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广东省科技计划工业攻关项目(20118020800005)
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
相关作者:
王敬伟
冷炫
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广东省科技计划工业攻关项目
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2013
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低氧诱导人视网膜微血管内皮细胞核中乙酰肝素酶对血管内皮生长因子基因转录调控研究
被引量:2
2013年
目的通过观察低氧诱导人视网膜血管内皮细胞(HRECs)胞核中乙酰肝素酶(HPA)和RNA聚合酶II(Pol Ⅱ)的表达分布、两者相互结合及其与血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子的作用,探讨在低氧诱导视网膜新生血管形成中HPA对VEGF基因转录调控的作用。方法用低氧模型模拟剂Cocl2建立低氧模型(含Cocl2100μmol/L的培养液培养48h)。免疫荧光染色法观察HPA与PolⅡ的表达;免疫沉淀法半定量分析HPA及PolⅡ的相互结合作用;染色质免疫沉淀(ChIP)联合实时定量PCR分析两组细胞中HPA与VEGF基因启动子之间的相互作用。结果(1)免疫荧光染色结果显示低氧诱导组HRECs胞核内HPA荧光和PolII荧光均较正常对照组增强,且低氧诱导组胞核内HPA分布与PolⅡ相吻合。(2)免疫沉淀结果表明在低氧诱导HRECs中HPA及PolⅡ相互结合共同作用,而对照组中HPA及PolⅡ则无结合。(3)ChIP联合实时定量PCR实验结果显示HPA及PolⅡ与VEGF启动子结合的高发生区段主要位于VEGF启动子序列-1165与-984之间,低氧诱导HRECs细胞核内HPA及PolII结合VEGF基因启动子水平均较正常组升高(t=-13.591,P=0.001;t=-3.188,P=0.049)。结论在低氧诱导的HRECs中,核内HPA与VEGF基因启动子直接结合,并参与了VEGF基因转录活性的调控。
王敬伟
胡洁
宋新
冷炫
田景毅
吕林
关键词:
MICROVASCULAR
ENDOTHELIAL
ENDOTHELIAL
IMMUNOPRECIPITATION
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