国家自然科学基金(31171346)
- 作品数：15 被引量：128H指数：5
- 相关作者：周向东尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫李琪刘益琼更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院俄罗斯医学科学院重庆市中山医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细胞因子信号转导抑制因子1对脂多糖诱导的气道黏液高分泌的抑制作用及其机制被引量：3
- 2016年
- 目的探讨细胞因子信号转导抑制因子1（SOCS1）对脂多糖诱导的气道黏液高分泌的抑制作用及其机制。方法培养人支气管上皮16HBE细胞，根据脂多糖刺激时长将细胞分为0、0．5、1、6、12及24h组，确定后续实验作用时长。根据不同的转染或处理措施，将细胞分为七组，分别为未转染组、空质粒组、野生型SOCS1组、阴性siRNA组、SOCSl1小干扰RNA（SOCS1-siRNA）组、生理缓冲液组和Filgotinib组，再给予脂多糖刺激，以同体积磷酸盐缓冲液处理细胞为对照。酶联免疫吸附（ELISA）法检测以上各组细胞裂解液中黏蛋白5AC（MUC5AC）（txg）相对裂解液总蛋白（mg）的表达量。Western印迹法分别检测细胞裂解液中SOCS1、磷酸化JAK1和STAT1表达量，分别以β-肌动蛋白或总JAKI和STAT1蛋白表达量为内参。结果脂多糖可诱导MUC5AC蛋白高表达，0、0．5、16、12、24h组MUC5AC的相对表达量分别为（2．86±0．20）、（3．42±0．29）、（3．43±0．12）、（10．22±0．96）、（14．56±1．12）、（14．15±1．34）μg／mg，而SOCSl蛋白则呈反向表达；6h组MUC5AC蛋白和SOCS1蛋白均处于中间水平，故选择6h为脂多糖刺激时长。野生型SOCS1组细胞内SOCS1呈过表达状态，并且同Filgotinib组一样，JAK1和STAT1磷酸化水平均显著降低；野生型SOCS1组和Filgotinib组MUC5AC的相对表达量均显著低于未转染组[（4．04±0．65）、（7．02±0．83）比（10．37±1．00）μg／mg]（均P〈0．05）。反之，SOCS1-siRNA组细胞内SOCS1表达明显下降，JAK1和STAT1磷酸化水平增强；SOCS1-siRNA组MUC5AC的相对表达量显著高于阴性siRNA组[（13．69±1．32）比（11．01±1．41）μg／mg]（P〈0．05）。结论SOCS1可通过对JAK1／STAT1信号通路的负调节作用，抑制脂多糖诱导的MUC5AC高表达。
- 刘春漪李琪周向东
- 关键词：脂多糖类黏蛋白类细胞因子类
- 慢性气道炎症黏液高分泌的治疗药物研究进展被引量：13
- 2014年
- 气道黏液高分泌是慢性阻塞性肺疾病（COPD）、支气管哮喘、肺囊性纤维化和间质性肺疾病等慢性气道炎性疾病重要的临床表现和病理特征之一。气道慢性炎症时，长期、反复的炎性刺激可刺激支气管上皮杯状细胞化生和黏膜下支气管腺体增生和肥大，引起“分泌高反应性”，继而引起黏液纤毛清除功能障碍，致使黏液难以排出而潴留于气道内形成黏液栓，加重了业已狭窄气道的阻塞和病原菌的定植，导致持续的感染和难以控制的低氧症状，甚至导致病情的恶化乃至患者的死亡［1］。可见，气道黏液高分泌不仅是一种临床症状，更是影响慢性气道炎性疾病患者病情变化及预后的独立危险因素［2］。因此，慢性气道炎性疾病伴随的气道黏液高分泌已成为目前研究的热点［3］。现就祛痰治疗的重要性和常用及新型祛痰药物的分类作一简要综述。
- 钟贞邓玥张婷
- 关键词：气管炎肺疾病慢性阻塞性黏液
- 携分泌型白细胞蛋白酶抑制因子的间充质干细胞对慢性阻塞性肺疾病大鼠的治疗作用被引量：5
- 2011年
- 目的研究携分泌型白细胞蛋白酶抑制因子（SLPI）骨髓间充质干细胞（BMSCs）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠气道炎症和黏液分泌的影响。方法SD大鼠60只按随机数字表法随机分为阴性对照组、COPD模型组、BMSCs组和携SLPI质粒BMSCs组各15只，采用熏香烟加气管内注人内毒素法制备COPD模型，通过尾静脉注入BMSCs或携SLPI质粒BMSCs细胞。Western印迹检测SLPI表达，酶联免疫吸附法检测白细胞介素8（IL-8）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达，通过病理切片观察杯状细胞增生情况。结果携SLPI质粒BMSCs组支气管／肺组织中SLPI表达为（0．79±0．06），显著高于阴性对照组的（0．24±0．02），（P〈0．05）。BMSCs组和携SLPI质粒BMSCs组支气管肺泡灌洗液中炎性因子IL-8、TNF-d浓度均低于COPD模型组（均P〈0．05）；携SLPI质粒BMSCs组更低，分别为（17．6±1．7）和（36．6±4．0）ng／L，显著低于BMSCs组（均P〈0．05）。携SLP!质粒BMSCs组支气管杯状细胞数较COPD模型组和BMSCs组明显减少（均P〈0．05）。结论携SLPI质粒BMSCs移植能够减轻COPD大鼠气道炎症和黏液分泌，有望用于对COPD患者的治疗。
- 江德鹏李琪维克多·克罗索夫尤列·皮尔曼周向东
- 关键词：肺疾病慢性阻塞性间质干细胞动物实验
- 运动训练联合心理激励对慢性阻塞性肺疾病患者生活质量的影响被引量：36
- 2013年
- 目的探讨肺康复运动训练联合心理激励对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者生活质量的影响。方法选取中重度COPD稳定期住院患者120例,随机分为试验组60人和对照组60人,对照组接受常规治疗1年,试验组在对照组基础上进行呼吸肌运动锻炼和肢体运动锻炼的同时融入心理激励元素,对比两组间康复训练前后生活质量、6 min步行距离、肺功能及焦虑、抑郁情况。结果实验组患者康复锻炼后生活质量明显提高(P<0.01),6 min步行距离明显延长,焦虑、抑郁明显好转,和对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组康复后肺功能较对照组无明显减损。结论运动锻炼联合心理激励的综合肺康复训练方案可改善患者躯体状况和心理状况,提升其社会适应能力,提高生活质量。
- 应少聪周向东周丽华胡晓刘益琼
- 关键词：慢性阻塞性肺疾病心理激励生活质量
- 钙敏感受体通过ERK信号通路参与低氧诱导的人气道上皮细胞黏液高分泌被引量：3
- 2014年
- 目的探究钙敏感受体(Ca SR)在低氧诱导的气道黏液高分泌中的信号通路。方法低氧培养箱(37℃,94%N2-1%O2-5%CO2)培养人气道上皮细胞16HBE复制细胞低氧模型。分为对照组、低氧组、Ca SR特异性激动剂Ca Cl2+低氧组、对照siRNA+低氧组、Ca SR-siRNA+低氧组、细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路特异性抑制剂U0126+低氧组。RT-PCR检测黏蛋白(MUC)5AC的转录水平,Western blot检测Ca SR、ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的蛋白相对含量,ELISA检测MUC5AC的分泌水平,四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞的活性。结果Ca SR表达于人气道上皮细胞,转染特异性的Ca SR-siRNA明显抑制Ca SR的表达。低氧组p-ERK1/2、MUC5AC mRNA和MUC5AC蛋白的相对含量分别为(0.63±0.11、0.51±0.03、0.56±0.07)较对照组(0.27±0.04、0.18±0.04、0.25±0.06)显著增加(P<0.05)。Ca SR的激动剂Ca Cl2可进一步增强低氧引起的上述作用(P<0.05),而转染Ca SR-siRNA及给予ERK信号通路特异性抑制剂U0126可抑制低氧引起的上述效应(P<0.05)。结论 Ca SR可通过MEK/ERK1/2信号通路参与低氧诱导的气道黏液高分泌。
- 杨红菊尤列.皮尔曼维克多.科罗索夫周向东
- 关键词：钙敏感受体黏蛋白
- 康复训练结合健康教育对老年慢性阻塞性肺疾病患者生活质量及其心理健康状况的影响被引量：55
- 2014年
- 目的观察康复训练结合健康教育对老年慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者生活质量及心理的影响。方法选取中、重度老年COPD稳定期住院患者108例，按随机数字表法分为干预组和对照组各54例，2组患者均接受呼吸内科常规治疗，干预组在此基础上进行个体化运动锻炼指导和健康教育相结合的综合康复治疗，对照组仅通过电话随访进行健康宣教和康复锻炼指导。2组患者均于治疗前和治疗1年后（治疗后）行COPD生活质量调查问卷（SGRQ）和症状自评量表（SCL-90）评分。结果治疗后，对照组SGRQ问卷各项评分与组内治疗前比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）；干预组SGRQ问卷症状、活动能力、生活影响评分及总分分别为（42．12±11．32）分、（45．17±10．23）分、（29．98±6．54）分和（41．02±9．92）分，分别与组内治疗前及对照组治疗后比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。治疗后，干预组SCL-90量表各项评分与组内治疗前和对照组治疗后比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。治疗期间，2组患者急性发作和急性发作导致住院人次组间比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论康复训练结合健康教育可显著改善COPD患者的生活质量和心理健康状况。
- 应少聪周向东刘益琼李双玉殷樱栗冰剑
- 关键词：慢性阻塞性肺疾病康复训练健康教育生活质量心理健康
- Elafin在气道炎症性疾病中的作用被引量：1
- 2014年
- Elafin是一种内源性的低分子量丝氨酸蛋白酶抑制剂,它来自于其前体trappin-2（或称pre-Elafin）的蛋白水解.Elafin的N端区段可以在转谷酰胺酶的介导下与细胞外基质铰连,而C端可以继续发挥抗蛋白酶作用.此外,Elafin还有抗感染、抗炎和免疫调节作用.因此,在气道炎症性疾病的治疗方面,Elafin是一种极具吸引力的候选分子.
- 邓玥张婷周向东
- 关键词：ELAFIN气道炎症
- 张力敏感性阳离子通道在气道黏液基础分泌中的介导作用
- 2012年
- 目的探讨节律性压力波维持气道黏蛋白(MUC)基础性分泌的主要信号节点。方法采用气/液相界面法培养人气道上皮16HBE细胞,模拟正常呼吸所产生的节律性压力波作用于培养细胞,分为静态对照组、节律性压力波组、节律性压力波+张力敏感性阳离子通道(TRPV4)拮抗剂钌红、节律性压力波+维拉帕米、节律性压力波+蛋白激酶C抑制剂(GF109203x)共5组,通过激光共聚焦观察Ca2+浓度变化,RT-PCR检测TRPV4mRNA表达,West-ern bolt检测MARCKS及SNAP-23水平,ELISA检测MUC(2、5AC和5B)分泌情况。结果节律性压力波组胞内Ca2+浓度(312.34±17.08)和TRPV4 mRNA(0.63±0.03)较静态对照组(196.16±35.06,0.28±0.05)显著增高(P<0.01),RR干预后明显降低(P<0.01);同时MUC(2、5AC和5B)分泌,pMARCKS及pSNAP-23蛋白水平明显增高(P<0.01),给予Ca2+及PKC抑制剂预处理后,上述各指标蛋白均降低(P<0.01)。结论 TRPV4参与节律性压力波维持气道上皮基础性MUC分泌平衡,此过程籍以激活Ca2+/PKC/MARCKS信号通路实现。
- 刘诗兰尤列.皮尔曼维克多.科罗索夫周向东
- 关键词：蛋白激酶C黏蛋白类
- 气道剪应力作用下黏蛋白5AC胞外极向分泌的主要介导分子被引量：1
- 2013年
- 目的探讨气道剪应力（SS）作用下黏蛋白（MUC）5AC胞外极向分泌的主要介导分子。方法常规培养16HBE细胞，使用Stata软件产生随机数字随机分为5组并分别进行如下处理：A组（对照组）：10％胎牛血清（FBS）＋DMEM高糖培养液继续培养，不再予任何刺激；B组（SS组）：只给予节律性旋转装置产生的SS刺激；C组[SS＋Rac-1特异性抑制剂（NSC23766）组]：给予SS刺激前30min，加入NSC23766（10μmol／L）；D组（SS＋微丝肌动蛋白解聚剂组）：给予SS刺激前30min，加入细胞松弛素D（100μg/L）；E组[SS＋皮层肌动蛋白结合蛋白（Cortactin）小干扰RNA（siRNA）转染组]：用成功转染Cortactin-siRNA的细胞予以SS刺激。每个实验组设6个复孔，重复3次实验用于统计学分析。采用节律性旋转装置模拟呼吸时气流对气道产生的SS作用。用Cortactin-siRNA转染抑制Cortactin功能。酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定细胞培养上清液中MUC5AC的胞外分泌量；Western印迹法检测Cortactin及其磷酸化（p-Cortactin）水平和转染效果；激光共聚焦显微镜观察微丝肌动蛋白的聚合情况。结果Cortactin—siRNA转染成功。A、B、C、D、E组MUC5AC相对含量分别为0．210±0．013、0．631±0．025、0．473±0．112、0．330±0．067、0．272±0．019，B组均显著高于其他各组（P=0．000、0．043、0．000、0．000）；B组Cortactin相对表达水平为0．670±0．048，显著高于E组的0．132±0．014（P〈0．01），但与A、C、D组的0．641±0．016、0．622±0．012、0．653±0．027比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）；B组p-Cortactin相对表达水平为0．582±0．067，显著高于A、C、E组的0．131±0．011、0．393±0．045、0．170±0．016（P=0．000、0．021、0．000），而D组（0．511±0．029）与B组差异无统计学意义（P=0．246）。结论Rac-1、Cortactin和微丝肌动蛋白是气道SS作用下MUC5AC胞外极向分�
- 王鹏周向东尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫
- 关键词：黏蛋白类微丝蛋白质类肌动蛋白类
- 气道上皮细胞ATP释放在周期性压力所致气道黏液分泌中的作用
- 2011年
- 目的探讨气道上皮细胞三磷酸腺苷(ATP)的释放及胞内钙离子(Ca2+)在周期性压力波所致气道黏液分泌中的作用。方法体外培养人支气管上皮细胞株16HBE,通过节律性倾斜细胞培养板,利用液体的表面张力、大气压及液体重力所产生的牵张力(剪应力)及压力(压应力)给予细胞机械刺激。根据对培养细胞所施加条件不同分为对照组、单纯倾斜组、倾斜+Ca2+螯合剂BAPTA-AM组、倾斜+Ca2+螯合剂EGTA组和倾斜+P2Y受体阻断剂RB-2组。分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定各组细胞存活率,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组黏蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平,ELISA法检测细胞培养上清液中MUC5AC蛋白含量,高效液相色谱法(HPLC)检测培养液中ATP释放量,倒置荧光显微镜观察细胞内Ca2+浓度变化。结果与对照组相比,单纯倾斜组16HBE细胞MUC5AC mRNA和蛋白的表达量及细胞培养上清液中ATP的含量均明显升高(P<0.05);倾斜+BAPTA-AM组、倾斜+RB-2组ATP及MUC5AC蛋白表达量均明显低于单纯倾斜组(P<0.05);倾斜+EGTA组和倾斜+RB-2组MUC5AC mRNA表达量与单纯倾斜组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论节律性压力可刺激气道黏膜上皮MUC5AC分泌,其机制与依赖Ca2+的ATP释放密切相关;该机制中的Ca2+几乎全部由胞内存储钙提供。
- 苏晖晖周向东
- 关键词：三磷酸腺苷钙离子黏蛋白
