国家自然科学基金(30472274)
- 作品数：17 被引量：171H指数：7
- 相关作者：张荣华蔡宇杨丽朱晓峰黄丰更多>>
- 相关机构：暨南大学暨南大学附属第一医院更多>>
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- 益骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠血清PTH、CT的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:观察益骨胶囊治疗用药对去卵巢骨质疏松大鼠血清PTH、CT的影响,以探讨益骨胶囊治疗骨质疏松症可能的作用机制。方法:48只10月龄SD雌性大鼠随机抽取12只为假手术组,剩余36只待手术造模后随机分为3组:模型组、益骨胶囊低剂量组、益骨胶囊高剂量组;以双侧卵巢切除法复制骨质疏松模型,采用放射免疫方法测定血清PTH和CT水平。结果:大鼠造模24周时血清CT水平,益骨胶囊低剂量和高剂量组均高于模型组、其中低剂量组低于假手术组、高剂量组与假手术组接近;大鼠造模24周时血清PTH水平,益骨胶囊低剂量和高剂量组均低于模型组、其中低剂量组高于假手术组、高剂量组与假手术组接近。结论:益骨胶囊高、低剂量组均能升高骨质疏松大鼠血清CT水平、降低血清PTH水平,且高剂量组疗效优于低剂量组。
- 张荣华彭勇杨丽蔡宇朱晓峰
- 关键词：益骨胶囊甲状旁腺激素降钙素
- 益骨胶囊含药血清对共育体系中破骨细胞活性和凋亡的影响被引量：6
- 2006年
- 目的:观察益骨胶囊含药血清在成骨-破骨细胞共育体系中对SD大鼠破骨细胞(OC)活性和凋亡的影响。方法:(1)取1d龄SD大鼠颅骨分离培养成骨细胞(OB),取5d龄SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养OC,建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系,实验分为含药血清组和对照组;(2)将10月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清;(3)重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和光镜观察骨陷窝数;(4)光镜和荧光显微镜下观察共育体系中OC凋亡情况。结果:含药血清组在48 h7、2 h9、6 h对成骨-破骨细胞共育体系中OC分泌TRACP的活性均明显降低于对照组,OC的存活数明显低于对照组,OC的凋亡率明显高于对照组且呈明显的时效关系;所形成骨吸收陷窝的数目明显低于对照组(P<0.01)。结论:益骨胶囊含药血清在共育体系中能够抑制OC活性,诱导破骨细胞的凋亡。
- 张荣华徐立群傅淑平杨丽
- 关键词：益骨胶囊破骨细胞含药血清
- 中药诱导MSCs向神经样细胞分化研究现状与探讨被引量：1
- 2007年
- 中药可以诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化,从中药复方制剂、单味药、中药有效成分、中药含药血清四方面分析其研究现状,提出存在的问题,对下一步研究工作进行探讨和展望。
- 胡向阳张荣华
- 关键词：中药干细胞分化
- 益骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨形态学与血清雌二醇及肿瘤坏死因子α变化的干预被引量：6
- 2005年
- 目的:观察益骨胶囊预防用药对去卵巢骨质疏松大鼠骨形态学及血清雌二醇、肿瘤坏死因子α的影响。方法:实验于2003-03/10在暨南大学完成。36只10月龄SD雌性大鼠随机抽取12只为假手术组,其余24只在手术造模后随机分为模型组及预防组;以双侧卵巢切除法复制骨质疏松模型;各组均在手术后3天开始灌胃,假手术组、模型组灌胃生理盐水3mL、预防组灌胃益骨胶囊水溶液3mL,1次/d,共24周。股骨组织脱钙切片观察骨形态学;放射免疫方法测定血清雌二醇和肿瘤坏死因子α水平,评估雌二醇抑制肿瘤坏死因子α而抗骨质疏松的作用。结果:实验过程中无实验动物死亡,均进入结果分析。①光镜下骨形态学改变:假手术组苏木精-伊红染色见骨小梁粗壮、饱满,着色较深,形态结构完整,骨髓腔相对较小,腔内造血细胞数量较多,模型组骨小梁纤细,着色淡,数目减少且形态结构完整性差,有的部位有扭曲和断裂,骨小梁连接点减少,游离末端增多,骨小梁间隙增大,骨髓腔增宽,骨髓腔内造血细胞减少,脂肪细胞增多,预防组骨小梁数目较多,形态结构完整,骨小梁壁厚,骨小梁连接点多,游离末端少,骨髓腔小,骨髓腔内造血细胞较多,脂肪细胞少见。②假手术组和预防组24周时血清雌二醇水平接近,但两者均明显高于模型组犤(88.703±15.210),(83.02.±12.007),(27.825±10.393)ng/L,P<0.01犦,前两组相接近(P>0.05)③假手术组和预防组24周时血清肿瘤坏死因子α水平接近,但两者明显高于模型组犤(0.906±0.258),(1.222±0.436),(2.900±0.788)mg/L,P<0.01犦,前两组相接近(P>0.05)。结论:实验结果显示,模型大鼠血清雌二醇水平明显降低,这是由于大鼠卵巢分泌雌二醇功能丧失,导致体内雌二醇水平下降;大鼠血清中骨吸收刺激因子肿瘤坏死因子α含量明显升高,表明在正常情况下雌二醇对肿瘤坏死因子α有一定的抑制作用,当雌二醇水
- 杨丽张荣华朱晓峰蔡宇黄丰
- 关键词：卵巢切除术
- TNF-α对共育体系中成骨细胞凋亡的影响及益骨胶囊含药血清的保护作用被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对成骨-破骨细胞共育体系中成骨细胞(OB)凋亡的影响及益骨胶囊含药血清的保护作用。方法:(1)将20只10月龄SD大鼠随机分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水灌胃组,制备含药血清与空白血清;(2)将分离的OB与破骨细胞(OC)分别接种到共育体系中,加培养液培养后,同时添入20μg/L、30μg/L、40μg/L、50μg/L、60μg/LTNF-α分别作用24h、48h、72h诱导OB凋亡,用DNA电泳法确定最佳诱导方案;(3)将细胞分为TNF-α组、TNF-α+含药血清组、TNF-α+空白血清组和正常对照组,分别加入DMEM培养液、含药血清培养液、空白血清培养液、DMEM培养液,除正常对照组加入PBS外,其它各组均同时加入60μg/LTNF-α,培养72h后,用荧光染色法、DNA电泳法、流式细胞仪观察各组OB凋亡情况。结果:(1)60μg/LTNF-α作用72h后,共育体系中OBDNA电泳呈较典型的梯形改变;(2)TNF-α+含药血清组中OBDNA电泳仅出现二个条带,荧光染色可见大多数细胞均匀染色,其凋亡率(9.60%±0.26%)明显低于TNF-α组(26.90%±0.06%)与TNF-α+空白血清组(18.10%±0.06%),P<0.01。结论:60μg/LTNF-α作用72h可诱导共育体系中OB凋亡;益骨胶囊含药血清对TNF-α诱导的OB凋亡具有抑制作用。
- 傅淑平张荣华徐立群
- 关键词：肿瘤坏死因子益骨胶囊成骨细胞
- 建立大鼠骨髓间充质干细胞稳定分离培养体系与鉴定被引量：64
- 2009年
- 背景:骨髓间充质干细胞作为种子细胞在组织工程等领域应用广泛,建立稳定的分离培养体系和统一鉴定标准尤为重要。目的:以不同方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2005-08/12在暨南大学完成。材料:SPF级3月龄SD雌性大鼠5只,由中山大学实验动物中心提供。方法:无菌条件下分离大鼠双下肢,低糖DMEM培养液冲出骨髓,分别运用全骨髓贴壁法和密度梯度离心法体外分离骨髓间充质干细胞,利用差速贴壁原理对细胞进行纯化扩增。取生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞,分别加入成骨、成脂、成软骨诱导培养基,培养14d。主要观察指标:倒置相差显微镜下观察骨髓间充质干细胞的生长状态,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,采用碱性磷酸酶染色鉴定成骨能力,以油红O染色鉴定成脂能力,以甲苯胺蓝染色鉴定成软骨能力。结果:与密度梯度离心法相比,全骨髓贴壁法分离获得的骨髓间充质干细胞贴壁时间短,增殖快,经传代后能够纯化。第3代骨髓间充质干细胞形态单一均匀,呈典型的极性漩涡状生长,不表达造血前体细胞标志抗原CD34和白细胞标志抗原CD45,表达整合素家族成员CD29和黏附分子CD44,经诱导后碱性磷酸酶染色、油红O染色和甲苯胺蓝染色均呈阳性。结论:采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠骨髓间充质干细胞,效果优于密度梯度离心法。经全骨髓贴壁法体外分离培养的细胞在形态学、细胞表面标志物表达和多向分化能力方面具有干细胞生物学特性,经鉴定为大鼠骨髓间充质干细胞。
- 杨丽张荣华谢厚杰蔡宇黄丰
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 益骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织TGF-β_1mRNA表达的影响被引量：8
- 2005年
- 目的:观察益骨胶囊预防和治疗用药对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织TGF- β1mRNA基因表达的影响,在分子水平上阐明益骨胶囊防治骨质疏松症的可能作用机制。方法:从72只10月龄SD雌性大鼠中随机抽取24只为假手术A和B组,余48只待手术造模后随机分为4组:模型A组、模型B组、预防组、治疗组,每组12只;以双侧卵巢切除法复制骨质疏松模型;预防各组均在手术后3天即开始灌胃,假A组、模A组灌胃NS3ml、预防组灌胃益骨胶囊水溶液3ml,每天1次,共24周;治疗各组均在手术后第13周即开始灌胃,假B组、模B组灌胃NS3ml、治疗组灌胃益骨胶囊水溶液3ml,每天1次,共12周。FQ- PCR方法检测骨组织TGF- β1mRNA基因表达。结果:大鼠造模24周时,益骨胶囊预防组和治疗组骨组织TGF- β1mRNA基因表达均明显高于模型组,与假手术组相近。结论:益骨胶囊能促进骨组织TGF- βmRNA基因表达。
- 张荣华杨丽朱晓峰蔡宇黄丰
- 关键词：益骨胶囊大鼠骨组织去卵巢SD雌性大鼠双侧卵巢切除法
- 去卵巢对SD大鼠MSCs生物学特性的影响被引量：8
- 2010年
- 目的:通过比较正常与双侧卵巢切除法复制的骨质疏松症(OP)模型大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的形态学、生长曲线及细胞周期的差异,观察去卵巢对SD大鼠MSCs生物学特性的影响。方法:20只10月龄SD大鼠随机分成模型组和假手术组,每组10只;以双侧卵巢切除法复制OP模型;造模12周后,采用全骨髓贴壁法提取正常和OP大鼠MSCs;差速贴壁原理纯化MSCs;分别采用倒置相差显微镜、透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)观察并比较正常与OP大鼠MSCs的形态学差异;MTT法检测正常与OP大鼠MSCs生长曲线;流式细胞仪检测正常与OP大鼠MSCs细胞周期。结果:OP大鼠MSCs细胞形态变得宽大、扁平,细胞内部细胞器减少,细胞活力下降,并有向脂肪细胞分化的现象发生;与正常组比较,OP大鼠细胞的增殖能力下降。结论:去卵巢导致大鼠MSCs形态变得宽大、扁平,体外增殖能力下降。
- 杨丽张荣华蔡宇黄丰
- 关键词：骨髓间充质干细胞形态学
- 肾主骨生髓理论与骨髓间充质干细胞骨向分化被引量：20
- 2006年
- 张荣华欧阳菁
- 益骨胶囊含药血清对成骨细胞骨保护蛋白mRNA表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:观察益骨胶囊含药血清对体外培养的大鼠成骨细胞骨保护蛋白mRNA的影响。方法:实验于2004-05/2005-02在广州暨南大学生命科学技术学院细胞与蛋白质工程实验室完成。选取12月龄SD雌性大鼠20只,随机分为2组。中药给药组(益骨胶囊由淫羊藿、当归、白芍、枸杞子等8味中药组成)和蒸馏水对照组,每组10只。运用大鼠灌胃的方法制备含药血清和对照血清,分离、培养新生大鼠的颅骨成骨细胞,传代后分为2组(含药血清组和空白血清对照组),每组8孔,分别在培养24,48h时用反转录聚合酶链反应技术测定特异性电泳条带所显示成骨细胞中骨保护蛋白mRNA的相对表达量,酶联免疫法检测48,72和96h时200mL/L终浓度培养上清中骨保护蛋白的浓度。结果:两组动物各10只,均无亡失,所取血清正常用于细胞培养。①成骨细胞在接种4h后可见部分细胞贴壁、伸展。随培养时间延长,细胞伸出较多突起,细胞形态为单核,多边形及梭形,培养2d细胞基本全部贴壁,主要为梭形或多边形,培养6d左右基本贴满瓶壁,呈铺路石样排列。单层铺满培养瓶后可出现重叠生长,传代细胞大约15d天左右开始形成矿化结节。②特异性电泳条带显示益骨胶囊含药血清培养后24h和48h成骨细胞骨保护蛋白mRNA的表达均高于空白血清对照组犤(0.196±0.015,0.236±0.016),(0.152±0.018,0.206±0.022),P<0.01犦;③200mL/L终浓度的益骨胶囊含药血清培养后48,72和96h成骨细胞骨保护蛋白的表达明显高于空白血清对照组犤(0.1230±0.0128,0.1681±0.0130,0.1983±0.0186),(0.1067±0.0106,0.1385±0.0126,0.1588±0.0121),P<0.01或P<0.05犦。结论:益骨胶囊含药血清具有促进成骨细胞表达骨保护蛋白的作用。提示益骨胶囊能够通过对成骨细胞的影响而对骨吸收环节具有抑制作用,但是否对其他信号通路也有作用尚待研究。
- 朱晓峰张荣华孙升云蔡宇郑仕富王廷春陈超李洁华
- 关键词：成骨细胞
