国家教育部博士点基金(20090171120047)
- 作品数：10 被引量：15H指数：2
- 相关作者：邹俊涛杨俊华姚志彬牛道立何芬更多>>
- 相关机构：中山大学广州医学院第一附属医院东莞市塘厦人民医院更多>>
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- 沉默Pokemon基因对鼻咽癌细胞株CNE-2放射敏感性的影响被引量：1
- 2012年
- 【目的】探讨沉默Pokemon基因对鼻咽癌细胞(CNE-2)放射敏感性的影响,寻求放射治疗鼻咽癌的新方法。【方法】首先利用siRNA预测软件得到3条siRNA序列,并制备合成siRNA片段,利用RT-PCR和免疫印迹法检测其沉默Pokemon基因的效果,筛选出沉默效果最佳的siRNA片段,转染CNE-2细胞后观察其对CNE-2细胞p53基因表达的影响、MTT法检测细胞的增殖活性、流式细胞术检测细胞的凋亡、克隆形成法检测转染siRNA联合放射处理后细胞的放射增敏比。【结果】成功筛选出了沉默效应最佳的siRNA片段,转染CNE-2细胞后能显著降低其Pokemon基因的表达、提高p53基因的表达、降低细胞的增殖活性、加速细胞的凋亡,同时增加了CNE-2细胞的放射敏感性。【结论】沉默Pokemon基因能增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,这为临床鼻咽癌的放射增敏治疗提供了新思路。
- 牛道立李建锋何芬邹俊涛周琼芳魏旋李杨陈龙华
- 关键词：POKEMON基因鼻咽癌
- 重组四价Aβ_(1-15)腺病毒疫苗接种BALB/c小鼠的免疫量效关系
- 2010年
- 目的以不同剂量重组四价Aβ1-15腺病毒疫苗(Ad-4×Aβ15)接种于BALB/c鼠,寻求Ad-4×Aβ15疫苗的最佳免疫剂量并观察免疫效果,为疫苗的临床应用奠定基础。方法不同剂量Ad-4×Aβ15鼻黏膜途径接种BALB/c鼠,间接ELISA法检测血清中抗体的滴度的变化情况。Western blot法及Tg2576鼠脑切片免疫组化检测血清中抗体特异性,并对疫苗安全性进行评价。结果109pfu组和108pfu组两者平均抗体滴度差异无统计学意义(P>0.05)。109pfu组及108pfu组与107pfu组的抗体滴度相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。BALB/c小鼠血清中产生的抗体能与Aβ42及Tg2576转基因鼠脑组织内老年斑特异性结合。疫苗接种后未导致小鼠脑、肝、肾病理损害。结论从首次免疫开始,109pfu组和108pfu组两者抗体平均滴度差异无统计学意义(P>0.05),但均与107pfu组差异有统计学意义(P<0.05)。从安全性上,108pfu为小鼠最合适免疫剂量。
- 袁茂运邹俊涛姚志彬
- 关键词：免疫治疗
- 新生期小鼠卡介苗接种后免疫因子的增龄性变化被引量：4
- 2013年
- 目的检测卡介苗免疫后小鼠脑组织匀浆液和血清中细胞因子的变化,为进一步研究新生期卡介苗接种影响小鼠中枢神经系统神经发生的分子机制研究做准备。方法实验分1周、2周、3周3个时间点,将新生24 h内的SPF级C57BL/6小鼠随机分为卡介组和对照组,每组12只,分别在新生24 h内背部皮下注射卡介苗和PBS。分别在生后1周、2周、3周采用摘眼球法采血,之后冰上无菌取海马组织并匀浆。用ELISA酶联免疫吸附法,分别测各时间点各实验组小鼠脑组织匀浆和血清中的IL-1β、IL-4、IL-10和TNF-α含量。结果 (1)与对照组相比,接种后1周、2周、3周时,卡介组小鼠海马中细胞因子IL-4和IL-10均多于对照组(P<0.05),血清中IL-4多于对照组(P<0.05);IL-10在第1周和第2周多于对照组(P<0.05)。与对照组相比,接种后1周、2周、3周时,卡介组小鼠海马中细胞因子IL-1β和TNF-α均少于对照组,血清中TNF-α少于对照组;IL-1β在第1周和第2周于对照组(P<0.05)。(2)同一时间点海马中的细胞因子含量远多于血清中含量。(3)随时间的推进,海马和血清中IL-4和IL-10有降低趋势;而小鼠海马和血清中IL-1β和TNF-α有增加趋势。结论新生期接种卡介苗成功后,可致小鼠海马和血清中的细胞因子浓度发生动态改变:与对照组相比,海马和血清中IL-4和IL-10的含量升高,且随时间有下降趋势,但IL-1β和TNF-α的含量降低,且随时间有增加趋势。
- 孙安邦邹俊涛杨俊华李清清祁方窻杨扬姚志彬
- 关键词：卡介苗细胞因子海马
- 阿尔茨海默病免疫治疗研究进展
- 2011年
- AD已成为威胁人类晚年健康的一大隐患,其发病率有逐年上升之趋势,给社会带来沉重负担,对该病的研究显得非常紧迫。自1999年Schenk等人首次报道了Aβ肽疫苗免疫接种AD转基因小鼠取得的进展后,免疫治疗作为AD预防和研究的全新领域被开辟出来,并成为近年来研究的焦点之一。本文就该病的免疫治疗及疫苗研究进展作一综述。
- 袁茂运邹俊涛
- 关键词：阿尔茨海默病疫苗免疫治疗
- Aβ_(42)及GM-CSF双基因重组腺病毒的构建和免疫原性
- 2012年
- 目的构建含有β-淀粉样蛋白(Aβ42)及核糖体进入位点(IRES)引导的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)双表达重组腺病毒疫苗。方法 PCR法扩增带有IgGк轻链信号肽序列的Aβ42基因、IRES基因和小鼠GM-CSF基因,定向克隆于穿梭质粒pAdTrack-CMV中。通过与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌内同源重组形成重组腺病毒质粒Ad-Aβ42-IRES-GMCSF,转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(AD-Aβ42)。重组腺病毒经氯化铯密度梯度离心纯化后感染293细胞及Hela细胞,用免疫细胞化学和ELISA方法分别检测Aβ42及GM-CSF在细胞内和培养液中的分泌表达。免疫动物鉴定其免疫原性。结果 pAdTrack-Aβ42-GMCSF测序结果和预期一致,纯化的AD-Aβ42感染Hela细胞后,免疫细胞化学证实Aβ42基因在Hela细胞内表达。AD-Aβ42感染293细胞后,ELISA检测培养上清中Aβ42含量为(159.87±33.26)ng/mL,GM-CSF含量为(205.45±38.20)ng/mL。免疫动物能诱导机体产生高滴度的抗Aβ抗体。结论成功制备了AD-Aβ42,核糖体进入位点(IRES)成功引导的GM-CSF的表达,感染细胞证实其呈分泌表达,接种动物能诱导高滴度抗Aβ抗体。为老年性痴呆(AD)的基因治疗做好铺垫。
- 何芬靳晓宇邹俊涛牛道立杨俊华魏旋李建锋姚志彬
- 关键词：Β-淀粉样蛋白重组腺病毒
- Aβ_(15)老年性痴呆疫苗接种小鼠的剂量优化研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨Aβ15老年性痴呆疫苗接种Tg2576转基因小鼠及C57小鼠的最优化剂量。方法将本室前期制备的重组Aβ15疫苗分别以25.0、12.5及6.25μg三种剂量接种Tg2576转基因小鼠及C57小鼠,比较其诱导小鼠产生的抗体滴度大小;Western检测抗体与Aβ42结合的特异性;免疫组化检测小鼠产生的抗体是否能特异性结合老年斑。结果 25、12.5μg两种剂量均能诱导机体产生高滴度的抗体,6.25μg剂量未能诱导小鼠产生特性抗体;相同的接种次数下,C57小鼠产生的抗体滴度较Tg2576转基因小鼠高;接种小鼠产生的特异性抗体均能和Aβ42及老年斑结合。结论 Aβ15疫苗接种小鼠的最优化剂量为12.5μg,Tg2576转基因小鼠对Aβ疫苗有轻度免疫耐受。
- 邹俊涛袁茂运杨俊华李少阳夏宇岑袁群芳姚志彬
- 关键词：阿尔茨海默病免疫治疗接种剂量
- 脑室内注射重组BDNF腺病毒对大鼠海马神经发生的影响被引量：2
- 2011年
- 目的观察脑室内注射BDNF对海马神经发生的影响。方法脑室内注射重组BDNF腺病毒4周后,Morris水迷宫进行行为学检测,双标组化染色方法观察海马新生神经元数目的变化。结果与对照组相比,实验组大鼠空间学习和记忆能力明显增强(P<0.05);实验组大鼠海马DG区Brdu/DCX阳性神经元数目明显多于对照组(P<0.05)。结论脑室内注射BDNF导致大鼠认知能力增强,海马Brdu/DCX阳性神经元数目增加,提示BDNF提高认知能力可能与其引起海马Brdu/DCX阳性神经元增加有关。
- 郎洪刚曹文斌杨俊华李少阳邹俊涛
- 关键词：脑源性神经营养因子
- siRNA干扰Pokemon基因对鼻咽癌CNE-2细胞生长作用的研究被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨siRNA干扰Pokemon基因对鼻咽癌CNE-2细胞生长作用的影响。方法:利用siRNA预测软件得到3条siRNA编码DNA序列,并制备合成siRNA片段,利用RT-PCR和蛋白质印迹法检测其沉默Pokemon基因的效果,筛选出沉默效果最佳的siRNA片段。利用MTT法和流式细胞术检测CNE-2细胞生长与凋亡情况。结果:筛选出一条≥50%沉默效应的siRNA片段,转染鼻咽癌CNE-2细胞后,Pokemon基因表达明显下降(P<0.05),p14ARF和p53基因表达上调,P<0.05。鼻咽癌CNE-2细胞增殖受到抑制(P=0.015),凋亡率升高,P=0.008。结论:Pokemon基因沉默后可抑制CNE-2细胞生长,促进细胞凋亡,其机制可能与p14ARF和p53的表达上调有关。
- 牛道立李建锋何芬邹俊涛周琼芳魏璇李杨陈龙华
- 关键词：RNA干扰鼻咽肿瘤
- 重组大鼠脑源性神经营养因子腺病毒的构建及体外表达分析被引量：2
- 2011年
- 目的构建含有大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因的重组腺病毒(AD)载体,并分析其体外表达情况。方法将采用RT-PCR技术获取的大鼠BDNF的cDNA基因定向克隆入穿梭质粒pAdTrack-CMV中。通过与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌内同源重组形成重组腺病毒质粒pAd-BDNF,转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Ad-BDNF)。重组病毒感染体外培养的Hela细胞后,用RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学检测细胞BDNF基因及蛋白表达情况。结果 pAd-BDNF测序结果和预期一致,同源重组并经293细胞包装后形成重组腺病毒Ad-BDNF,重组病毒感染Hela细胞后能高水平表达BDNF。结论成功制备了重组腺病毒Ad-BDNF,感染细胞证实其呈分泌表达,为将其进一步应用于神经系统损伤性疾病治疗的研究打下了基础。
- 郎洪刚曹文斌牛道立何芬
- 关键词：BDNF腺病毒基因治疗脑损伤
- 柔性肽串联四价Aβ_(15)重组腺病毒的构建及纯化被引量：2
- 2010年
- 目的构建并纯化含有柔性肽串联四价β-淀粉样蛋白(Aβ15)的重组腺病毒疫苗,用于老年性痴呆的预防和治疗。方法酶切获取带有IgGк轻链信号肽序列的柔性肽串联四价Aβ15基因,定向克隆于穿梭质粒pAdTrack-CMV中。通过与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌内同源重组形成重组腺病毒质粒pAd-4×Aβ15,转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Ad-4×Aβ15)。Western检测4×Aβ15在培养液中的分泌表达。氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒Ad-4×Aβ15。结果 pAdTrack-4×Aβ15测序结果和预期一致,同源重组并经293细胞包装后形成重组腺病毒Ad-4×Aβ15,western检测4×Aβ15在培养上清中表达。经氯化铯密度梯度离心纯化后Ad-4×Aβ15病毒颗粒数约为4.6×1012 VP/mL。结论成功制备了重组腺病毒Ad-4×Aβ15,感染细胞证实其呈分泌表达,经氯化铯密度梯度离心纯化后得到高滴度的重组腺病毒。为老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)的实验治疗打下基础。
- 邹俊涛何芬牛道立徐杰杨俊华李少阳汪华侨袁群芳姚志彬
- 关键词：Β-淀粉样蛋白重组腺病毒阿尔茨海默病
