国家自然科学基金(31171326)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 不同启动子在水稻悬浮细胞中诱导外源基因的表达被引量：1
- 2014年
- 为进一步提高外源基因在水稻悬浮细胞中的表达水平,以花椰菜花叶病毒(Ca MV)35S启动子为对照,克隆了玉米泛素蛋白启动子(Ubi)、水稻肌动蛋白启动子(Actin)以及水稻Oscc1启动子,以GFP为报告基因,通过启动子串联的方式,构建了10个植物表达载体:p CAMBIA 1304 35S-GFP、Ubi-GFP、Actin-GFP、Oscc1-GFP、35S/Ubi-GFP、35S/Actin-GFP、35S/Oscc1-GFP、Ubi/Actin-GFP、Ubi/Oscc1-GFP、Actin/Oscc1-GFP,采用根瘤农杆菌介导的方法,将表达载体导入日本晴胚性愈伤,经悬浮培养分别获得转基因的悬浮细胞系,利用荧光显微镜、酶标仪检测GFP荧光强度,用Western blot检测GFP蛋白质的表达水平。结果发现串联启动子明显强于单个启动子驱动的GFP蛋白质表达水平。在10个表达载体中,35S/Ubi、Ubi/Actin和Ubi/Oscc1是3种优化的启动子组合,其中Ubi/Oscc1串联启动子驱动GFP的表达水平最高,约为对照35S启动子的3倍。
- 陈兆骞陈熙张炜
- 关键词：水稻悬浮细胞系绿色荧光蛋白异源表达
- 红树甜菜碱/脯氨酸转运蛋白基因Bet/ProT2转化水稻及耐盐性的研究被引量：2
- 2013年
- 克隆了红树植物‘白骨壤’中甜菜碱/脯氨酸转运蛋白基因(Bet/ProT2),采用根瘤农杆菌介导的方法,将携带有GFP报告基因的35S-Bet/ProT2-GFP融合质粒转化洋葱表皮细胞,亚细胞定位分析表明,Bet/ProT2是定位在细胞质膜上的跨膜蛋白。进一步利用农杆菌介导法将Bet/ProT2转入粳稻‘日本晴’,鉴定结果表明,Bet/ProT2基因已经整合到‘日本晴’的基因组中并有效表达。转Bet/ProT2基因水稻的耐盐性明显提高,在甜菜碱和脯氨酸同时或分别存在的条件下,转基因水稻可以在含有150 mmol·L-1NaCl的液体培养基中正常生长,同时叶片中H2O2含量较低;而野生型水稻在相同处理条件下出现明显枯萎,叶片中H2O2大量积累。结论:红树Bet/ProT2基因能通过吸收甜菜碱和/或脯氨酸来降低氧化伤害,显著提高转基因水稻的耐盐能力。
- 杨婷婷张炜
- 关键词：水稻红树甜菜碱耐盐性
