国家自然科学基金(81370111)
- 作品数：13 被引量：35H指数：4
- 相关作者：周向东李琪李敏超胥青徐建刚更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院海南医学院附属医院重庆市第三人民医院更多>>
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- 去泛素化酶对气道黏液高分泌影响的信号调控机制被引量：1
- 2015年
- 气道黏液高分泌是慢性阻塞性肺疾病的重要临床病理特征,由于黏液过度分泌加重气道狭窄,导致患者病情恶化,甚至引起死亡。高度糖基化的高相对分子质量黏蛋白5AC（MUC5AC）是气道黏液的主要成分。在MUC5AC基因中含有2个核转录因子-κB（NF-κB）结合位点,各种炎症因子能引起IκB激酶β（IKKβ）依赖的P65核转运,使NF-κB移入核内并活化,导致转录因子激活,启动子活化,
- 石萌萌周向东
- 关键词：泛素泛素化黏液信号传导
- SOCS3经JAK/STAT信号通路调控气道黏蛋白高分泌被引量：6
- 2017年
- 目的研究细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在炎症情况下经JAK/STAT通路调控气道黏液高分泌。方法培养人气道16HBE上皮细胞,设置空白对照组、白介素(IL)-6处理组、IL-6和microRNA(miR)-203处理组,Western blot法分析细胞中磷酸化JAK激酶(p-JAK1/2)、SOCS3、黏蛋白(MUC)5AC蛋白水平;Real-time法检测各组细胞中SOCS3、STAT3、MUC5AC mRNA表达量;ELISA法检测各组培养上清液中p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白含量。结果在IL-6刺激下,IL-6处理组的p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白量及SOCS3、STAT3 mRNA含量较空白对照组显著升高(P<0.05),IL-6和miR-203处理组的p-JAK1/2、MUC5AC蛋白量及STAT3 mRNA含量较IL-6处理组显著升高(P<0.05),但SOCS3 mRNA与IL-6处理组比较差异无统计学意义,SOCS3蛋白含量较IL-6处理组显著降低(P<0.05)。结论细胞在IL-6刺激后SOCS3呈现高表达,同时经JAK/STAT信号通路负反馈调控MUC5AC。
- 陈凌霞周向东
- 关键词：SOCS3JAK/STAT信号通路MUC5AC
- 热休克蛋白70在气道黏液高分泌中的作用及机制被引量：2
- 2015年
- 目的 探讨热休克蛋白70 （HSP70）在气道黏液高分泌中的作用及机制.方法 用8％香烟提取物（CSE）处理人气道A549细胞后,分别给予HSP70抗体阻断剂、c-Jun氨基末端激酶（JNK）特异性抑制剂SP600125进行干预.实验共分4组：空白对照组（无血清培养基培养）、CSE刺激组（加入8％ CSE培养24 h）、HSP70抗体组（HSP70单抗预处理30 min,再给予8％ CSE继续培养24h）、SP600125组（加入JNK特异性抑制剂SP600125 30 μmol/L预处理30 min,再给予8％ CSE继续培养24 h）.酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组中MUC5AC蛋白的相对表达量,逆转录-PCR检测MUC5AC mRNA的相对表达量,Western印迹法检测HSP70水平,Western印迹法检测JNK及激活蛋白-1（主要为c-Jun）磷酸化水平.结果 CSE刺激组细胞MUC5AC蛋白、MUC5AC mRNA、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun相对表达量（0.52±0.07、0.64±0.11、0.73±0.06、0.67±0.10、0.67±0.09）均显著高于空白对照组（0.26±0.10、0.28±0.06、0.30±0.05、0.30±0.08、0.36±0.08）、HSP70抗体组（0.30±0.12、0.29±0.09、0.34±0.06、0.47±0.19、0.39±0.13）和SP600125组（0.38±0.06、0.31±0.14、0.39±0.04、0.44±0.12、0.48±0.11）,HSP70 （0.75±0.09）也显著高于空白对照组（0.29±0.03）、HSP70抗体组（0.40±0.11）（均P＜0.05）.结论 HSP70可能通过JNK/激活蛋白-1信号通路上调气道A549细胞中MUC5AC的表达.
- 周治宇张婷周向东李琪刘春漪
- 关键词：HSP70热休克蛋白质类黏蛋白类香烟提取物激活蛋白
- 男性慢性阻塞性肺疾病炎性因子肌肉抑制素与体重指数FEV_1占预计值百分比的关系被引量：4
- 2015年
- 目的研究稳定期慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者血清中炎性因子、肌肉抑制素、第一秒用力呼气容积占预计值的百分比(FEV1%pred)、体重指数(BMI)情况及相关性。方法选择2010-2012年重庆市稳定期慢阻肺男性患者及年龄相仿的健康者,用酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、肌肉抑制素;肺功能仪器检测每位受试者的FEV1%pred;测定身高及体重,计算BMI。慢阻肺患者分别根据FEV1%pred及BMI分组,比较慢阻肺患者与健康受试者相关指标,探讨血清炎症因子、FEV1%预计值与肌肉抑制素的相关性。结果根据FEV1%pred及BMI分组(F组/T组)的慢阻肺组患者血清中TNF-α、IL-6及肌肉抑制素水平较对照组均有升高,除F1组/T1组外,差异有统计学意义(P<0.01),肺功能越差,BMI越低,TNF-α、IL-6及肌肉抑制素水平越高(P<0.05)。TNF-α、IL-6与肌肉抑制素正相关(P<0.05),FEV1%pred与肌肉抑制素负相关(P<0.05)。结论慢阻肺患者肺功能越差,BMI越低者,炎性因子及肌肉抑制素水平越高;炎性因子水平越高者,肌肉抑制素水平越高;肌肉抑制素水平越高者,反应肌肉萎缩越严重,肺功能越差,病情越重。炎性因子及肌肉抑制素可能成为慢阻肺患者潜在治疗的靶点。
- 文秀芳邬海桥陈霞陈元澜周向东
- 关键词：慢性阻塞性肺疾病体重指数白介素-6
- OGR1籍ERK信号通路参与酸性微环境致气道上皮细胞黏蛋白5AC表达被引量：1
- 2014年
- 目的探讨气道酸性微环境诱导气道上皮细胞黏蛋白5AC表达的上游信号通路调节机制。方法体外培养人气道上皮细胞(16HBE),以氯化氢创造细胞酸性环境(pH 6.4),以细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂PD88059及卵巢癌G蛋白耦联受体1(OGR1)siRNA进行干预,将细胞随机分为8组:对照组、酸刺激组、酸刺激+转染OGR1 siRNA组、pH 7.4+OGR1siRNA组、酸刺激+阴性siRNA组、pH 7.4+阴性siRNA组、酸刺激+PD98059组、pH 7.4+PD98059组。采用RT-PCR、ELISA法分别观察细胞黏蛋白(MUC)5AC转录水平及培养上清液中MUC5AC蛋白水平的改变;Western blot法检测OGR1蛋白及p-ERK蛋白的相对含量。结果酸刺激组内细胞MUC5AC转录及蛋白水平显著高于对照组(P值均<0.05),其OGR1及p-ERK蛋白含量较对照组亦明显增加,酸刺激+转染OGR1 siRNA组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平显著低于酸刺激组(P值均<0.05),其p-ERK含量亦明显降低。而pH 7.4+OGR1 siRNA组MUC5AC蛋白含量及mRNA水平较pH7.4对照组无明显差别,其p-ERK含量也变化不大。酸刺激+PD98059组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平显著低于酸刺激组(P值均<0.05),而pH 7.4+PD98059组较对照组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平无明显差异。结论 OGR1可能通过激活ERK信号通路参与气道酸性微环境所致的人气道黏膜上皮细胞MUC5AC表达。
- 周万周向东尤列.皮尔曼维克多.科罗索夫
- 关键词：黏蛋白细胞外信号调节激酶
- 蛋白酪氨酸激酶6对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响
- 2017年
- 目的:探讨蛋白酪氨酸激酶6(PTK6)对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响及相关机制。方法:体外培养人气道上皮16HBE细胞,予TNF-α刺激,分别转染PTK6 siRNA和recombined PTK6,以转染Scramble siRNA和Empty vector为对照。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞活性;跨皮细胞组抗仪检测细胞跨皮细胞阻抗(TER);辣根过氧化物酶(HRP)流量法反应细胞通透性;RT-PCR检测ZO-1、Occludin mRNA水平;Western blot检测PTK6、ZO-1、Occludin、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化c-Jun氨基端激酶1/2(p-JNK1/2)和磷酸化p38(p-p38)蛋白水平。结果:TNF-α刺激后,细胞ZO-1、Occludin转录及蛋白水平、TER值显著降低,细胞通透性增高,同时PTK6、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-p38蛋白水平显著增高(P<0.05);上调PTK6使ZO-1、Occludin转录及蛋白水平和TER值进一步降低,细胞通透性和p-JNK1/2、p-p38蛋白水平也进一步增高(P<0.05),但下调PTK6后上述指标呈相反变化(P<0.05);上调或下调PTK6对p-ERK1/2无明显影响。结论:下调PTK6可以降低JNK1/2、p38MAPK磷酸化水平,进而改善TNF-α诱导的气道上皮屏障功能减损。
- 胥青陈灵修周向东
- 细胞因子信号转导抑制因子1对脂多糖诱导的气道黏液高分泌的抑制作用及其机制被引量：4
- 2016年
- 目的探讨细胞因子信号转导抑制因子1（SOCS1）对脂多糖诱导的气道黏液高分泌的抑制作用及其机制。方法培养人支气管上皮16HBE细胞，根据脂多糖刺激时长将细胞分为0、0．5、1、6、12及24h组，确定后续实验作用时长。根据不同的转染或处理措施，将细胞分为七组，分别为未转染组、空质粒组、野生型SOCS1组、阴性siRNA组、SOCSl1小干扰RNA（SOCS1-siRNA）组、生理缓冲液组和Filgotinib组，再给予脂多糖刺激，以同体积磷酸盐缓冲液处理细胞为对照。酶联免疫吸附（ELISA）法检测以上各组细胞裂解液中黏蛋白5AC（MUC5AC）（txg）相对裂解液总蛋白（mg）的表达量。Western印迹法分别检测细胞裂解液中SOCS1、磷酸化JAK1和STAT1表达量，分别以β-肌动蛋白或总JAKI和STAT1蛋白表达量为内参。结果脂多糖可诱导MUC5AC蛋白高表达，0、0．5、16、12、24h组MUC5AC的相对表达量分别为（2．86±0．20）、（3．42±0．29）、（3．43±0．12）、（10．22±0．96）、（14．56±1．12）、（14．15±1．34）μg／mg，而SOCSl蛋白则呈反向表达；6h组MUC5AC蛋白和SOCS1蛋白均处于中间水平，故选择6h为脂多糖刺激时长。野生型SOCS1组细胞内SOCS1呈过表达状态，并且同Filgotinib组一样，JAK1和STAT1磷酸化水平均显著降低；野生型SOCS1组和Filgotinib组MUC5AC的相对表达量均显著低于未转染组[（4．04±0．65）、（7．02±0．83）比（10．37±1．00）μg／mg]（均P〈0．05）。反之，SOCS1-siRNA组细胞内SOCS1表达明显下降，JAK1和STAT1磷酸化水平增强；SOCS1-siRNA组MUC5AC的相对表达量显著高于阴性siRNA组[（13．69±1．32）比（11．01±1．41）μg／mg]（P〈0．05）。结论SOCS1可通过对JAK1／STAT1信号通路的负调节作用，抑制脂多糖诱导的MUC5AC高表达。
- 刘春漪李琪周向东
- 关键词：脂多糖类黏蛋白类细胞因子类
- miR-21靶向TLR-4/MyD88信号通路介导冷空气诱导的气道免疫失调被引量：1
- 2016年
- 目的探讨mi R-21在冷空气诱导的气道上皮免疫功能失调中的作用及其可能的潜在分子机制。方法气-液双相法培养人永生化气道上皮细胞BEAS-2B及16HBE,通过逆转录荧光定量PCR法检测不同时间梯度冷暴露的细胞中内源性mi R-21,mi R-164,mi R-155的水平改变。通过构建TLR-4 3’UTR端及其结合位点突变质粒,并与mi R-21模拟物、mi R-21抑制物以及对照共转染BEAS-2B及16HBE细胞,进行双荧光素酶标记试验证实TLR-4为mi R-21的靶蛋白。利用lipofectamine2000分别将mi R-21模拟物、mi R-21模拟对照物、mi R-21抑制物、mi R-21抑制对照物转染给BEAS-2B及16HBE细胞,并给予常温(37℃)培养或冷暴露(30℃),以Western Blot法检测各实验组TLR-4/My D88蛋白水平。结果低温诱导气道上皮细胞内mi R-21水平提高(P<0.05),而mi R-164及mi R-155无显著变化。低温提高气道上皮细胞内mi R-21水平呈时间依赖性。双荧光素酶报告实验证实,TLR-4为mi R-21的直接靶蛋白。Western Blotting法检测结果显示转染mi R-21模拟物的BEAS-2B及16HBE细胞在常温培养下TLR-4/My D88蛋白水平显著低于对照组(P<0.05),低温刺激可降低气道上皮细胞内TLR-4/My D88的蛋白水平(P<0.05);而使用mi R-21抑制物处理,可部分抑制低温诱导的TLR-4/My D88的蛋白水平下调(P<0.05)。结论低温刺激可能通过提高气道上皮细胞内mi R-21水平,降低TLR-4/My D88蛋白水平,影响气道上皮免疫功能。
- 许瑞黄华萍韩忠李敏超周向东
- 关键词：冷空气气道免疫失调
- BRAP对LPS诱导的人气道上皮细胞系黏液高分泌的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨蛙皮素受体激活蛋白(BRAP)对脂多糖(LPS)诱导的气道黏液高分泌的影响及相关作用机制。方法体外培养人气道上皮HBE16细胞,转染已构建好的p EGFP-N1-BRAP,以空质粒载体作为对照,给予LPS刺激,同时分别以ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125、P38抑制剂SB203580干预。观察细胞内活性氧(ROS)含量、黏蛋白(MUC)5AC表达和核因子-κB(NF-κB)活性以及细胞活力的变化。结果转染p EGFP-N1-BRAP后ROS明显减少(P<0.01);同单纯LPS刺激相比,MUC5AC蛋白含量和mRNA水平在转染p EGFP-N1-BRAP后明显降低(P<0.01),NF-κB活性亦呈相同趋势(P<0.05);在U0126组,MUC5AC的表达较转染重组质粒组显著降低(P<0.01),NF-κB活性也显著下调(P<0.05)。结论 BRAP可以通过ROS/ERK/MAPK信号通路阻止胞质内NF-κB的活化,从而下调MUC5AC的生成。
- 胥青周向东
- 关键词：黏蛋白5AC细胞外信号调节蛋白激酶核转录因子-ΚB
- Sec3对中性粒细胞弹性蛋白酶诱导的气道上皮细胞黏蛋白分泌的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨栓链因子复合物亚基Sec3对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导的气道上皮细胞黏蛋白(MUC)分泌的影响。方法体外培养人气道上皮细胞16HBE,随机分为8组:空白对照组、表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化抑制剂AG1487组、Sec3siRNA组、阴性siRNA对照组、NE组、NE+AG1478、NE+Sec3siRNA组、NE+阴性siRNA组。采用Western blot法检测Sec3蛋白及pEGFR的相对含量;ELISA、RT-PCR法分析细胞培养上清液中MUC5AC的相对含量及细胞中MUC5AC mRNA水平。结果 Sec3siRNA转染显著降低Sec3蛋白表达,提示转染成功,且加入NE对转染效果无干扰。单纯NE刺激组上清液中MUC5AC含量,细胞中MUC5AC mRNA、pEGFR水平显著高于空白对照组(P<0.01),AG1487可明显抑制上述刺激作用;转染Sec3siRNA可阻断MUC5AC分泌(P<0.01),但并不影响其转录水平表达(P>0.05)。结论在NE诱导的人气道上皮黏液高分泌过程中,栓链因子复合物亚基Sec3对黏蛋白出胞有重要的介导作用。
- 何芳周向东
- 关键词：黏蛋白中性粒细胞弹性蛋白酶表皮生长因子受体
