山东省农业良种工程项目([2011]086)
- 作品数：4 被引量：26H指数：3
- 相关作者：徐丽刘庆忠陈新张力思魏海蓉更多>>
- 相关机构：山东省果树研究所中国林业科学研究院更多>>
- 发文基金：山东省农业良种工程项目国家科技基础条件平台建设计划农业部作物种质资源保护项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 核桃Y_2SK_2型脱水素基因JrDHN的克隆、表达和单核苷酸多态性分析被引量：8
- 2014年
- 采用RT-PCR和RACE技术从‘香玲’核桃(Juglans regia L.‘Xiangling’)叶片中克隆了1个脱水素基因JrDHN(GenBank登录号KC503061.1),其全长1 056 bp,具有528 bp的开放阅读框,编码175个氨基酸组成的多肽,具有LEA家族成员的特征多肽序列,属于典型的Y2SK2型脱水素。以核桃18S基因为内参,对‘香玲’核桃JrDHN在4℃胁迫下的表达模式进行了初步的研究,结果表明低温诱导下叶片中JrDHN的表达增加,4℃处理4 h后达到最大值;自然越冬条件下,花芽中JrDHN表达量呈先上升后下降的趋势,在12月份表达量最高,推测JrDHN在核桃对低温胁迫响应中发挥重要功能。‘香玲’JrDHN在雌花中表达量高,其次是叶片和树皮,在花芽中最低。单核苷酸多态性分析JrDHN序列中有30个SNPs位点和11个Indels;单倍型分析显示12份核桃材料可分为10个单倍型,单倍型多样性为0.9697。
- 徐丽陈新魏海蓉张力思宗晓娟王甲威朱东姿刘庆忠
- 关键词：核桃脱水素基因定量RT-PCR单核苷酸多态性
- 榛子甜菜碱醛脱氢酶基因BADH的克隆及在越冬过程中的表达特性分析被引量：1
- 2013年
- 甜菜碱是高等植物体内一种重要的渗透调节物,甜菜碱醛脱氢酶(Betaine aldehyde dehydrogen-ase,BADH)是甜菜碱合成的关键酶之一,本文基于Solexa技术对平榛花芽转录组测序结果的分析采用RACE-PCR技术克隆到一个平榛BADH基因,命名为ChBADH(HQ700873)。ChBADH cDNA全长1 691 bp,具有一个1 512 bp的潜在编码区,编码503个氨基酸,预测其蛋白质相对分子量54.7 ku,理论等电点为5.44。Ch-BADH具有BADH家族保守的VSLELGGKSP功能活性位点和特征多肽序列,序列比较和生物信息学分析结果显示ChBADH在保守结构域和其他植物来源的BADH享有高度的一致性。以ACTIN为内参,对ChBADH基因在四个时期平榛的表达模式进行了初步的研究,荧光定量结果表明,ChBADH在寒冬时期被强烈的诱导表达,是非冷适应时期的3.5倍,推测该基因可能与榛子花芽越冬有紧密关系。
- 陈新王贵禧徐丽张力思刘庆忠崔海金张学寅
- 关键词：平榛甜菜碱醛脱氢酶QRT-PCR
- 核桃JrCBF基因的克隆与表达和单核苷酸多态性分析被引量：7
- 2014年
- 根据CBF基因氨基酸保守序列设计简并引物,运用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆核桃JrCBF基因cDNA全长序列。用实时荧光定量PCR分析JrCBF基因在低温胁迫下的表达模式,并分析JrCBF基因的单核苷酸多态性。结果获得长度为879 bp的CBF基因cDNA全长序列,编码214个氨基酸,命名为JrCBF;低温能诱导JrCBF基因的表达,4℃处理2 h后表达量开始增加,8 h后达到最大值;自然越冬条件下,JrCBF基因在花芽中表达量呈现先上升后下降的趋势,在寒冬时期(1月份)表达量最高;单核苷酸多态性分析JrCBF基因序列中有28个SNPs位点和7个Indels标记,存在2个突变热点区;单倍型分析显示15份材料可分为9个单倍型,单倍型多样性为0.9238。本研究为通过基因工程手段培育抗寒核桃品种和分子标记辅助育种提供了帮助。
- 徐丽陈新张力思魏海蓉刘庆忠
- 关键词：核桃基因克隆实时荧光定量PCR单核苷酸多态性
- 核桃WRKY4基因的克隆与表达分析被引量：12
- 2014年
- WRKY转录调控因子广泛参与植物的生长发育、生物胁迫和非生物胁迫等生理过程。本研究利用reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR)及rapid amplification of cDNA ends(RACE)技术克隆了核桃(Juglans regia L.)WRKY基因cDNA全长序列,命名为WRKY4(GenBank登录号为KC795551.1)。结果表明,克隆到的片段长度为2 174 bp,完整开放阅读框为1 554 bp,编码517个氨基酸。序列分析表明WRKY4基因含有2个WRKY保守结构域和2个C2H2锌指结构域,属于WRKY基因家族第Ⅰ类成员。利用实时荧光定量PCR分析4℃低温和自然低温条件对该基因表达的影响以及组织表达模式。结果表明WRKY4受低温诱导表达,能够在低温胁迫的早期响应这一生理过程。WRKY4在树皮(韧皮部)、雌花、花芽和叶片中均有表达,且在树皮中表达量最高,具有组织特异性。研究结果可为核桃抗寒基因工程育种提供基因资源。
- 徐丽陈新魏海蓉张力思王甲威宗晓娟刘庆忠
- 关键词：核桃WRKY转录因子基因克隆实时荧光定量PCR
