北京市自然科学基金(6092010)
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 相关作者：马荣才曾钢姚磊叶艳英闫晓红更多>>
- 相关机构：北京市农林科学院农业生物技术研究中心江西农业大学福建农林大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 简化一步多重RT-PCR法快速检测芜菁花叶病毒被引量：8
- 2012年
- 芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)是侵染十字花科作物和观赏性物种的主要病害之一。利用反转录酶M-MLV和普通Taq酶,使用一步法多重RT-PCR技术,建立了一种快速、简便、特异性强的检测TuMV的方法。该方法简便,不需先对总RNA提纯,只需室温下在提取液中对病样叶片直接碾磨,用粗提液或浓缩后的DNA-RNA混合物为模板进行检测。2套针对TuMV的特异性引物确保了检测的准确性。
- 曾钢叶艳英闫晓红马荣才唐乐尘姚磊
- 关键词：芜菁花叶病毒一步法多重RT-PCR病毒检测
- 芜菁花叶病毒萝卜与甘蓝分离物P3基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2012年
- 芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)危害范围广,变异快,对其序列进行分析,能对病毒的演变与进化有深入的了解,为抗病育种打下基础。P3蛋白是TuMV高度容易变异的蛋白之一,包含一个对Brassica属和Raphanus属不同宿主侵染能力的决定因子,决定了宿主范围。笔者分别从北京感病的萝卜和甘蓝上分离得到4个TuMV分离物BJ-R01和BJ-B01、BJ-B02、BJB03。利用RT-PCR克隆了这4个分离物的P3基因,测定了它们的核苷酸序列,并进行了序列分析。结果表明,4个分离物的P3基因均为1 065个碱基,编码355个氨基酸。4个分离物P3基因的同源性较高,核苷酸序列同源性在92.6%～99.3%,氨基酸同源性在93.5%～99.7%。根据系统进化树分析,4个TuMV分离物均属于world-B组。经对宿主的致病性鉴定,4个TuMV分离物均为BR致病型。4个TuMV分离物对Brassica属植物均表现出强致病性,但对Raphanus属植物致病性显现出明显的差异。
- 叶艳英曾钢闫晓红马荣才吴才君姚磊
- 关键词：芜菁花叶病毒克隆
- HC-Pro基因片段介导的高抗TuMV被引量：2
- 2014年
- 芜菁花叶病毒(turnip mosaic viruses,TuMV)是侵染重要经济作物的主要病毒之一,寄主范围十分广泛,尤其是对十字花科作物的危害最为严重。为了获得对TuMV持久稳定的高度抗性,本研究以TuMV HC-Pro基因的453 bp保守序列为靶标,构建了植物表达RNAi载体pBBBTu-HC-Pro,并转化了TuMV的天然宿主拟南芥。对转基因拟南芥用北京地区流行的TuMV强致病株BJ-C4进行了抗病接种鉴定。鉴定的13个单拷贝转基因株系中有4个对TuMV的BJ-C4株表现出高度抗性,抗性比对照提高约80%以上,且抗性可以稳定遗传。经半定量和荧光定量PCR方法检测,在高抗转基因植株体内几乎检测不到病毒的累积,抗病效果明显。该载体在利用基因工程抗TuMV育种中具有广阔的应用前景。
- 叶艳英曾钢曹鸣庆马荣才吴才君姚磊
- 关键词：芜菁花叶病毒HC-PRO基因片段RNAI
- 外壳蛋白基因片段介导的高抗TuMV研究被引量：1
- 2013年
- 为了获得对芜菁花叶病毒(TuMV)高度稳定的抗性,选取TuMV的外壳蛋白(CP)基因近3'端保守区共377 bp的核苷酸序列,构建了抗TuMV的发卡结构RNAi载体,并转化了TuMV的天然宿主拟南芥。转基因植株用北京地区TuMV主要流行的强致病株系BJ-C4人工接种。鉴定的8个转基因株系中有3个株系表现出对TuMV的高度抗性。定量PCR结果显示,高抗转基因株系体内几乎检测不到病毒的积累。
- 曾钢叶艳英曹鸣庆马荣才唐乐尘姚磊
- 关键词：芜菁花叶病毒外壳蛋白基因
