国家自然科学基金(30872419)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：袁作为郑建张君胡接力帅光泽更多>>
- 相关机构：教育部成都大学重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HIV疫苗研究进展被引量：1
- 2010年
- 自上世纪80年代发现第一例艾滋病人以来，艾滋病发病率急剧上升，为了控制急剧上升的流行趋势，在20多年间，研究者们研发了数百种艾滋病疫苗，但疫苗临床试验几乎都以失败告终。直到2009年底，由赛诺菲-巴斯德公司（Sanofi—Pasteur）和瓦克斯根（VaxGen）公司合作的联合疫苗Ⅲ期临床试验才初见成效，这给艾滋病疫苗研究带来了希望。本文就较有潜力的艾滋病疫苗作用机制、研究策略以及临床试验进行综述，展望未来艾滋疫苗的研究方向。
- 袁作为郑建
- 关键词：HIV艾滋病疫苗
- HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达及抗原性研究被引量：2
- 2010年
- 目的构建HIV跨膜蛋白gp41和gp36原核表达载体,诱导表达HIV抗原,为HIV快速诊断和蛋白疫苗研究提供材料基础。方法用PCR方法对HIV-1包膜蛋白gp41和HIV-2包膜蛋白gp36基因序列进行全长、截短扩增,分别或以融合表达方式克隆入原核表达载体pQE30、pET32a（＋）及pGST-MOLUC,重组质粒经异丙基硫代半乳糖苷（isopro-pyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导表达,并经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和纯化HIV跨膜糖蛋白抗原,对获得的纯化抗原进行Western blot检测,利用HIV抗原制备ELISA检测试剂盒,并分析HIV临床样本。结果成功构建了HIV包膜蛋白的原核表达载体,利用亲和层析纯化得到了纯度较高的HIV包膜蛋白;Western blot分析结果证实表达纯化的HIV跨膜蛋白gp41（aa.538~718）、gp36（aa.533~764）以及gp41-gp36均能和HIV阳性血清反应;ELISA试剂盒检测临床样本显示,特异性达95%以上,灵敏度达100%。结论获得了有生物学活性的HIV截短包膜蛋白,并可用于HIV快速检测试剂盒的研发。
- 袁作为帅光泽张君胡接力郑建
- 关键词：抗原性
- HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽的原核表达及纯化被引量：1
- 2011年
- 目的原核表达并纯化HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽sk1、sk2、sk3及3条肽段串联序列。方法用普通PCR及重叠延伸PCR法从HIV-1 B亚型质粒扩增得到sk1、sk2、sk3基因序列及3条肽段基因片段的6种连接序列,并分别克隆入原核表达载体pET-32a(+)及pGEX4T-2中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和层析纯化。SDS-PAGE分析融合肽的表达,Western blot分析融合肽的抗原性。结果分别以pET-32a(+)和pGEX4T-2为载体,共构建了18个重组表达质粒;his-sk1、his-sk123、his-sk213、his-sk231及GST-sk3、GST-sk123、GST-sk213分别在pET-32a(+)及pGEX4T-2表达载体中以可溶形式表达,且均能与HIV-1阳性血清反应,而不能与HIV DNA-天坛疫苗免疫血清反应;经大量诱导表达纯化后,GST-sk3表达量最高,可达40 mg/L,纯度超过90%。结论已成功表达并纯化了具有生物学活性的HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽,为研制HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别诊断试剂盒奠定了基础。
- 袁作为张君胡接力张秀瑜黄爱龙郑建
- 关键词：HIV自然感染疫苗抗体抗原肽
