国家自然科学基金(30080013)
- 作品数：10 被引量：44H指数：5
- 相关作者：喻子牛孙明冯孝善钟文辉何国庆更多>>
- 相关机构：华中农业大学浙江大学南京师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程农业科学更多>>
- 细菌表面S-层的结构及其功能和应用前景被引量：5
- 2002年
- 孙明张蕾朱晨光喻子牛
- 氯粘康酸环异构酶基因克隆及序列研究
- 2005年
- 研究从土壤中分离出1株降解2,4-二氯酚能力较强的假单胞菌菌株“GT241-1”,并从中克隆出参与降解2,4-二氯酚的氯粘康酸环异构酶基因(dcpC),该基因编码的氯粘康酸环异构酶可将2,4-二氯-顺,顺-粘康酸转化为反式-2-氯-双烯内酯。采用的基因克隆策略是用Southern杂交对其邻近基因进行定位后构建基因组文库,再用斑点杂交从基因文库中筛选目的转化子。经序列测定得知dcpC基因编码区1110bp,且核苷酸和推测的编码氨基酸序列分析表明dcpC属氯粘康酸环异构酶基因家族,并与该基因家族的其他基因有一定差异。
- 钟文辉何国庆孙明喻子牛冯孝善
- 关键词：基因克隆假单胞菌2,4-二氯酚生物降解
- 利用S-层蛋白在细胞表面展示α-淀粉酶和金属硫蛋白被引量：8
- 2004年
- 选用苏云金芽胞杆菌CTC菌株细胞表面S 层蛋白作为表面展示载体 ,利用其N 端信号肽以及锚定序列分别将不同生物特性的外源蛋白带到胞外并锚定在细胞的表面。为研究外源蛋白的分子量和生化特性对表面展示以及对其在细胞表面生物活性的影响 ,选用分子量较大的分泌性蛋白α 淀粉酶和富含半胱氨酸的非分泌性蛋白金属硫蛋白作为目标蛋白。将α 淀粉酶的结构基因 (amy)和金属硫蛋白的结构基因 (smtA)与S 层蛋白的锚定区slh结合 ,构建融合蛋白基因slh amy及slh smtA ,克隆至穿梭载体pHT30 4上 ,得到重组质粒pBMBSA 30 4和pBMBSM 30 4 ;转入带有帮助质粒的重组菌株BMB171 pBMB CSA中 ,得到新的重组菌株BMBSAC和BMBSMC。SDS PAGE显示融合蛋白SLH AMY和SLH SMTA在重组菌的表面得到了表达。利用锥虫蓝染色 打孔加膜法表明重组菌SAC的确具有表面酶活性 ,α 淀粉酶被固定在细胞表面。碘液法测定的数据表明重组菌SAC的菌悬液样品较之受体菌BMB171菌悬液样品酶活提高了 4 2 4 %。Ni NTA 琼脂糖微球吸附试验显示重组菌SMC能够被微球所吸附 ,证实SMTA在重组菌表面具有活性。对游离镉离子的吸附试验显示重组菌对镉离子的吸附能力是对照受体菌的 4倍。
- 吴怀光刘欣孙明喻子牛
- 关键词：苏云金芽胞杆菌S-层蛋白细胞表面展示融合蛋白Α-淀粉酶
- 利用S-层蛋白在苏云金芽胞杆菌细胞表面展示多聚组氨酸肽(简报)被引量：5
- 2003年
- S层(Slayer)是由单一的蛋白或糖蛋白组成的薄层晶状结构，它广泛存在于古细菌和真细菌细胞的最外表面，可包裹整个细胞。S层在结构化学、形态学、遗传学以及物理化学等方面具有独特的性质，使之在生物技术、分子纳米技术和仿生学等领域蕴藏着广泛的应用潜力。近年来。
- 王莉孙明喻子牛
- 关键词：S-层蛋白苏云金芽胞杆菌细胞
- 假单胞菌的氯儿茶酚1,2-双加氧酶基因的克隆和表达被引量：3
- 2004年
- 从土壤中分离得到1株降解2,4-二氯酚(2,4-DCP)能力较强的细菌菌株GT241-1,克隆了该菌株的3,5-二氯儿茶酚1,2-双加氧酶基因(dcpB),采用的克隆策略为:用Southern杂交对dcpB进行定位后,构建重组质粒,再用斑点杂交从重组质粒中筛选目的转化子.经序列测定得知dcpB亚克隆片段全长4303bp,其中dcpB基因编码区765bp.核苷酸和推测的氨基酸序列分析表明,dcpB与已在GenBank登记的相关基因有一定的差异.dcpB基因能够在大肠杆菌转化子中成功地表达有生物活性的酶.
- 钟文辉何国庆孙明冯孝善喻子牛
- 关键词：假单胞菌基因克隆
- 降解2,4-二氯酚微生物的分离及其2,4-二氯酚羟化酶基因的克隆和表达被引量：9
- 2004年
- 从土壤中分离到一株降解 2 ,4 二氯酚能力较强的细菌菌株GT2 41 1,经鉴定该菌株属于假单胞菌属。菌株GT2 41 1在最适条件下能在 48h内将 90mg L的 2 ,4 DCP降解 91% ,能利用 2 ,4 二氯酚、2 ,4 二氯苯氧乙酸、苯甲酸和儿茶酚为唯一碳源生长。采用Southern杂交对 2 ,4 二氯酚羟化酶基因 (dcpA)定位后构建基因组文库 ,再用斑点杂交筛选目的转化子 ,克隆了该菌株的dcpA。序列测定得知含dcpA的亚克隆片段全长 2 3 89bp ,其中dcpA基因编码区 1797bp。核苷酸和氨基酸序列分析表明 ,dcpA与已在GenBank登记的相关基因有一定的差异。
- 钟文辉孙明何国庆冯孝善喻子牛
- 关键词：2,4-二氯酚微生物细菌克隆假单胞菌
- 类似S-层蛋白的苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白基因的克隆被引量：18
- 2001年
- 芽胞杆菌CTC菌株被鉴定为苏云金芽胞杆菌 ,鞭毛血清型H2 ,幕虫亚种 ;产生卵圆形伴胞晶体 ,伴胞晶体蛋白为 1 0 0kD ;测定了该蛋白的N 末端序列 ,该序列与炭疽芽胞杆菌的细胞表面S 层蛋白具 92 %～ 93%相似性 ;根据Southern杂交制作了该晶体蛋白基因ctc所在位置的限制性酶切图谱 ,分别克隆了该基因 5′和 3′端所在的 2 9kbXbaI片段和 3 1kbClaIDNA片段 ,彼此间具 0 6kb重叠 ,通过拼接获得含完整ctc基因的克隆。含该基因的大肠杆菌与表达S 层蛋白的大肠杆菌具相似生长特征。初步表明CTC菌株的伴胞晶体由细胞表面S 层蛋白组成。苏云金芽胞杆菌区别于蜡状芽胞杆菌和炭疽芽胞杆菌的唯一标准是能形成伴胞晶体 ,由于S 层是细胞表面的结构成分 。
- 孙明朱晨光喻子牛
- 关键词：伴胞晶体苏云金芽胞杆菌蜡状芽胞杆菌群基因克隆
- 假单胞菌反式氯双烯内酯异构酶基因克隆和序列分析
- 2006年
- 从土壤中分离得到一株降解2,4-二氯酚能力较强的假单胞菌菌株GT241-1,从该菌株中克隆出参与降解2,4-二氯酚的反式氯双烯内酯异构酶基因(dcpE).克隆策略是采用Southern杂交对其邻近基因进行定位后构建基因组文库,再用斑点杂交从基因文库中筛选目的转化子.经序列测定得知,dcpE基因编码区1062bp.核苷酸和推测的编码氨基酸序列分析表明,dcpE与已在GenBank登记的相关基因有一定的差异.
- 钟文辉何国庆孙明冯孝善喻子牛
- 关键词：假单胞菌2,4-二氯酚基因克隆
- 苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白可以形成伴胞晶体被引量：9
- 2002年
- 苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)CTC菌株产生卵圆形伴胞晶体 ,晶体蛋白分子量为 1 0 0kD ;透射电子显微镜观察结果表明该菌株有S 层结构 ,而且在母细胞内可以形成伴胞晶体和S 层的初体结构 ;其蛋白基因导入苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB1 71后 ,扫描电子显微镜观察结果表明转化子能形成晶体 ,而其形状与CTC菌株的相同 ;转化子晶体蛋白的分子量大小也与CTC菌株的相同 ,为 1 0 0kD。以上实验结果结合以前晶体蛋白N 末端测序和基因核苷酸序列 ,表明苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S
- 朱晨光孙明喻子牛
- 关键词：苏云金芽胞杆菌伴胞晶体电子显微镜
