北京市自然科学基金(6092017)
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 相关作者：王加启赵圣国卜登攀章玉涛周凌云更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金动物营养学国家重点实验室开放课题基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 免疫刺激复合物疫苗制备及其对小鼠免疫功能的影响被引量：5
- 2010年
- 确定了免疫刺激复合物(ISCOM)疫苗的安全有效剂量及其对小鼠免疫功能的影响。选取体重25 g左右的昆明小白鼠60只,分为12组,每组5只,腹腔分别注射不同剂量(5-200μg)的ISCOM疫苗,观察小鼠健康状态。选取体重28 g左右的昆明小白鼠60只,分为4组,分别在腹腔注射相同剂量的灭菌生理盐水,Lipase+生理盐水,空ISCOM,Lipase+ISCOM疫苗,利用间接ELISA检测血清中特异性抗体效价。结果表明,当注射剂量为5-25μg/只时,小鼠无任何异常症状。免疫后8 d,小鼠血清特异性抗体效价(log2)可以达到10.5,显著高于对照组。因此,ISCOM疫苗能有效引起小鼠的免疫反应。
- 章玉涛王加启赵圣国张春林卜登攀
- 关键词：小鼠免疫功能
- 荷斯坦奶牛瘤胃微生物脲酶的分离与鉴定被引量：4
- 2010年
- 本研究旨在从荷斯坦奶牛瘤胃中分离活性脲酶。从奶牛瘤胃中收集瘤胃内容物,通过离心和超声破碎的方法得到不含菌体细胞的瘤胃液(CFRF)和瘤胃菌体蛋白液(RCP),利用85%硫酸铵盐析,并透析后,用HiTrap Capto Q离子交换层析柱纯化脲酶。将纯化后的脲酶用活性PAGE分离,并利用改良的Fishbein染色法,确定脲酶条带位置,切胶,经胰蛋白酶消化后,用LC-MS/MS分析,并用SEQUEST软件在NCBI数据库搜索与质谱信号相匹配的肽段和蛋白质。结果表明从CFRF和RCP中分离出较高活性的脲酶,但经染色后只有RCP脲酶显示活性条带。经质谱分析,最终鉴定出了3种微生物来源脲酶,分别与嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、唾液链球菌(Streptococcus salivarius)和嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)相似。这说明绕过纯培养微生物,直接从瘤胃中分离脲酶,来研究其性质和来源是可行的,尤其适合对未培养微生物的研究。
- 赵圣国王加启刘开朗李旦于萍卜登攀
- 关键词：分离纯化活性电泳LC-MS/MS蛋白质组
- 脲酶B亚单位疫苗免疫对奶牛血清蛋白质组分的影响
- 2012年
- 为探讨脲酶B(Ure B)亚单位疫苗免疫后奶牛血清蛋白质组分的表达变化。选用8头健康的泌乳荷斯坦奶牛,分为免疫处理组和空白对照组,分别于胯部两侧肌肉注射Ure B亚单位疫苗(含抗原蛋白0.2 mg)和生理盐水,每隔2周进行加强免疫,并于免疫后第56天采集奶牛血样,用间接ELISA法测定血清中特异性IgG、IgM和IgA效价,用二维凝胶电泳(2-DE)结合MALDI-TOF-TOF质谱技术研究血清蛋白质组表达变化。免疫处理组奶牛血清中特异性IgG效价显著高于对照组(P<0.05),但Ure B免疫对奶牛血清中特异性IgM和IgA效价无显著影响(P>0.05)。血清蛋白质组分析发现6个差异表达蛋白点,其中3个蛋白点得到有效鉴定。结合珠蛋白前体和其他3个蛋白点在免疫Ure B亚单位疫苗奶牛血清中表达量增加,而Kakapo蛋白的表达量降低。Ure B亚单位疫苗免疫引起奶牛血清中结合珠蛋白和Kakapo等蛋白表达发生变化,为进一步研究脲酶B亚单位疫苗免疫对奶牛机体的影响提供了依据。
- 袁廷杰王加启杨永新卜登攀章玉涛赵圣国周凌云李发弟
- 关键词：奶牛蛋白质组
- 宏基因组学方法分析奶牛瘤胃尿素分解菌的多样性被引量：6
- 2010年
- 利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物PCR扩增并测序,揭示奶牛瘤胃尿素分解菌的多样性。提取本研究室前期鉴定的16个脲酶克隆的质粒,利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到pMD19-T载体,转化E.coliJM109,挑取阳性克隆测序。利用Blast程序将序列与GenBank和RDP数据库进行比对,并使用Mega 4.0软件构建系统发育树。4个脲酶克隆含有脲酶保守序列ureC,系统发育树分析表明,U1、U5、U13和U15分别属于Firmicutes、ε-Proteobacteria、β-Proteobacteria和Actinobacteria;7个脲酶克隆含有16S rDNA,经过建树分析,U1、U3、U7、U10、U11、U12和U14分别属于Staphylococcus、Shigella、Bacillus、Acinetobacter、Achromobacter、未培养微生物和Bacillales。实验结果显示,奶牛瘤胃微生物脲酶基因和尿素分解菌具有多样性的特点。
- 赵圣国王加启刘开朗李旦于萍
- 关键词：脲酶多样性宏基因组学RDNA
- 小鼠免疫刺激后乳腺pIgR mRNA转录及乳特异性IgA含量的变化被引量：3
- 2010年
- 为了探讨免疫刺激后昆明小白鼠乳腺pIgR基因mRNA转录和特异性IgA含量变化。选择48只健康受孕昆明小白鼠,分为A、B、C、D组,分别于分娩后第4天注射灭菌生理盐水、Lipase+灭菌生理盐水、空ISCOM和Lipase+LTB+ISCOM,每组注射12只,并于分娩后第8天和12天采集小鼠乳样、血样和乳腺组织,用间接ELISA法测定乳和血浆中的特异性IgA含量,用Real Time-PCR检测小鼠乳腺中pIgR基因的相对转录水平。结果表明,免疫刺激对小鼠血浆中特异性IgA的含量无显著性影响(P>0.05),但是免疫B组和D组中小鼠分娩后12 d的乳中特异性IgA含量显著高于8 d乳中的特异性IgA含量(P<0.05)。RealTime-PCR相对定量也表明,免疫B组和D组中小鼠分娩后12 d的乳腺pIgR基因转录水平显著高于8 d乳腺pIgR基因转录水平(P<0.05)。免疫刺激后小鼠乳腺pIgR基因转录水平的提高能增加乳中特异性IgA的含量。
- 赵圣国王加启张春刚卜登攀刘光磊张春林章玉涛周凌云
- 关键词：MRNAIGA乳腺
- 抗幽门螺杆菌UreB蛋白免疫乳的制备被引量：1
- 2011年
- 诱导UreB蛋白克隆菌株表达UreB蛋白,并制备成亚单位疫苗,免疫正常泌乳奶牛,测定乳清中特异性抗体效价以及牛乳常规成分、血清常规成分等健康指标.结果表明:UreB蛋白表达浓度为0.39mg/mL;乳清特异性抗体IgG和IgM效价显著高于对照组(P<0.05),IgA效价有所上升,但未达到显著水平(P>0.05);奶牛血清中各项生理生化指标没有显著变化(P>0.05),乳清中除非脂型固形物差异显著外(P<0.05),其余指标没有显著差异(P>0.05).说明幽门螺杆菌UreB亚单位疫苗可以有效提高牛奶中特异性抗体的浓度,并对奶牛健康及牛奶成分没有显著影响.
- 章玉涛王加启赵圣国孙鹏卜登攀周凌云李发弟
- 关键词：奶牛幽门螺杆菌尿素酶B免疫乳
- 利用小鼠模型的脲酶免疫刺激物效果评价被引量：1
- 2011年
- 建立小鼠模型对制备的脲酶免疫刺激物进行免疫效果及其安全性评价。利用IPTG诱导脲酶基因克隆菌,大量表达脲酶UreB蛋白,用SDS-PAGE及Bradford方法对表达产物进行定性和定量分析;将脲酶UreB蛋白与弗氏(不)完全佐剂混合并乳化,制备成脲酶免疫刺激物。选择健康昆明小白鼠40只,随机分为4组,分别注射脲酶免疫刺激物、弗氏(不)完全佐剂和生理盐水,同时设置非注射为空白对照。利用间接ELISA测定特异性抗体效价,利用血常规分析仪和流式细胞仪测定小鼠血常规。结果表明:构建克隆菌株可以大量表达脲酶B蛋白,质量浓度为0.39 mg/mL。小鼠血清中特异性IgG抗体效价能达到1∶10 000以上,显著高于其他3个对照组(P<0.05),而特异性抗体IgA和IgM效价与对照组比较差异不显著(P>0.05)。脲酶免疫刺激物能显著提高小鼠血中白细胞、淋巴细胞和中间细胞数及比例(P<0.05),而对血液其他指标没有显著影响(P>0.05)。本试验成功制备脲酶免疫刺激物,并能有效刺激机体免疫应答,为后期奶牛免疫试验打下基础。
- 章玉涛王加启赵圣国胡小丽卜登攀周凌云
- 关键词：小鼠脲酶抗体效价
