国家自然科学基金(30872452)
- 作品数：9 被引量：15H指数：3
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- 大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及认知功能的研究被引量：4
- 2010年
- 目的探讨大鼠脑缺血再灌注海马神经元凋亡及认知功能变化。方法雄性SD大鼠60只,随机分成假手术组(SH组)、模型组(IR组)。模型组采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,不同时间点进行水迷宫测试。TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞。结果尼氏染色显示,与假手术组间比较,缺血组海马CA1区神经元数量显著下降(P<0.01);TUNEL法检测显示:与假手术组相比,凋亡指数显著增加(P<0.01)。Morris水迷宫检测,与假手术组相比,模型组大鼠学习阶段寻台时间明显延长,而其记忆测试潜伏期也明显长于假手术组。结论大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡显著增加,认知功能明显下降。
- 陈志则钱巍祁月红张雪张传汉
- 关键词：脑缺血再灌注损伤凋亡
- 氧糖剥夺对体外培养大鼠星形胶质细胞内Cdh1蛋白表达的影响及机制被引量：3
- 2012年
- 目的探讨氧糖剥夺对星形胶质细胞内Cdh1蛋白表达的影响及其机制。方法①体外纯化培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,随机分为对照组、氧糖剥夺1h复氧组、氧糖剥夺6h复氧组,Western blot检测Cdh1及Skp2蛋白的表达变化;②将体外纯化培养的星形胶质细胞随机分为对照组、氧糖剥夺6h组、单纯缺氧6h组,Western blot检测Cdh1蛋白的表达变化,血糖仪检测培养液中葡萄糖含量的变化。结果①与对照组相比,氧糖剥夺1h复氧组、氧糖剥夺6h复氧组Cdh1蛋白表达均下降,Skp2蛋白表达均增加(P<0.05),氧糖剥夺1h复氧组与氧糖剥夺6h复氧组组间Cdh1、Skp2蛋白表达差异无统计学意义;②与对照组相比,氧糖剥夺6h组Cdh1蛋白表达明显下降,单纯缺氧6h组没有明显变化,氧糖剥夺6h组与单纯缺氧6h组组间差异有统计学意义(P<0.05);③单纯缺氧6h组细胞外液葡萄糖摄取率低于对照组(即常氧组)[(21.43±6.74)%vs.(26.98±9.21)%,P<0.05]。结论氧糖剥夺后星形胶质细胞内Cdh1蛋白表达减少,其变化与细胞外液中缺少葡萄糖有关。
- 邱瑾姚文龙张玥邹姮婧燕琳张传汉
- 关键词：氧糖剥夺星形胶质细胞
- 细胞周期末期促进复合物及其调节亚基Cdh1在缺血性脑损伤中的作用被引量：1
- 2009年
- 研究认为泛素-蛋白酶体系统与细胞周期成分在脑缺血后神经元凋亡及胶质细胞增殖活化中起着重要作用。细胞周期末期促进复合物（anaphase promoting complex，APc）及其调节亚基Cdh1是联系细胞内泛素．蛋白酶体系统与细胞周期成分的中间枢纽，是细胞周期进程调控的关键蛋白。现就APC-Cdh1在缺血性脑损伤中的作用作一综述。
- 邱瑾钱巍张传汉
- 关键词：脑缺血胶质细胞细胞周期蛋白
- 慢病毒过表达Cdh1蛋白对星形胶质细胞反应性增殖作用的初步研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨慢病毒过表达Cdh1蛋白对星形胶质细胞反应性增殖的影响。方法体外纯化培养大鼠星形胶质细胞:(1)随机分为Cdh1慢病毒组及空病毒组,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测Cdh1及Skp2蛋白表达的变化;(2)随机分为单纯氧糖剥夺/复氧组、Cdh1慢病毒干预组、空病毒干预组,氧糖剥夺1h复氧48h后,CCK-8法检测细胞增殖的变化。结果与空病毒组相比,Cdh1慢病毒组Cdh1蛋白表达总量增加,Skp2蛋白表达下降(P<0.05);与单纯氧糖剥夺/复氧组相比,Cdh1慢病毒干预组细胞反应性增殖受到抑制(P<0.05),空病毒组没有变化(P>0.05)。结论慢病毒过表达Cdh1蛋白对氧糖剥夺再复氧后星形胶质细胞的反应性增殖有一定的抑制作用。
- 邱瑾姚文龙张玥邹姮婧石小云李大佳张传汉
- 关键词：增殖氧糖剥夺慢病毒
- 大鼠全脑缺血再灌注损伤后APC-Cdh1mRNA的表达变化
- 2010年
- 目的研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后APC-Cdh1的表达变化。方法雄性SD大鼠60只,体重280～350g,随机分成假手术组(SH组)、模型组(IR组)。采用改良4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,在损伤后不同时间点,免疫组化染色检测Cdh1的表达部位并且采用实时荧光定量PCR检测大鼠海马组织APC-Cdh1的表达。结果与对照组相比,术后1dCdh1mRNA表达减少,术后3d显著升高,术后7d又降低。免疫组化检测显示APC-Cdh1在海马区及皮质区中均有大量表达。结论 APC-Cdh1可能与中枢神经系统的发育及损伤有着密切的关系。
- 陈志则万里张传汉祁月红张雪姚文龙邱谨
- 关键词：脑缺血再灌注损伤海马
- 慢病毒介导的Cdh1-siRNA在大鼠全脑缺血再灌注损伤后的表达及功能
- 2013年
- 目的:探讨慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对全脑缺血再灌注损伤的影响。方法:将150只雄性SD大鼠随机分成生理盐水组(A组)、空慢病毒组(B组)和重组慢病毒组(C组)各50只。分别给予3组大鼠注射生理盐水、空慢病毒和重组慢病毒,注射3d后采用改良4-VO法建立SD大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,采用荧光定量PCR检测大鼠海马组织Cdh1mRNA表达,Western blot检测Cyclin B的变化,TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞指数(AI)。于全脑缺血再灌注术后第7天行Morris水迷宫测试认知功能的变化。结果:C组Cdh1mRNA表达明显低于A、B组(P<0.05);AI值及Cyclin B表达均明显高于A、B组(P<0.05);水迷宫测试结果显示,术后第9～11天各时间点C组的寻台潜伏期明显长于A、B组(P<0.05)。结论:细胞周期末期分裂促进复合物及其调节亚基Cdh1可能通过Cyclin B堆积介导缺血性神经元的凋亡。
- 陈志则祁月红张雪姚文龙张传汉
- 关键词：脑缺血慢病毒RNA干扰
- 表达大鼠Cdh1基因的重组慢病毒载体的构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建表达大鼠Cdh1基因的重组慢病毒载体。方法根据大鼠Cdh1基因的核苷酸序列，合成目的基因片段并亚克隆到慢病毒表达载体pGC-FU的AgeI酶切位点间，命名为pGC-FU-Cdh1。对pGC-FU-Cdh1进行PCR扩增及测序鉴定。将293T细胞按完全随机法分为实验组（每组3只）及对照组（每组3只），分别将pGC-FU-Cdh1及空质粒pGC-FU以脂质体法转染至293T细胞，倒置荧光显微镜观察后，Western blot法检测Cdh1-GFP的表达情况，慢病毒载体LV-Cdh1的包装浓缩及滴度测定。结果重组慢病毒表达载体pGC-FU-Cdh1经PCR扩增鉴定及测序鉴定均显示有特异性基因片断，证明大鼠Cdh1基因正向插入慢病毒表达载体pGC-FU中；转染293T细胞后，Westernblot法检测到实验组有外源性融合蛋白Cdh1-GFP的表达（每组3只），对照组无Cdh1-GFP的表达（n=0）（P=0．014）；慢病毒载体LV-Cdh1包装浓缩后，Reahime PCR法测定滴度为2E＋8TU／ml。结论成功构建表达大鼠Cdh1基因的重组质粒pGC-FU-Cdh1，并包装为慢病毒，为进一步研究Cdh1功能及基因治疗奠定了基础。
- 邱瑾姚文龙钱巍张传汉
- 关键词：细胞周期蛋白慢病毒转基因技术
- 全脑缺血再灌注损伤大鼠海马区Skp2的表达变化被引量：4
- 2011年
- 目的观察大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马区S期激酶相关蛋白2(S phase kinase-associated protein 2,Skp2)及其下游底物p27的表达变化。方法雄性Wistar大鼠60只随机分为2组:对照组(n=20),全脑缺血再灌注组(n=40)。采用Pulsinelli四血管结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,全脑缺血30min后进行再灌注;对照组为假手术组,只分离血管。分别于大鼠全脑缺血再灌注4、7d用免疫组织化学法检测海马区星形胶质细胞和神经元变化;Western blot方法检测海马区Skp2及p27蛋白表达变化。结果与对照组相比,大鼠全脑缺血再灌注4、7d后,星形胶质细胞明显活化、增殖;海马CA1区神经元在再灌注7d时明显减少。Western blot检测结果显示,与对照组相比,在全脑缺血再灌注4d和7d海马区Skp2表达逐渐增高,而p27蛋白的表达逐渐降低(均P<0.05)。结论全脑缺血再灌注损伤大鼠海马区Skp2的表达升高,可能与缺血后神经元凋亡及胶质细胞活化有关。
- 张雪姚文龙邱瑾钱巍张传汉
- 关键词：S期激酶相关蛋白脑缺血缺血再灌注损伤神经胶质细胞
- 大鼠全脑缺血-再灌注损伤后APC-Cdh1蛋白的表达被引量：1
- 2010年
- 目的探讨大鼠全脑缺血-再灌注损伤后APC-Cdh1蛋白的表达变化。方法雄性SD大鼠60只,体重280～350g,随机分成假手术组和缺血-再灌注组。采用改良Pulsinelli4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,在损伤后不同时间点,免疫组化染色检测Cdh1的表达部位并且采用Western blotting检测大鼠海马组织APC-Cdh1蛋白的表达。结果免疫组化检测显示APC-Cdh1在海马区及皮层区中均有大量表达。与假手术组相比,缺血-再灌注组术后第1天APC-Cdh1蛋白表达减少,术后第3天升高(P<0.05),术后第7天又降低。结论APC-Cdh1可能与中枢神经系统损伤有着密切的关系。
- 陈志则万里祁月红姚文龙邱瑾张传汉
- 关键词：脑缺血海马
