湖南省科技厅科研项目(2010TD2027)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：曾舸高立冬刘运芝刘富强刘佳惠更多>>
- 相关机构：湖南省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：湖南省科技厅科研项目湖南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 汉坦病毒Hunan03株S基因分子特征及核蛋白结构分析被引量：2
- 2012年
- 目的测定汉坦病毒S基因编码区序列，分析和预测其编码的核蛋白结构，用于指导汉坦病毒诊断性抗原的筛选。方法对免疫荧光技术（IFA）阳性的鼠肺组织应用RT-PCR法扩增汉坦病毒S基因完整开放读码框（ORF），扩增产物克隆到pGM-T载体，转化E-coliTOPIO，通过蓝白斑试验和PCR筛选阳性克隆后进行基因序列测定；利用NCBI和Swiss—Prot／TrEMBL数据库中相关基因与蛋白结构分析软件包，如BLSAT、ProtParam、PredictProtein等对s基因的组成、结构、生物学特征及蛋白二级结构进行预测和分析。结果PCR扩增产物大小约1290bp；构建了pGM—T／S载体并测序成功；S基因序列中ORF全长1290个核苷酸残基，GC含量为44．11％，AT含量为55．89％，包含429个氨基酸（20种）；序列递交至GenBank后获得的登录号为JN712306；与原型株76．118（No．M14626）核苷酸同源性为83％，氨基酸同源性为98％，存在10个非特异性的变异位点；蛋白总平均疏水性为-0．405；二级结构中含3个跨膜区、4个非跨膜区，包含55％的螺旋结构，6．1％的折叠结构和38．9％的环结构。结论汉坦病毒S基因的测序和生物信息学的分析，揭示了核蛋白基因结构特征，为诊断性抗原的研究奠定了基础。
- 蔡亮高立冬刘运芝覃迪刘建高胡世雄刘富强湛志飞曾舸刘佳惠张红
- 关键词：汉坦病毒S基因分子特征
- 汉坦病毒M、S基因分型及种系进化分析被引量：5
- 2012年
- 目的探讨湖南省肾综合征出血热(HFRS)患者及宿主动物黑线姬鼠携带汉坦病毒的基因型别及序列特征。方法应用免疫荧光试验(IFA)对鼠肺标本进行粗筛,提取IFA阳性鼠肺组织及HFRS患者血清总RNA,设计汉坦病毒M、S基因特异性引物,应用RT-PCR技术进行扩增,回收阳性扩增产物并克隆到pMD-18T载体进行序列测定,将所测序列与国内外HTNV及SEOV病毒株序列进行核苷酸同源性分析,应用MEGA5.0.4软件构建M、S基因种系进化树。结果 IFA阳性鼠肺标本荧光显微镜下可见散在的黄绿色针尖大小样颗粒;RT-PCR法扩增汉坦病毒M、S基因,HTNV通用引物可见490bp与593bp的阳性条带;阳性产物进一步应用HTNV分型引物进行M、S基因检测,分别扩增出一约242bp与276bp大小的条带;SEO型特异性M、S基因片段内侧引物扩增反应均为阴性;编号为Hunan01、Hunan02、Hunan03的M、S基因序列与HTNV型84FLi株、SN7株的同源性最高,与SEOV型Gou3株的同源性最低;种系进化分析表明,Hunan01、Hunan02、Hu-nan03为汉坦病毒H5亚型。结论湖南省存在HTNV型感染病例与宿主动物,基因分型技术能进一步对病毒亚型进行鉴定。
- 蔡亮张红高立冬刘运芝胡世雄刘富强曾舸刘佳惠李俊华
- 关键词：肾综合征出血热汉坦病毒M基因S基因
