高层次人才科研启动基金(RCZX201027)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：石河子大学教育部石河子大学医学院第一附属医院更多>>
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- 结核杆菌CFP10和ESAT6真核表达载体双转染真核细胞的观察
- 2015年
- 为了构建结核分枝杆菌两个毒力因子CFP-10基因和ESAT-6基因共同表达的真核细胞模型,本实验采用脂质体转染方法,将重组表达载体CFP-10-PDs Red1-N1和ESAT-6-PEGFP-N1同时转染真核细胞293FT,通过倒置荧光显微镜和激光共聚焦观察,并经western blot检测分析。结果显示,经双转染的293FT细胞能够分别发出红色和绿色荧光,既能表达CFP-10,又能表达ESAT-6,且表达的蛋白分布于细胞质中,表明模型构建成功。由此可知,构建的这个细胞模型为进一步研究这两种毒力因子在宿主细胞中的作用机制奠定了基础。
- 王爽付强史慧君于潞李志强杜新辉曹旭东
- 关键词：结核杆菌真核细胞CFP-10ESAT-6
- 结核分枝杆菌ESAT6基因真核表达载体的构建及表达被引量：4
- 2013年
- 为了研究结核杆菌毒力因子ESAT6在结核杆菌感染细胞过程中的功能。采用分子生物学方法,根据Gen-Bank中登录的结核杆菌H37Rv的ESAT6基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增得到ESAT6基因DNA片段。将扩增片段克隆于pGM18-T载体中,测序验证后,再将ESAT6基因亚克隆至pEGFP-N1中,经核苷酸序列测定和酶切鉴定获得重组表达质粒pEGFP-N1-ESAT6。用重组表达质粒pEGFP-N1-ESAT6转染293T细胞。结果显示:重组表达质粒pEGFP-N1-ESAT6测序结果正确,转染细胞后出现绿色荧光,经Western blot分析鉴定,可见约35kDa的预期蛋白条带,证实ESAT6-EGFP融合蛋白在293T细胞中获得了表达。研究结果为进一步研究毒力因子ESAT6在感染宿主细胞中所发挥胞内生存机制奠定了基础。
- 李跃峰付强张俊波史慧君李志强程婷婷张辉曹旭东陈创夫
- 关键词：结核病ESAT6CFP10
