国家自然科学基金(81173661)
- 作品数：12 被引量：13H指数：2
- 相关作者：杨艳曾晓荣程俊李鹏云谭晓秋更多>>
- 相关机构：西南医科大学泸州医学院教育部更多>>
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- 中电导钙激活钾通道在细胞迁移中的作用及研究进展
- 2020年
- 细胞迁移参与个体发育、伤口愈合、免疫反应、癌症发展等多种生理或病理过程。钙激活钾(Calcium-activated potassium,KCa)通道作为钾通道家族中的重要成员,具有维持膜电位、胞内钙稳态和信号传递等作用。KCa通道参与多种细胞迁移过程,在细胞迁移中的调控机制具有重要临床价值。KCa通道依其单通道电导大小,分为大电导(BKCa)、中电导(IKCa)和小电导(SKCa)三类通道亚型。在细胞迁移相关研究中IKCa通道的报道较多,本文重点综述IKCa通道在细胞迁移中的作用及相关研究进展。
- 蓝婷徐清波
- 关键词：细胞迁移增殖CA^2+
- TRPV4调节血管张力作用的研究进展被引量：1
- 2017年
- 瞬时感受器电位通道（transientreceptorpotentialchan一nel,TRP通道）是一类非选择性阳离子通道,主要对钠离子和钙离子通透,几乎在机体的所有细胞均有分布.
- 张晓东(综述)杨艳(审校)
- 关键词：TRPV4血管平滑肌细胞内皮细胞
- 肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1在调节血管张力中的作用的研究进展被引量：1
- 2019年
- 肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1(Myosin phosphatase target subunit1,MYPT1)可通过其亮氨酸亚型转换和丝氨酸/苏氨酸(Serine/threonine,S/T)可磷酸化位点的磷酸化,调节血管张力。虽然MYPT1调节血管张力的功能研究较多,但针对其具体机制,目前尚不完全清楚。现就肌球蛋白磷酸酶靶向亚基与调节血管张力有关的结构,疾病下该结构与张力调节的关系进行综述,为血管疾病的研究和治疗提供理论基础。
- 刘小勤杨艳
- 关键词：血管张力
- 可诱导稳定表达大电导钙激活钾通道的细胞系构建及蛋白质纯化
- 2017年
- 目的:旨在构建稳定表达人大电导钙激活钾通道(BK_(Ca))的稳定细胞系并对重组蛋白分离纯化。方法:利用基因工程技术将人肠系膜动脉平滑肌BK_(Ca)编码基因克隆到表达载体pcDNA5/FRT/TO/FLAG,并转染Flp-InTMT-RExTM-293宿主细胞,用潮霉素B筛选建立稳定表达的单克隆细胞系。BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系经四环素诱导后,用anti-FLAG抗体对表达的BK_(Ca)蛋白质进行纯化。用western blot检测BK_(Ca)通道蛋白质的表达,用单通道膜片钳检测通道的电生理特性。结果:BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系经四环素诱导后表达了高水平的BK_(Ca)-FLAG融合蛋白,BK_(Ca)通道电导值为213.39±9.52pS(n=15,cell-attached)和225.72±10.61pS(n=13,inside-out),BK_(Ca)通道具有典型的大电导特性、电压依赖性、Ca2+依赖性及IbTX敏感性,与在体的人肠系膜动脉平滑肌BK_(Ca)通道具有相同的特征。纯化后的BK_(Ca)蛋白质条带单一,纯度约为89%。结论:成功构建BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系并获得纯化的BK_(Ca)蛋白质,为进一步深入研究通道功能及药物筛选奠定了重要的基础。
- 毛亮程俊黄文俊谭晓秋党喜同曾晓荣杨艳
- 关键词：膜片钳
- 用于离子通道实验的人工脂质膜的制备被引量：1
- 2012年
- 目的:摸索并建立制备平面双分子层脂质膜的方法。方法:将卵磷脂或不同比例的卵磷脂与胆固醇混合液作为成膜液,采用涂抹法制备平面双分子层脂质膜;实验中控制脂质的成分及周围的电解质环境,摸索最佳成膜条件;将含有两性霉素B的脂质体或α-toxin加入膜的一侧实验槽内,使其与双分子层脂质膜相融合并形成孔道,观察孔道形成中成膜质量。结果:最终确定的方法制备的平面双分子层脂质膜稳定性强,并能与含有两性霉素B的脂质体迅速融合,孔道形成过程中性质稳定。结论:涂抹法是一种比较稳定的脂质膜制备的简便有效方法,可为离子通道蛋白动力学及药理学特性的研究提供研究载体。
- 梁佳会刘智飞周文曾晓荣杨艳
- 关键词：涂抹法
- 一种有效急性酶分离大鼠心肌细胞及复钙的方法被引量：2
- 2016年
- 目的:本研究旨在探讨一种既简便又高效的急性酶分离大鼠心肌细胞及有效复钙的方法,拟建立一种稳定高效分离大鼠心肌细胞且复钙后细胞成活率高的方法,为进一步研究单个心肌细胞的各种生理机制等诸多实验提供有利的前提保障。方法:应用II型胶原酶于Langendorff灌流装置下进行恒压或恒流灌流,得到横纹清晰、立体感较强的大鼠心肌细胞,然后应用三步法对心肌细胞进行复钙。结果:应用Langendorff灌流系统对大鼠心脏进行恒压或恒流灌流II型胶原酶,成功得到横纹清晰、立体感较强的大鼠心肌细胞,且复钙后在台式液中存活率仍然高达50%。结论:成功建立了一种既简便高效又稳定的急性分离大鼠心肌细胞且复钙后心肌细胞成活率较高的方法,为今后研究大鼠心肌细胞舒缩功能及其基本生理特性提供良好的单个细胞。
- 程俊曾晓荣谭晓秋李鹏云文静毛亮杨艳
- 关键词：心肌细胞LANGENDORFF
- ACTIVATION OFTRPM8 CHANNELS IS INVOLVED IN THE VASODILATORYEFFECTOFBORNEOL (BINGPIAN)
- Transient receptor potential melastatin 8（TRPM8）is a member of the melastatin subfamily ofTRP channels which a...
- Gui-Lan ChenMing LeiYan YangXiao-Rong Zeng
- 关键词：TRPM8BORNEOLMESENTERICARTERYVASODILATION
- 一种改良的原代大鼠乳鼠心肌细胞分离及培养方法被引量：6
- 2016年
- 目的:本研究旨在探讨一种经改良后既稳定又高效的分离大鼠乳鼠心肌细胞的原代分离和培养方法,拟建立此种方法,为进一步研究单个心肌细胞上的各种电生理机制等诸多实验提供有利的前提保障。方法:取出生1-3天内SD大鼠心脏,联合应用胰蛋白酶和Ⅱ胶原酶两步消化,离心收集到心肌细胞,差速培养,加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷纯化后得到原代心肌细胞,经高糖DMEM培养,即可得到立体感较强的大鼠乳鼠心肌细胞。结果:联合应用胰蛋白酶和Ⅱ胶原酶两步消化,经过高糖DMEM培养后得到的心肌细胞存活率高、纯度高、折光性好、立体感较强,有节律性搏动。结论:成功建立了一种既简便高效又稳定的分离大鼠乳鼠心肌细胞的方法,为今后研究乳鼠心肌细胞的功能及其基本电生理特性提供良好的单个细胞,可广泛应用于各种心血管疾病的研究中。
- 程俊曾晓荣谭晓秋李鹏云文静陈琳琳杨艳
- 关键词：乳鼠心肌细胞
- HUMAN BKCA CHANNELGENE CLONE AND EXPRESSION IN HEK293 CELLS
- Objective:This study aimed to reconstruct histidine-tagged human large conductance Ca2+-sensitive K+channels（B...
- Liang MAOWen-jun HUANGChang LIJia-hui LIANGXiao-rong ZENGZhi-fei LIUYan YANG
- 关键词：BKCADEPENDENCECALCIUMRECOMBINANTEXPRESSION
- 人肠系膜血管平滑肌细胞BK_(Ca)通道在HEK293细胞上的表达方法研究
- 2014年
- 目的:本研究旨在HEK 293细胞系上成功表达人肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channels,BKCa),建立一种稳定高效表达人肠系膜血管平滑肌细胞BKCa的HEK 293细胞系方法,进一步揭示在工具细胞表达上的BKCa的基本特性,为以后的诸多实验提供参考价值。方法:应用基因工程技术构建人肠系膜血管平滑肌细胞BKCa通道基因表达载体,用脂质体转染法转染HEK 293细胞,建立了稳定高效表达BKCa通道的HEK 293细胞系的方法。结果:在HEK 293细胞系上表达的BKCa单通道电流的电导值为229.56±4.62 p S,具有电压依赖性,钙离子敏感性等特性;在HEK 293细胞系表达的BKCa全细胞宏观电流具有明显的电压依赖性和外向整流特性。结论:成功建立了一种在HEK293细胞系上表达的BKCa通道的实验方法,并成功记录到BKCa通道的单通道电流和全细胞宏观电流,且与天然细胞上BKCa通道电流特性基本一致。
- 程俊曾晓荣谭晓秋李鹏云文静毛亮杨艳
- 关键词：大电导钙激活钾通道膜片钳
