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绵羊肌肉抑制素C-端的表达、纯化及多克隆抗体的制备: 2009年; 为深入了解绵羊myostatin基因的表达及调控机理,进行了绵羊myostatin蛋白多克隆抗体的制备。首先将绵羊myostatin基因C-端克隆入含组氨酸标签的表达载体pET-30a-c(+)中,转化大肠杆菌BL21后IPTG诱导表达,然后利用Ni2+亲和层析纯化重组蛋白,薄层扫描及Bradford法分别检测纯化后蛋白的纯度与含量。应用重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法检测多克隆抗体效价,用Western blot及免疫细胞化学染色检测抗体特异性。结果,薄层扫描分析纯化后蛋白纯度可达95%以上,Bradford法检测蛋白浓度约5 mg.mL-1,制备的抗血清效价可达1∶250 000以上,Western blot检测证明抗体特异性良好,免疫细胞化学染色表明抗血清可检测到肌肉细胞中内源性myostatin的表达,说明所制备的多克隆抗体可以应用于进一步研究,有助于阐明绵羊myostatin的表达及调控机理。; 马毅舒建洪李晴关宏安晓荣陈永福; 关键词：绵羊克隆原核表达纯化多克隆抗体

奶牛亲子鉴定技术研究进展被引量：5: 2009年; 在奶牛育种工作中,完整、准确的系谱信息对育种进程产生很大影响。通过亲子鉴定正确判别亲子关系,修正错误系谱信息,确认优秀种公牛,对促进奶牛品种改良具有重要意义。微卫星DNA是一类高度多态性的遗传标记系统,具有数量多、易于PCR扩增和分型等优点,是目前奶牛亲子鉴定的常用方法。应用微卫星标记建立奶牛基因身份识别数据库,是对奶牛品种登记制度的补充和完善。本文将对奶牛亲子鉴定的研究进展作一综述,并对奶牛基因身份识别数据库作简要介绍。; 焦利红田雨泽贾福德朱芳贤马毅; 关键词：奶牛亲子鉴定 DNA多态性

奶牛冷冻稀释液研究进展: 2009年; 为了提高冻精质量,人们对稀释液进行了大量科学试验,获得许多重要成果。本文综述了奶牛冷冻精液稀释液的研究进展,为进一步研究稀释液和精子之间的相互关系及新型冷冻稀释液的开发和利用提供参考。; 焦利红马毅马文芝贾福德田雨泽朱芳贤赵庆斌汪连海郝建国张聚忠; 关键词：奶牛精子稀释液

应用重组肌肉抑制素C-端重组蛋白提高仔鼠出生质量的研究被引量：2: 2010年; 为探讨利用重组肌肉抑制素促进肌肉生长的可能性,本研究原核表达并纯化了肌肉抑制素C-端重组蛋白。将雌性小鼠同雄性小鼠合笼,妊娠后分笼饲养。应用重组蛋白免疫雌性昆明白小鼠。利用间接ELISA法检测抗血清效价。每周测母鼠及仔鼠体质量1次。结果表明:(1)免疫后对照组和试验组母鼠体质量差异不显著(P>0.05)。在妊娠后期(免疫后第11周),两组间体质量出现差异(P<0.05),试验组为(56.23±3.37)g,而对照组为(54.11±3.18)g。试验组体质量在第12周达到(79.16±3.72)g,而对照组为(75.23±3.44)g,差异极显著(P<0.01)。分娩后,这种差异消失(P>0.05)。(2)仔鼠出生体质量在2处理组间差异极显著(P<0.01),试验组仔鼠出生体质量比对照组增加25.8%左右;但在生长阶段仔鼠体质量差异有逐渐缩小的趋势。结论:应用肌肉抑制素C-端重组蛋白免疫母鼠可以显著提高仔鼠出生体质量。; 马毅李晴陈小强王文杰关宏安晓荣陈永福; 关键词：免疫抗体体质量

浅谈胚胎移植受体牛的选择标准被引量：2: 2009年; 牛胚胎移植技术对牛业的发展具有重要意义。通过胚胎移植技术的大范围应用,提高了良种牛覆盖率,加快了牛育种进程。胚胎移植技术同分子标记辅助选择、基因诊断、体细胞克隆等技术相结合,将发挥更大作用。胚胎移植效果受胚胎质量、移植技术水平和受体牛的状况三因素制约。因此,受体牛的选择对胚胎移植效率具有重要影响。本文将就受体牛的选择标准做一简单综述。; 贾福德朱芳贤马毅; 关键词：胚胎移植受体

奶牛主要经济性状QTL定位的研究进展被引量：3: 2010年; 产奶量、乳脂率、乳脂量、乳蛋白率、乳蛋白量、抗乳房炎及体细胞数、繁殖性能和生产寿命等均为奶牛的主要数量性状,而这些性状与奶牛的经济价值具有直接的关系,因此对奶牛的生产往往会产生巨大的影响。本文就目前国内外在奶牛几个主要经济性状的数量性状位点(QTL)定位的研究进展作一介绍。; 赵庆斌汪连海马毅; 关键词：奶牛经济性状 QTL

奶牛性控冻精人工授精效果的研究被引量：15: 2010年; 为研究奶牛性控冻精人工授精效果并合理制定人工授精方案,采用流式细胞仪制备性控冻精,对3 947头健康荷斯坦牛进行人工授精。结果表明：①性控冻精和常规冻精的受胎率、产犊率差异不显著（P〉0.05）,但性控冻精的雌犊率和繁殖率分别达到92.01%和50.03%,对照组仅为51.13%和34.97%,差异极显著（P〈0.01）。②青年牛的情期受胎率达到55.25%,极显著高于经产牛（P〈0.01）;青年牛的产犊率达到98.31%,显著高于经产牛（P〈0.05）;青年牛的繁殖率为51.84%,经产牛为42.12%,存在极显著差异（P〈0.01）。③采用第1次人工授精后10-11 h重复授精1次,每次1支性控冻精的授精方案,其情期受胎率为55.17%,繁殖率达到55.81%,同其他方案相比,差异极显著（P〈0.01）。应用性控冻精进行人工授精可以显著提高母牛的繁殖效率。; 马毅陈小强贾福德田雨泽张聚忠朱芳贤赵庆斌汪连海; 关键词：奶牛性别控制冷冻精液人工授精

应用乙肝核心抗原增强肌肉抑制素免疫原性的研究被引量：1: 2009年; 为提高肌肉抑制素(Myostatin,MSTN)免疫原性,进行了乙肝核心抗原(HBcAg)作为分子佐剂可能性的研究。利用PCR方法获得了MSTN的C端片段,并分别在乙肝核心抗原的N端、C端及中间位点融合,构建了3个融合表达克隆:pET-30a-MSTN/HBcAg(N)、pET-30a-MSTN/HBcAg(C)和pET-30a-MSTN/HBcAg(M),转化大肠杆菌后IPTG诱导表达,然后利用Ni2+亲和层析纯化融合蛋白。应用重组蛋白免疫小鼠后利用间接ELISA法检测抗血清效价。结果表明:融合蛋白免疫效果要显著优于MSTN(P<0.05);融合蛋白MSTN/HBcAg(M)的免疫效果最佳。乙肝核心抗原可以作为分子佐剂以增强肌肉抑制素免疫原性。; 马毅陈小强王文杰李晴关宏安晓荣陈永福; 关键词：乙肝核心抗原融合蛋白免疫原性

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天津市自然科学基金(08JCYBJC04500)