菌科(Xanthomonadaceae).以不同发酵时间、碳源、氮源、起始pH值、培养基装液量和培养温度为因素,考察LL-C菌株产几丁质酶的优化条件.结果表明,最有利于该菌产几丁质酶的条件:碳源为胶体几丁质、氮源为(NH4)2SO4,培养基起始pH值为4.5,培养基装液量为30 mL,培养温度为32℃,振荡培养时间为7 d,此优化条件下,摇瓶产酶活力为115.02μkat.L-1.
- 李红然贺淹才刘治江刘杨斐
- 关键词：几丁质酶酶活力
- 几丁质酶酶活测定方法的研究进展
- 介绍了近年来测定微生物几丁质酶酶活的主要方法,分别对非专一性几丁质酶、内切几丁质酶(endochitinase)和外切几丁质酶(exochitinase)的酶活测定方法进行综述,并分别对各种测定方法的优缺点进行了初步探讨...
- 魏巍贺淹才刘爱花
- 关键词：几丁质酶酶活测定
- 文献传递
- 黏质沙雷氏菌产几丁质酶二步发酵工艺的优化被引量：1
- 2011年
- 采用二步发酵法,研究黏质沙雷氏菌的产几丁质酶发酵条件.在二步发酵产酶的过程中,通过单因素法优化得到二步发酵培养基中最适碳源、氮源的质量分数和菌龄,同时选取发酵时间、初始pH值、接种菌体量和装液量4个因子进行正交试验.最终得到的最优条件:胶体几丁质质量分数为0.8%,酵母粉质量分数为1.0%,菌龄为12h,发酵时间为72h,初始pH值为8.5,菌体干质量为90mg,装液量为20mL.在此条件下,酶活力可达17.020μkat.L-1.另外,在二步发酵工艺中添加0.1%纤维素,酶活力可提高至18.804μkat.L-1,比一步发酵提高1.27倍.
- 施腾鑫贺淹才刘嘉舒静波周娟
- 关键词：黏质沙雷氏菌几丁质酶二步发酵
- 改进RBB染色法初步筛选几丁质酶基因chiA的表达被引量：4
- 2008年
- 对RBB(Remazol Brilliant Blue)底物染色方法进行产几丁质酶细菌的酶活性筛选,应用几丁质胶体平板诱导表达的筛选取得好的效果.粘质沙雷氏菌几丁质酶基因chiA在E.coli中的异源表达过程:首先从质粒pMD-chiA(DH5α)中切出含粘质沙雷氏菌几丁质酶基因chiA的片段,将其插入到表达载体pET-22b(+)内,构建成几丁质酶表达质粒pET-chiA.然后,转化进入DH5α感受态细胞内,鉴定正确后将pET-chiA质粒转入BL21(DE3)pLysS中进行表达,并进行初步筛选.
- 贺淹才刘爱花柴思捷刘治江
- 关键词：粘质沙雷氏菌
