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国家自然科学基金(39893320): 作品数：39 被引量：177H指数：9; 相关作者：洪孟民王宗阳曾溢滔钱若兰黄淑帧更多>>; 相关机构：中国科学院上海生命科学研究院上海市儿童医院中国医学科学院基础医学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中国科学院重点实验室基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>

用RACE结合cDNA文库筛选的方法获取新的锌指蛋白基因被引量：22: 2002年; 大多数有重要功能的蛋白质都含相应的由保守氨基酸顺序组成的功能结构域。本文首先根据蛋白质功能结构域保守氨基酸序列设计简并引物 ,用PCR方法扩增出基因EST序列 ,再利用改进的快速扩增cDNA末端(RACE)方法从cDNA文库中扩增出基因非同源部位 ,然后以非同源序列为探针 ,筛选cDNA文库。利用此方法成功地从人骨髓cDNA文库中克隆到几个编码锌指蛋白并代表原有EST的新的全长cDNA。这一策略也应适用于筛选编码具有其他序列保守性功能结构域蛋白的基因。; 杜占文刘立仁张俊武; 关键词：RACE CDNA文库锌指蛋白基因新基因

水稻蜡质基因第一内含子碱基突变引起其RNA二级结构的可能变化被引量：12: 2000年; 通过体外转录得到籼稻品种２３２蜡质基因第一内含子５’端４３０ｂｐ的ｓｓＲＮＡ分子，以及在此区域发生了自然突变的粳稻品种寒丰蜡质基因第一内含子５’端同样长度的ｓｓＲＮＡ分子。部分变性胶电泳结果表明两种ｓｓＲＮＡ分子的迁移速率不同。将两种ｓｓＲＮＡ分子的核酸序列用计算机分析，表明此两种ｓｓＲＮＡ分子能形成不同的茎环结构，自由能值也有差异。对突变引起的这些不同与两种水稻品种蜡质基因转录本剪接的差异进行了讨论。; 蔡秀玲王宗阳邢彦彦张景六洪孟民; 关键词：第一内含子蜡质基因水稻碱基突变

HMG1/2和HMG14/17与人ε-珠蛋白基因启动子DNA的相互作用: 2002年; HMG（high mobility group）蛋白质是真核细胞核内一类含量丰富的非组蛋白,它们在染色质的结构与功能及基因表达调控中起着重要作用.应用凝胶电泳阻滞法和体外核小体重组技术,分析了HMG1/2和HMG14/17与人ε-珠蛋白基因启动子（ε-promoter,-177～+1bp）DNA的结合模式.实验结果表明,HMG1/2能与ε-珠蛋白基因启动子DNA相结合,而HMG14/17不能与它结合.将ε-珠蛋白基因启动子DNA在体外组装成核小体后,HMG1/2则不能与组装成核小体的ε-珠蛋白基因启动子DNA结合,而HMG14/17却能与之结合.结果提示,当ε-珠蛋白基因启动子DNA处于不同的状态时,它所结合的HMG蛋白是不同的,推测它们可能就是通过这种选择性的结合模式而积极参与了人体ε-珠蛋由基因的表达调控.; 侯春晖黄建张树冰钱若兰; 关键词：相互作用蛋白纯化

水稻蜡质基因5’上游区中31bp序列增强基因表达的作用被引量：15: 2000年; 为研究水稻蜡质基因 (Wx) 5’上游区中一个与胚乳核蛋白结合的 31bp序列在基因表达中的作用 ,将一系列包含或不包含此序列的长度不同的Wx启动区与 β 葡萄糖苷酸酶基因 (GUS)编码区连接 ,构建成嵌合质粒。将这些质粒通过农杆菌介导转化水稻幼胚愈伤组织 ,并分化产生转基因植株。分别测定抗性愈伤组织中与转基因植株未成熟种子胚乳中的GUS酶活性。结果表明含有 31bp序列的比不含此序列的Wx启动区使GUS报告基因的表达水平高出 2～; 葛鸿飞王宗阳洪孟民; 关键词：水稻蜡质基因

基因座控制区元件HS2、HS3对β-珠蛋白基因表达的调控被引量：5: 2002年; 用增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)为报道基因 ,通过构建不同的真核表达载体 ,并用脂质体转染法将其转染到K5 6 2及MEL细胞中 ,经流式细胞仪检测、半定量RT PCR及荧光倒置显微镜下观察荧光表达情况 ,以研究HS2、HS3、HS2 HS3及近侧元件在瞬时表达中对 β 珠蛋白基因启动子驱动下的EGFP表达调控情况。结果显示 ,3 2kb的HS2元件在K5 6 2及MEL细胞中均可增强 β 启动子活性 ,而 3kb的HS3仅在MEL细胞中有增强作用。; 贾春平黄淑帧曾溢滔; 关键词：Β-珠蛋白基因

染色质结构与珠蛋白基因表达调控: 2001年; 综述了β－珠蛋白基因表达调控中；与染色质结构调控相关的区域、染色质重组复合体、染色质修饰等因素及它们之间协同作用的研究。; 贾春平任兆瑞曾溢滔; 关键词：珠蛋白基因表达调控

Rice bZIP protein,REB,interacts with GCN4 motif in promoter of Waxy gene被引量：5: 2002年; A bifactorial endosperm box (EB), which contains an endosperm motif (EM) and a GCN4 motif, was found in rice Wx promoter. EB was found in 5′ upstream region of many seed storage protein genes accounting for these genes expression exclusive in endosperm among various cereals. Many reports demonstrated that the bZIP transcription activators isolated from wheat, barley and maize, etc. regulate the gene expression through binding to the GCN4 motif. In this research, we showed that GCN4 sequence could be recognized by nuclear proteins extracted from immature rice seeds. Furthermore, a rice bZIP protein, REB was isolated by using PCR method and REB fusion protein was expressed in E. coli. The results of gel shift analysis showed that REB could recognize and bind to the GCN4 motif in the Wx gene in addition to binding to the target sequence in the promoter of α-globulin.; 程世军; 关键词：WX

人β-簇珠蛋白基因上游远侧端调控元件与 GATA 转录因子结合模式被引量：1: 2000年; 用羟基脲诱导ＨＥＬ细胞，将诱导前后细胞核内蛋白质因子与人β－类珠蛋白基因ＬＣＲ调控元件内ＤＮａｓｅＩ超敏感点Ⅲ和Ⅳ核心ＤＮＡ序列（ＨＳ３－１４７１６～－１４９９１ｂｐ和ＨＳ４－１８３０６～－１８５８６ｂｐ）的结合模式进行了分析．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明，随着羟基脲诱导ＨＥＬ细胞时间的延长，细胞核内ＧＡＴＡ－２的含量逐渐减少；与之相反，ＧＡＴＡ－１的含量却随着诱导的时间而增加．结合竞争性ＥＭＳＡ分析结果表明，非诱导的ＨＥＬ细胞内，与ＨＳ３和ＨＳ４核心ＤＮＡ序列结合的核蛋白因子主要是ＧＡＴＡ－２；但经羟基脲诱导后，与ＨＳ３和ＨＳ４核心ＤＮＡ序列相结合的核蛋白因子主要是ＧＡＴＡ－１和ＧＡＴＡ－Ｘ（一种属于ＧＡＴＡ家族的未知蛋白质因子）．实验结果进一步揭示了红系专一转录因子（ＧＡＴＡ－１和ＧＡＴＡ－２）分别能与人β－类珠蛋白基因ＬＣＲ调控元件内ＤＮａｓｅｌ超敏感点Ⅲ和Ⅳ核心ＤＮＡ序列进行专一性的结合，共同介导了β－珠蛋白基因表达与调控．ＧＡＴＡ－１能促进β－珠蛋白基因的转录，使ＨＥＬ细胞趋向终末分化．; 张树冰赵晖蒋俶钱若兰; 关键词：Β-珠蛋白基因 HEL细胞调控元件

氯化钠密度梯度离心法制备用于显微注射的外源DNA片段被引量：2: 2003年; DNA显微注射是生产转基因动物最可靠和最常使用的一种方法,外源DNA的纯度对显微注射的成功起着至关重要的作用。本文介绍用氯化钠密度梯度离心的方法制备用于显微注射的外源DNA片段。与传统的琼脂糖凝胶回收的方法相比较,用此方法制备的外源DNA片段对小鼠受精卵进行显微注射后,受卵体母鼠的胚胎存活率,以及子代小鼠的外源基因整合率均有明显的提高。这一方法可为进一步提高转基因动物的成功率,提供方法学上的参考。; 刘立仁赵华路张俊武; 关键词：显微注射胚胎存活率

hB1F与HNF1协同调控HBV增强子Ⅱ的功能被引量：3: 2000年; 人Ｂ１结合因子（ｈｕｍａｎＢ１ｂｉｎｄｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ｈＢ１Ｆ）是本实验室克隆到的一个新的转录因子，它能够结合于ＨＢＶ增强子Ⅱ（ＥＮ Ⅱ）的Ｂ１区并反式激活其功能．对ｈＢ１Ｆ和其他反式激活ＥＮ Ⅱ的肝细胞核因子间在功能上的相互关系进行了研究．氯霉素乙酰转移酶（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＣＡＴ）报告基因分析发现，ｈＢ１Ｆ与ＨＮＦ３β，ＨＮＦ４间在激活ＥＮ　Ⅱ的功能上仅存在简单的加和性，而ｈＢ１Ｆ和ＨＮＦ１共同存在的情况下却能够产生很强的协同效应．进一步利用ＧＳＴｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ实验在体外证明了这两种因子间存在特异的直接相互作用．研究结果表明，ｈＢ１Ｆ与ＨＮＦ１协同地调控ＨＢＶ增强子Ⅱ的功能．; 蔡彦宁李嵋周青孔玉英汪垣; 关键词：乙型肝炎病毒 HB1F

国家自然科学基金(39893320)

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