陕西省科技攻关计划(2009K12-01)
- 作品数：13 被引量：137H指数：4
- 相关作者：景桂霞吕毅霍雄伟丁晓英高燕凤更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院第四军医大学唐都医院第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种四环素严紧控制的真核表达系统
- 2011年
- 目的构建一种严紧调控的表达系统,用于在真核细胞内表达外源性兴趣基因。方法融合四环素诱导元件、人工细菌染色体(BAC)以及Gateway技术,建立了一种新的表达体系。并且将该体系进行了测试。结果兴趣基因编码的β-catenin-ERα融合蛋白经荧光素酶活性检测和Western杂交分析,其表达被四环素或强力霉素严紧控制,在表达载体pE11-IGR-β-catenin-ERα中,EGFP的表达量恒定,可以作为流式细胞术有效的筛选标记。结论该系统可以作为一种有效的工具,用于在真核细胞中表达外源性兴趣基因,并且实现严紧的表达调控。
- 铁茹陈宝莹曲萍戚朦杨东海于军
- 关键词：细菌人工染色体四环素强力霉素
- 人β-防御素4基因在HEK293细胞中的转染表达被引量：6
- 2012年
- 目的人β-防御素4(humanβ-defensin 4,HBD 4)对多种病原菌有杀伤作用。HBD4的自然表达水平极低,体外获得难度较大且价格昂贵。利用基因工程技术生产重组的HBD4成为研究的焦点。文中旨在构建HBD4真核表达载体,探讨真核细胞表达HBD4的可行性。方法用PCR法从已构建的重组克隆载体pMD18-T/HBD4中扩增出HBD4全长编码基因,克隆入真核表达载体pEGFP-N2,构建pEGFP-N2/HBD4重组真核表达载体;通过脂质体转染法将pEGFP-N2/HBD4导入HEK293细胞,采用RT-PCR、荧光显微镜、Western blot检测HBD4的mRNA和蛋白表达情况,并对表达的HBD4进行抗菌活性的初步研究。结果构建的重组真核表达载体pEGFP-N2/HBD4,经酶切鉴定、测序,证实插入的序列与Genebank中的HBD4基因序列完全相同。将pEGFP-N2/HBD4转染HEK293细胞,在转染细胞检测到HBD4mRNA表达。荧光显微镜下可在细胞膜及细胞质中观察到绿色荧光。Western blot分析显示:在pEGFP-N2/HBD4转染的HEK293细胞及细胞培养液中检测到了HBD4蛋白的表达。Kirby—Bauer纸片扩散法证实表达的HBD4蛋白对铜绿假单胞菌具有较强的杀伤作用。结论成功构建了HBD4基因的真核表达载体,并在HEK293细胞中表达出具有抗菌活性的HBD4多肽。
- 曹玉红成胜权张光运钱新宏李如英丁翠玲
- 关键词：基因克隆真核表达载体基因转染
- 聚维酮碘对全口金属基板式义齿消毒效果的监测分析
- 2014年
- 目的为规范口腔诊疗操作行为,有效预防与控制口腔医疗感染,监测聚维酮碘浸泡法对全口金属基板式义齿的消毒效果。方法 2012年1-12月随机选取日常技工室制作的全口金属基板式义齿（上颌）30件,用1 000～2 000mg/L聚维酮碘浸泡全口金属基板式义齿3min,于义齿佩戴时消毒前与消毒后,分别进行采样进行细菌分离培养和鉴定。结果 30件全口金属基板式义齿消毒前每件义齿菌落数范围为16～51CFU/件,均值为（31.07±10.97）CFU/件,消毒后细菌未检出;共培养出病原菌932株,其中检出金黄色葡萄球菌59株、大肠埃希菌25株、肺炎克雷伯菌22株、铜绿假单胞菌12株,检出率为6.33%、2.68%、2.36%、1.29%,其余均为非致病菌;检出的病原菌分为5大类,革兰阴性杆菌占53.86%,革兰阳性球菌占40.56%,革兰阴性球菌占4.51%,革兰阳性杆菌占0.75%,真菌占0.32%。结论聚维酮碘浸泡法对全口金属基板式义齿表面的消毒方法达到临床消毒灭菌的要求,可有效控制义齿戴入前的潜在细菌污染,保证了医院和患者的医疗安全。
- 景娟晋兴饶国洲耶小伟洪毅曹义战
- 关键词：聚维酮碘消毒监测分析
- 人β防御素4对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的观察人β防御素4(HBD4)对神经母细胞瘤(NB)细胞的杀伤作用,探讨HBD4对NB细胞增殖、凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响。方法将HBD4作用于NB细胞,根据HBD4终浓度将NB细胞分为A、B、C 3组,浓度分别为5、10、20mg·L-1;HBD4作用时间分别为12、24、48h。噻唑蓝(MTT)法测定HBD4对NB细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测HBD4作用于NB细胞后细胞凋亡情况;分光光度法检测HBD4对NB细胞Caspase-3蛋白表达的影响。结果 MTT检测结果:NB细胞抑制率均随HBD4浓度的升高而升高(P<0.01),随HBD4作用时间的延长而升高(P<0.01),提示HBD4对NB细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示:A、B、C三组NB细胞凋亡率均高于对照组(P<0.01)。三组NB细胞凋亡率比较亦有显著差异(P<0.01),说明随药物浓度的增加,细胞凋亡率呈增高趋势;分光光度法检测结果显示:A、B、C三组NB细胞Caspase-3含量均高于对照组(P<0.01)。三组NB细胞Caspase-3含量比较亦有显著差异(P<0.01),说明随药物浓度的增加,细胞Caspase-3含量呈增高趋势。结论HBD4对NB细胞增殖具有抑制作用;HBD4可诱导NB细胞凋亡;HBD4可能是通过激活Caspase-3诱导NB细胞凋亡。
- 曹玉红张静怡张光运曹艳华
- 关键词：神经母细胞瘤CASPASE-3细胞凋亡
- 人β-防御素4基因在COS-7细胞中的转染表达被引量：1
- 2012年
- 目的探讨人β-防御素4(HBD4)基因在真核细胞COS-7中表达的可能性。方法用脂质体转染法将实验室已构建的重组真核表达载体pcDNA3.1+/HBD4导入COS-7细胞,采用RT-PCR、Western-blot法检测HBD4的mRNA和蛋白表达水平,并对表达的HBD4进行抗菌活性的初步研究。结果 pcDNA3.1+/HBD4转染的COS-7细胞中检测到HBD4mRNA表达。Western blot分析显示,在pcDNA3.1+/HBD4转染的COS-7细胞及细胞培养液中检测到了HBD4蛋白的表达。Kirby-Bauer纸片扩散法证实表达的HBD4蛋白对大肠杆菌ATCC25922具有较强的杀伤作用。结论在COS-7细胞中成功表达具有抗菌活性的HBD4多肽。
- 曹玉红张光运成胜权李如英丁翠玲
- 关键词：真核表达基因转染
- survivin和bcl-2双基因敲减对人舌癌裸鼠移植瘤的抑制作用被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨survivin和bcl-2单基因与双基因敲减后对舌癌裸鼠移植瘤成瘤性的影响。方法:将筛选含有转染survivin siRNA-Tca8113;bcl-2siRNA-Tca8113;survivin/bcl-2siRNATca8113;Negative-siRNA-Tca8113细胞及未转染的Tca8113细胞分组进行培养,细胞数调成1×10~7细胞/ml接种于裸鼠左后肢股部,以无菌生理盐水做阴性对照,隔日观察裸鼠肿瘤发生情况,并测量肿瘤大小、体积。接种5周后处死并测量肿瘤体积大小、比较抑制结果及肿瘤组织切片HE染色病理分析。结果:肿瘤形成率显示空白对照、Lipofectamine和Negative-siRNA三组的裸鼠成瘤率100%,生长速度快、瘤体大;单基因敲减组(bcl-2siRNA、survivin siRNA)和双基因敲减组(survivin/bcl-2siRNA)瘤体较空白对照组小,生长速度慢;双基因敲减组成瘤率低(66.6%),注射生理盐水的阴性对照组接种后未出现肿瘤。肿瘤生长曲线显示空白对照、Lipofectamine、Negative-siRNA三组肿瘤生长速度明显快于单基因敲减和双基因敲减组,而双基因敲减组不仅成瘤延长,而且生长速度明显慢于单基因敲减组。肿瘤抑制率显示双基因敲减(84.5%)明显高于单基因敲减(67.6%和69.8%,P<0.05);肿瘤组织HE染色镜下可见:空白对照、Lipofectamine、Negative-siRNA组肿瘤呈浸润性生长,有大片坏死区,survivin和bcl-2基因敲减后的肿瘤组织与周围组织分界较清,未见明显浸润现象,肿瘤组织坏死区较少。结论:survivin和bcl-2基因敲减能有效抑制裸鼠移植瘤成瘤性,双基因敲减对裸鼠移植瘤抑制作用强于单基因敲减。
- 饶国洲娄鸣景娟牛洁
- 关键词：舌肿瘤肿瘤
- 罗哌卡因浸润麻醉联合地佐辛对颅脑外科手术患者全麻恢复期躁动的影响被引量：13
- 2015年
- 目的 评价罗哌卡因浸润麻醉联合地佐辛对颅脑外科手术患者全麻恢复期躁动的影响.方法 择期行颅脑肿瘤切除术的患者60例,性别不限,年龄18～ 64岁,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,采用随机数字表法,将其分为4组（n=15）：对照组（C组）、罗哌卡因组（R组）、地佐辛组（D组）和罗哌卡因＋地佐辛组（RD组）.C组切皮前10 min用生理盐水20 ml行浸润麻醉（1∶200 000肾上腺素）,手术结束前30 min静脉注射生理盐水2 ml.R组切皮前10 min用0.5％罗哌卡因20 ml行浸润麻醉,手术结束前30 min静脉注射生理盐水2 ml.D组切皮前10 min用生理盐水20 ml行浸润麻醉（1∶200 000肾上腺素）,手术结束前30 min静脉注射地佐辛10 mg;RD组手术切皮前10 min用0.5％罗哌卡因20 ml行浸润麻醉,手术结束前30 min静脉注射地佐辛10 mg.记录麻醉恢复时间、气管拔管时间、PACU期间气管拔管后躁动的发生情况,并评价躁动程度.记录气管拔管后10 min内心血管事件和呼吸抑制的发生情况.分别于麻醉诱导前（T0）、术毕（T1）和拔除气管导管后即刻（T2）,采集足背动脉血样,测定血糖、血浆皮质醇、肾上腺素和去甲肾上腺素的浓度.结果 与C组比较,R组、D组和RD组躁动发生率和躁动程度降低,T1和T2时血糖浓度和血浆皮质醇、肾上腺素和去甲肾上腺素的浓度降低,高血压发生率降低,R组和RD组麻醉恢复时间和气管拔管时间缩短（P＜0.05）.与R组和D组比较,RD组躁动发生率和躁动程度降低T1和T2时血糖浓度和血浆皮质醇、肾上腺素和去甲肾上腺素的浓度降低,高血压发生率降低（P＜0.05）.结论 罗哌卡因浸润麻醉联合地佐辛可降低颅脑外科手术患者全麻恢复期躁动的发生和程度.
- 高燕凤李欣丁晓英霍雄伟吕毅景桂霞
- 关键词：酰胺类躁动
- 地佐辛联合氟比洛芬酯术后多模式镇痛对胃癌根治术患者细胞免疫功能的影响被引量：49
- 2014年
- 目的观察地佐辛联合氟比洛芬酯术后多模式镇痛对胃癌根治术患者的镇痛效果及对免疫功能的影响。方法胃癌根治术患者40例,ASAⅠ或Ⅱ级,随机均分为地佐辛联合氟比洛芬酯组(DF组)和芬太尼组(F组),两组患者均行全凭静脉复合麻醉。两组患者术毕清醒后行静脉自控镇痛(PCIA),DF组镇痛泵配方为地佐辛30mg加氟比洛芬酯150mg,F组为芬太尼0.01mg/(d·kg),两组均加生理盐水配至100mL。初始负荷剂量4mL,背景剂量2mL/h,单次PCA剂量0.5mL,锁定时间15min。术后记录VAS评分、Ramsay镇静评分和不良反应的发生情况。分别于麻醉诱导前、术毕、术后1、3、5d抽血测定患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和自然杀伤细胞(NK细胞)水平。结果两组患者术后VAS评分、Ramsay镇静评分差异无统计学意义,DF组不良反应明显少于F组(P<0.05)。与麻醉前比,术毕两组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及NK细胞数量均下降(P<0.05),术后1d达最低水平(P<0.05)。术后3dDF组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及NK细胞数量已恢复到麻醉前水平,而F组仍明显低于麻醉前和DF组(P<0.05)。术后5d两组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及NK细胞数量均恢复至麻醉前水平。结论与芬太尼比较,地佐辛联合氟比洛芬酯术后镇痛效果满意且不良反应少,可减轻胃癌患者围术期T淋巴细胞亚群和NK细胞水平下降的程度,减轻术后细胞免疫功能的抑制。
- 高燕凤袁伟丁晓英霍雄伟景桂霞吕毅
- 关键词：地佐辛氟比洛芬酯多模式镇痛免疫抑制
- 噬菌体随机十二肽库淘选及鉴定胃癌特异性结合肽被引量：4
- 2010年
- 目的利用噬菌体展示随机十二肽库淘选出与胃癌BGC823细胞特异性结合的多肽,为寻找胃癌早期诊断和治疗的标志物打下基础。方法以胃癌细胞BGC823为靶细胞,胃黏膜永生化上皮细胞GES为吸附细胞,在常温下对噬菌体随机十二肽库进行三轮消减淘选,挑取单克隆、扩增纯化噬菌体,并经ELISA和免疫组化法初步鉴定噬菌体克隆亲和力;测序阳性克隆,合成荧光素FITC标记多肽,鉴定其与胃癌细胞和胃癌组织的亲和力及特异性。结果三轮淘选后,经ELISA法初步鉴定,随机挑选的20个单克隆中11号(GC-11)多肽对BGC823细胞亲和力最高。细胞、组织免疫荧光实验进一步证明,荧光素标记的多肽FITC-GC-11对BGC823细胞和胃癌组织具有高亲和力。结论利用噬菌体随机十二肽库成功淘选出与胃癌细胞BGC823和胃癌组织具有较高亲和力的多肽GC-11。
- 余明军孙学军禄韶英张文杰
- 关键词：噬菌体肽库多肽胃癌BGC823细胞
- 131I-AS联合rAAV2/5-sTRAIL治疗荷A549肺癌裸鼠的实验研究
- 目的采用~(131)I标记特异性的肿瘤血管生成抑制因子AS,同时构建rAAV2/5-sTRAIL载体,研究~(131)I-AS联合rAAV2/5-sTRAIL对荷A549肺癌裸鼠的治疗作用。方法从人新鲜血浆中分离AS,并...
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