国家自然科学基金(81241030)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
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- 胰淀素抑制高糖刺激INS-1细胞内钙离子浓度升高的作用机制被引量：2
- 2013年
- 目的 分析阐明胰淀素短时间作用于INS-1细胞、抑制高糖刺激的细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）升高的机制.方法 采用钙离子荧光指示剂Fluo-4/AM负载细胞后,激光共聚焦显微镜下连续动态观察INS-1细胞经胰淀素孵育前后在葡萄糖、KCl、咖啡因和卡巴胆碱存在条件下[Ca2＋]i荧光强度变化.结果 （1）单纯16.7 mmol/L葡萄糖刺激使细胞内钙离子荧光强度变化的曲线下面积（AUC）为990±16;0.5μmol/L胰淀素使16.7 mmol/L葡萄糖刺激的胞内荧光强度有所下降（AUC为831±10）,1.0、5.0、10.0μmoL/L胰淀素均可使细胞内荧光强度显著降低（AUC分别为555±9、535±6、531±5）,与单纯葡萄糖刺激组比较差异有统计学意义,且呈现剂量依赖趋势.（2）10.0 μmol/L胰淀素可使30 mmol/L KCl刺激的荧光强度明显减低,与单纯KCl刺激组相比（AUC：168 ±5比311 ±11）差异有统计学意义.（3） 10.0 μmol/L胰淀素预处理后咖啡因和卡巴胆碱刺激的胞内荧光强度与单纯咖啡因和卡巴胆碱刺激组相比差异无统计学意义.结论 高浓度胰淀素的短时间作用对INS-I细胞经咖啡因和卡巴胆碱刺激的内质网鱼尼丁受体（ryanodine receptor,RyR）、三磷酸肌醇（IP3）钙库释放没有影响,但可使高糖及KCl刺激的胞内荧光强度降低.推测胰淀素短时间作用使[Ca2＋]i减少的现象,主要是通过影响膜上钙通道实现的,与胞内钙库的释放无直接相关性.
- 陈延延朱铁虹刘如明贺秉军赵新王英姿李代清徐晏
- 关键词：胰淀素INS-1细胞钙离子
- 胰淀素对格列苯脲刺激INS-1细胞胰岛素分泌作用的影响及其机制被引量：2
- 2015年
- 目的 研究胰淀素短时间条件下对格列苯脲刺激INS-1细胞胰岛素分泌的影响及机制.方法 分别采用全细胞膜片钳技术、激光共聚焦显微镜技术及ELISA分析不同浓度胰淀素短时间孵育前后格列苯脲刺激下INS-1细胞ATP敏感性钾通道（KATP通道）电生理学特性、细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）及胰岛素含量变化.结果 （1） ELISA结果显示：与1μmol/L格列苯脲刺激下胰岛素释放量（11.43 ±1.22） μg/L比较,0.1μmol/L胰淀素预处理组[（11.45 ±1.20） μg/L]无明显差异,而1 μmol/L及10 μmol/L胰淀素预处理组均显著下降,分别为（9.40±0.87）μg/L和（7.11±0.85） μg/L,且呈剂量相关性（P＜0.05）;（2）激光共聚焦显微镜测钙结果显示：1μmol/L格列苯脲刺激后[Ca2＋]i荧光强度变化的AUC为427.78±2.32,0.1μmol/L胰淀素预处理组（424.09 ±2.21）与之差异无统计学意义;而1 μmol/L及10 μmol/L胰淀素预处理组均可使其AUC显著降低（分别为380.59 ±1.49和246.53±8.41）,并呈剂量相关性（P＜0.05）;（3）全细胞膜片钳结果显示：在1μmol/L、10 μmol/L胰淀素预处理组中,1μmol/L格列苯脲刺激下KATP通道半数激活电压（V0.5）分别为（28.75 ±0.77）mV和（46.95 ±1.81）mV,均显著高于单纯格列苯脲组（14.59±0.69）mV,并呈剂量相关性（P＜0.05）.结论 高浓度胰淀素短时间作用可抑制格列苯脲对KATP通道的关闭,进而抑制[Ca2＋]i增加,推测这种作用是INS-1细胞胰岛素分泌减少的机制之一.
- 肖金凤李晓通赵新贺秉军商学良韩丽鑫吴广彦丁雪梅朱铁虹
- 关键词：胰淀素INS-1细胞格列苯脲胰岛素
- 人胰岛淀粉样多肽对大鼠胰岛细胞瘤细胞自噬的影响及相关机制
- 2018年
- 目的 研究人胰岛淀粉样多肽（hIAPP）对大鼠胰岛细胞瘤细胞（INS-1细胞）自噬的影响及相关机制.方法 hIAPP孵育大鼠INS-1细胞后,采用电镜观察细胞自噬体数量的变化,噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力的变化,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯（DCFH-DA）法检测细胞活性氧族（ROS）,蛋白质印迹检测磷酸腺苷依赖的蛋白激酶（AMPK）以及自噬标志物p62及微管相关蛋白1轻链3（LC3）的变化.结果 hIAPP组INS-1细胞自噬体的数量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达明显增加（P值均＜0.05）.hIAPP组细胞ROS水平为对照组的1.76倍（P＜0.01）.抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）可抑制hIAPP所诱导的INS-1细胞ROS增加和抑制磷酸化AMPK及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达升高（P值均＜0.05）.使用AMPK抑制剂compoundC预处理INS-1细胞可抑制hIAPP和AMPK激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷（AICAR）所诱导的LC3-Ⅱ/LC3-1和磷酸化AMPK增加（P值均＜0.05）.自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）和compound C加重hIAPP所诱导的INS-1细胞死亡和ROS升高（P值均＜0.05）.AICAR可明显缓解hIAPP的细胞毒性作用（P＜0.05）.结论 AMPK通路相关自噬减轻hIAPP对INS-1细胞的毒性作用和氧化损伤.
- 夏广昊靳育静肖金凤李晓通朱铁虹
- 关键词：胰岛淀粉样多肽自噬
- 胰淀素受体在胰淀素抑制胰岛β细胞功能中的作用
- 2015年
- 目的分析胰淀素受体在胰淀素抑制胰岛β细胞功能中的作用。方法胰淀素、胰淀素受体拮抗剂AC253单独及联合短时间作用于大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞后,ELISA及RT-PCR检测葡萄糖刺激胰岛素分泌及mRNA转录情况,共聚焦显微镜下观察高糖、磺脲类药物及KCl刺激下细胞内Ca2+浓度的变化,RT-PCR检测胰淀素短时间作用对胰淀素受体成分受体活性修饰蛋白(RAMP)mRNA表达的影响。结果胰淀素短时间孵育高糖刺激下胰岛素分泌由(2.08±0.35)ng/ml降至(0.73±0.24)ng/ml(P<0.01),mRNA转录由(1.00±0.12)降至(0.39±0.09)(P<0.01),加用AC253后胰岛素分泌升至(1.41±0.32)ng/ml,mRNA转录升至(0.62±0.08),与单用胰淀素组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。AC253可缓解胰淀素对高糖刺激下Ca2+升高的抑制作用,Ca2+总体变化水平和峰值由(650.155±4.818)和(1.154±0.011)升至(769.795±4.956)和(1.589±0.013)(P均<0.01),同样AC253也可缓解胰淀素对磺脲类药物及KCl刺激下细胞内Ca2+升高的抑制作用。胰淀素短时间孵育未改变RAMP mRNA的表达。结论胰淀素受体可能参与了胰淀素抑制胰岛β细胞的胰岛素分泌、合成及对细胞内Ca2+浓度的调节。
- 李晓通朱铁虹肖金凤李常颖张婷畅继武贺秉军
- 关键词：胰淀素胰岛Β细胞胰岛素分泌
