浙江省自然科学基金(Y206582)
- 作品数：8 被引量：59H指数：4
- 相关作者：金龙金楼哲丰张李雅郑九嘉吕建新更多>>
- 相关机构：温州医学院温州医学院附属第一医院温州大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金温州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PCR-RFLP和PCR-SSCP方法对弱精子症精子mtATPase6基因突变的检测被引量：7
- 2007年
- 为了检测弱精子症精子mtATPase6基因突变,采用PCR方法扩增了17例弱精子症mtDNA8602～9416区域815bp目的片段,用MspI和HaeⅢ限制性内切酶酶切,分别用琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和单链构像多态性(SSCP)筛查突变。筛选出3例突变标本,经测序确认突变位点和突变性质。结果显示17例标本全部扩增出mtDNA8602～9416的815bp目的片段,PCR产物经MspI限制性内切酶酶切后电泳结果与剑桥序列预期酶切图谱相一致。PCR产物经HaeⅢ酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上出现泳动带的异常,在17例弱精子症中共筛选出2例酶切片段异常标本。PCR-HaeⅢ酶切产物的SSCP电泳图谱分析结果显示,在PCR-RFLP(HaeⅢ)电泳图谱正常的15例弱精子症标本中筛选出1例异常。两种方法在弱精子症精子标本中筛选出mtATPase6基因突变3例(3/17,17.7%)。3例测序结果发现A8701G、C8943T、C8964T、T8966C、G9053A、C9060A、C9075T、A9120G、C9296T共9个点突变,其中A8701G、T8966C、G9053A三个突变为错义突变,其余均为同义突变。上述结果提示,弱精子症精子mtATPase6基因存在较高突变率;PCR-RFLP和PCR-SSCP能简单、快速、灵敏地筛选mtATPase6基因突变。
- 金龙金张春玲楼哲丰张李雅陈林丽李玮吕建新
- 关键词：弱精子症点突变PCR-RFLPPCR-SSCP
- mtND4基因突变与弱精子症精子的相关分析被引量：4
- 2011年
- 目的分析弱精子症精子mtND4基因突变与弱精于症的相关性，探索弱精子症的分子病因。方法按WHO标准收集56例弱精子症精液标本和44例精子活力正常精液标本，用3对引物PCR扩增mtND4基因，纯化测序，分析mtND4基因突变，比较2组标本mtND4基因突变及多重单核苷酸多态性（SNP）的差异。结果发现31个同义突变位点和12个错义突变位点，其中6个核苷酸变异位点未报道过，分别为A11026G、C11215T、A11488G、C11713T、C12908T、T10908C。对照组mtND4基因T10873C和T11944C变异率分别为61．4％（27／44）和11．4％（5／44），显著高于弱精子症组的39．3％（22／56）和0％（P〈0．05）；除T10873C和TI1944C变异外，错义突变分析发现，对照组10例中与T10873C或T11944C组成多重SNP8例，而弱精子症组10例标本中仅2例，2组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；上述20例错义突变标本分成多重SNP组（与T10873C或T11944C）和非多重SNP组，多重SNP组a级精子百分率和a＋b级精子百分率均显著高于非多重SNP组（P〈0．05）。结论mtND4基因错义突变可能影响精于活动力，T10873C和T11944C多态性变异对精子活动力可能是一个有益因子，两者同时存在组成多重SNP时，两者的作用可能具有相互抵消的效应。
- 李传连郑九嘉杨宗黄学锋方可欣楼哲丰吴永根金龙金
- 关键词：弱精子症基因突变多态性单核苷酸
- 实时荧光定量PCR检测精子线粒体DNA的提取效率
- 2011年
- 目的:测定宝生物工程有限(大连)公司和上海杰美基因医药科技有限公司两种试剂盒精子线粒体DNA提取的效率,以及核基因组DNA的残留。方法:CASA法计数精子数量,试剂盒提取线粒体DNA,TaqMan法荧光实时定量PCR,利用标准曲线测定线粒体基因Cox-I片段、核基因β-actin片段的拷贝数,计算出精子线粒体DNA的提取效率和核基因组DNA的残留。结果:两种试剂盒精子线粒体DNA提取效率分别是:0.44%±0.03%和6.19%±0.17%。核基因组DNA的残留率分别为4.71%±0.76%和38.1%±1.97%。结论:后者线粒体DNA提取效率高一个数量级,但核基因组DNA的残留率也高一个数量级。
- 杨雷胡理怀杨宗郑九嘉金龙金
- 关键词：实时荧光定量PCR线粒体DNA精子TAQMAN
- 弱精子症精子线粒体DNA A3 243G,G3 316A和T3 394C突变的检测
- 2009年
- 目的:检测弱精子症精子线粒体tRNAleu 3 243位点、线粒体ND1 3 316位点和3 394位点碱基突变频率,分析三个位点突变与弱精子症的相关性。方法:按WHO标准随机收集了69例弱精子症患者精子标本和60例正常人正常活动力精子标本,以聚合酶链反应、ApaⅠ和HaeⅢ限制性内切酶长度多态性分析和测序检测mtDNA A3 243G、G3 316A和T3 394C三个位点的突变,比较两组突变频率的差异。分析G3 316A和T3 394C突变的氨基酸变异情况并结合生物信息学工具分析错义突变氨基酸进化保守性。结果:弱精子症精子mtDNA G3 316A突变率(4.35%)、T3 394C突变率(2.90%)和总突变率(7.25%)与正常对照组(分别为5.00%、1.67%和6.67%)比较,差异无显著性。氨基酸变异分析发现,G3 316A(Ala->Thr)、T3 394C(Tyr->His)均为错义突变,其中T3 394C突变位点所编码的氨基酸在人、牛、小鼠、爪蟾4种生物中进化具有高度保守性。结论:G3 316A和T3 394C突变可能不是影响人类精子活动力的主要因素。
- 凌雪梅方可欣楼哲丰张巍张李雅金龙金
- 关键词：弱精子症MTDNA突变
- 线粒体基因ND3、ND4L核苷酸变异与弱精子症相关分析被引量：5
- 2010年
- 目的:对弱精子症(AST)精子线粒体DNAND3、ND4L基因突变检测和分析,探索弱精子症致病的分子机制。方法:收集弱精子症患者50例,年龄匹配的对照42例,用密度梯度离心将弱精子症患者和对照组的不同活力精子进行分离,扩增线粒体ND3、ND4L基因,测序和比对,比较弱精子症组和对照组线粒体ND3、ND4L基因核苷酸变异和单体型差异。结果:在弱精子症组和对照组中共检测出22个变异位点,其中A10157G和A10313C未见报道,G10320A、A10398G、T10609C为错义突变。A10398G和C10400T核苷酸变异率在弱精子症组显著低于对照组(P<0.05),G10310A核苷酸变异率在弱精子症组显著高于对照组(P<0.05);单体型分析可见弱精子症组单体型N百分率(33/50)显著高于对照组(14/42)(P<0.05),单体型R9在弱精子症组(15/50)的比例显著高于对照组(4/42)(P<0.05);单体型F1、F2和R9的前向运动精子百分率显著低于单体型M和Mrest(P<0.05)。对弱精子症同一病例不同活力精子进行检测,有2例不同活力的精子的线粒体单体型存在差异,活力好的精子为单体型M,而活力差的精子为单体型N;在50例弱精子症中有2例活力中等和活力差的精子标本中检测出G10310A异质性突变,而在活力好的精子标本中无G10310A突变。结论:线粒体单体型与精子活力可能存在一定的相关性;线粒体DNA10398G-10400T多态性可能是精子活力的有益因素,线粒体DNAG10310A突变可能是精子活力的有害因素。
- 李传连楼哲丰黄学锋吴永根张李雅吕建新金龙金
- 关键词：弱精子症单体型
- 线粒体呼吸功能与精子活力、核DNA损伤的相关性分析被引量：38
- 2012年
- 为探讨线粒体呼吸功能与精子活力、核DNA损伤程度之间的相关性,按WHO标准收集34例不同活力的精液标本,采用蔗糖差速离心法或密度梯度离心法提取精子线粒体,通过铂氧电极–溶氧仪测定线粒体呼吸耗氧率并计算状态III呼吸、状态IV呼吸、呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)及氧化磷酸化效率(OPR);应用精子染色质扩散(sperm chromatin dispersion,SCD)实验检测精子DNA损伤情况。结果表明:不同活力精子线粒体状态III呼吸耗氧量之间具有显著差异(P<0.01);弱精子症组RCR和OPR与正常对照组比较,分别降低了17.03%(P<0.05)和40.74%(P<0.01);精子DNA损伤程度与精子活力、状态III呼吸及OPR均呈极显著负相关(r值分别是-0.812、-0.788和-0.696)。以上结果提示:精子线粒体呼吸耗氧和氧化磷酸化功能与精子活力之间存在着密切的联系;精子DNA(包括mtDNA)损伤可能影响精子的正常功能。
- 郑九嘉楼哲丰郑蔚虹金建远倪吴花李平金龙金
- 关键词：精子活力线粒体氧化磷酸化DNA损伤
- mtATPase6基因变异与弱精子症的相关分析被引量：9
- 2008年
- 为了分析mtATPase6基因突变与弱精子症的相关性,按WHO标准收集了27例弱精子症精液标本和28例精子活力正常精液标本,PCR扩增mtATPase6基因,纯化测序,分析mtATPase6基因突变,比较两组突变频率的差异。结合生物信息学工具分析错义突变位点的氨基酸进化保守性及其蛋白质部分三级结构。结果显示:发现了6个未曾报道过的突变位点;弱精子症组mtATPase6基因平均突变率显著高于对照组,可能与弱精子症有一定的相关性。G8584A、A8701G和G9053A三个错义突变可能是多态性位点,其余8个错义突变中的6个具有进化保守性的位点累计突变频率显著高于对照组,这些位点突变可能与弱精子症有关。
- 金龙金李传连费前进张春玲黄学锋楼哲丰张李雅方可欣凌雪梅吕建新
- 关键词：弱精子症点突变
- mt ND2基因多态性与弱精子症的相关性分析被引量：4
- 2010年
- 为了探讨线粒体ND2(mt ND2)基因多态性与弱精子症的相关性,按WHO标准收集了134例弱精子症和1 12例精子活力正常的精液标本,PCR测序或双向等位基因PCR(Bi-PASA)技术分析ND2基因多态性,统计ND2基因4个位点多态性在两组间的差异。应用变性高效液相色谱(DHPLC)分析m.5442T>C和m.5466A>G多态性变异的异质性。结果发现了34个变异位点,其中6个位点未曾报道;ND2基因m.5351A>G、m.5460G>A和m.5466A>G变异率弱精子症组显著高于对照组(P<0.05),m.5442T>C变异率对照组显著高于弱精子症组(P<0.05);进一步分析m.5460G>A和m.5466A>G突变阳性标本精子活力显著低于突变阴性标本(P<0.001),m.5442T>C突变阳性标本精子活力显著高于突变阴性标本(P<0.001)。提示:ND2基因一些核苷酸变异(m.5351A>G、m.5460G>A和m.5466A>G)可能与弱精子症有关,m.5460G>A和m.5466A>G错义突变可能是精子活力的有害因素,而m.5442T>C多态性可能对精子活力具有一定的帮助。
- 郑九嘉黄学锋杨宗杨旭张李雅吕建新金龙金
- 关键词：弱精子症点突变基因变异
