中国博士后科学基金(2012M521107)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 相关作者：王志伟陆玉华钱海鑫王雷范向军更多>>
- 相关机构：南通大学苏州大学中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠骨髓间充质干细胞、骨髓单核细胞和胚胎成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞的效率比较
- 2013年
- 目的比较小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、小鼠骨髓单核细胞(BM-MNCs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程为诱导性多能干细胞(iPS细胞)的效率。方法用慢病毒LV-ef1a-mOct4-IRES-EGFP、LV-ef1amSox2-IRES-EGFP、LV-ef1a-mKlf4-IRES-EGFP和LV-ef1a-mc-Myc-IRES-EGFP感染BMSCs、BMMNCs和MEFs,通过计算碱性磷酸酶染色阳性克隆数比较这3种细胞重编程为iPS细胞的效率。用胚胎干细胞表面标记检测、胚胎干细胞内源基因检测、拟胚体形成实验和畸胎瘤形成实验验证重编程获得的iPS细胞的多能性。结果起源于小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs的3种iPS细胞均能形成边缘光整的致密克隆,可表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织。但是BMSCs来源的碱性磷酸酶阳性克隆数低于BM-MNCs和MEFs来源的克隆数。结论小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs均可重编程为iPS细胞,但BMSCs重编程为iPS细胞的效率低于BM-MNCs和MEFs。
- 王尧王雷陆玉华范向军朱铭岩朱沙俊王志伟
- 关键词：诱导性多潜能干细胞骨髓间充质干细胞骨髓单核细胞小鼠胚胎成纤维细胞
- 多基因修饰小鼠诱导多潜能干细胞分化为胰岛素分泌细胞被引量：1
- 2013年
- 目的观测胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX-1)、神经分化因子1(NeuroD1)及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)对小鼠诱导多潜能干细胞(iPS细胞)分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法筛选鉴定小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程的iPS细胞。以重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合感染小鼠iPS细胞,体外培养后以RT-PCR检测胰岛B细胞功能基因表达;免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位;ELISA检测不同糖浓度(0、5、10、20、30、40mmol/L)下胰岛素的分泌量。结果起源于MEFs的iPS细胞能形成边缘光整的致密克隆,表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织,显示MEFs被成功地重编程为iPS细胞。Ad-PDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP感染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛类B细胞,RT-PCR结果显示其胰岛B细胞功能基因的表达与小鼠胰岛B细胞株MIN6相似。免疫荧光检测可见胰岛类B细胞内有胰岛素表达。ELISA检测结果显示胰岛类B细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。结论胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三者能协同作用,使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞。
- 范向军王雷陆玉华朱铭岩钱海鑫王志伟
- 关键词：胰岛素分泌细胞转录因子细胞分化
- CXCR2在胰腺导管癌组织中的表达与患者预后关系被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨CXC趋化因子受体2（CXCR2）在胰腺导管癌（PDAC）组织中的表达及其与临床病理及预后的相关性.方法 收集2006年1月至2008年1月南通大学附属医院和南京市鼓楼医院进行Whipple根治手术的PDAC病例161例标本及其相关的临床资料,将癌组织标本制成组织芯片,用鼠抗人CXCR2单克隆抗体,经免疫组织化学方法检测PDAC组织芯片中CXCR2蛋白表达情况,结合临床病理参数和随访资料进行统计学分析.结果 PDAC组织中CXCR2蛋白高表达54.04％ （87/161）,胰腺正常组织高表达率为30.77％ （24/78）,两者差异有统计学意义（x2=11.437,P=0.00l）.CXCR2在PDAC中的高表达与出现肿瘤侵犯血管（X2=6.489,P=0.011）及TNM分期晚（X2 =6.205,P =0.013）有关,差异有统计学意义.Log-rank单因素生存分析和Kaplan-Meier生存曲线确定CXCR2高表达和患者预后差异有统计学意义（P＜0.05）,生存函数Cox回归多因素生存分析显示,CXCR2高表达（HR：5.514,P=0.016）是胰腺癌患者预后差的独立危险因素.结论 PDAC肿瘤组织中CXCR2高表达提示患者预后差.
- 王庆庆郑金榆倪启超朱惠君陆玉华钱海鑫朱进
- 关键词：胰腺肿瘤免疫组化预后
- 沉默Oct4和Nanog基因抑制胰腺癌干细胞的生物学特征被引量：2
- 2013年
- 目的探讨特异短发夹RNA(shRNA)沉默胰腺癌PANC-1肿瘤干细胞(PCSCs)生物学特征的变化及其机制。方法从PANC-1细胞株中分离出CD44+CD24+上皮特异性抗原(ESA)+PCSCs,检测Oct4和Nanog蛋白表达。用慢病毒载体介导的shRNA沉默PCSCs中Oct4和Nanog表达,用荧光定量RT-PCR和Western blot检测干扰效率。通过单克隆形成实验、Transwell小室模型、细胞计数试剂盒8(CCK8)检测Oct4和Nanog对PCSCs增殖、迁移、侵袭和药物敏感性的影响。NOD/SCID小鼠致瘤实验观察Oct4和Nanog对PCSCs致瘤性的影响。结果 PANC-1细胞株中PCSCs占0.1%-0.8%,Oct4和Nanog在PCSCs中呈高表达(P<0.05);慢病毒载体介导的shRNA降低PCSCs中Oct4和Nanog的表达(P<0.05)。沉默Oct4、Nanog后,PCSCs的单克隆形成、增殖、迁移、侵袭能力下降,药物敏感性增强并诱导凋亡(P<0.05)。致瘤实验表明,沉默Oct4和Nanog后,PCSCs致瘤能力下降(P<0.05)。结论 Oct4和Nanog在PCSCs中高表达,慢病毒介导的shRNA可沉默PCSCs中Oct4、Nanog的表达。沉默PCSCs中Oct4和Nanog的表达可抑制PCSCs相关生物学特征,增强其药物敏感性并诱导细胞凋亡。
- 范向军陆玉华王雷朱铭岩钱海鑫王志伟
- 关键词：胰腺癌基因沉默
- 胰腺十二指肠同源异型盒-1、神经源性分化因子-1及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A三基因修饰小鼠诱导多潜能干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究被引量：2
- 2014年
- 目的 观察胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源异型盒-1（PDX-1）、神经源性分化因子-1（NeuroD1）及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A（MafA）对小鼠诱导多潜能干细胞（iPS）分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法 重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-绿色荧光蛋白（GFP）、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合转染小鼠iPS细胞,体外培养后逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测胰岛β细胞功能基因表达,免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测不同糖浓度下胰岛素的分泌量。将胰岛素分泌细胞移植到糖尿病小鼠肝脏,免疫组织化学检测其在体内胰岛素的表达,葡萄糖耐量试验及空腹血糖监测评估移植细胞在糖尿病小鼠体内的功能发挥。结果 三基因转染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛素分泌细胞,RT-PCR结果显示其胰岛β细胞功能基因的表达与小鼠胰岛β细胞株MIN6相似,免疫荧光检测见细胞内有胰岛素合成,ELISA检测结果显示细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。当葡萄糖浓度为30 mmol/L,胰岛素释放量最高为（0.309 3±0.017 9）ng。免疫组织化学染色显示移植细胞注射区域的肝实质内可见相对集中的棕黄色染色,表明移植细胞有胰岛素分泌。糖耐量试验及空腹血糖监测显示移植细胞能够控制糖尿病小鼠的血糖水平,在体内发挥良好的治疗作用。结论 胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三基因能使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞,在体内发挥一定的治疗作用。
- 王尧王志伟
- 关键词：胰岛素分泌细胞
