国家自然科学基金(30600331)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 一种快捷可靠评价链霉菌噬菌体准ФC31整合酶功能的双荧光报告系统(英文)
- 2009年
- 在NIH3T3细胞中构建了一种链霉菌噬菌体准ФC31整合酶报告系统.该报告载体同时编码红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白,与编码准ФC31整合酶的载体共转染可以反映准ФC31整合酶的活性.细胞中从红色荧光到绿色荧光的变化和百分比的变化可经流式细胞仪检出.随着转染中准ФC31整合酶表达载体的比例升高,表达绿色荧光的细胞比例上升.准ФC31整合酶表达载体和报告系统载体比例在10∶1时,可达最高约90%的红绿荧光转变率.这表明该准ФC31整合酶报告系统提供了一种在细胞中快捷可靠的评价准ФC31整合酶功能的方法.
- 徐焕宇马晴雯任兆瑞巩芷娟黄淑帧曾凡一曾溢滔
- 关键词：位点特异性重组
- φC31整合酶与生物医学被引量：2
- 2007年
- 来源于链霉菌噬菌体фC31的整合酶可通过介导链霉菌attB序列与多种生物内源性特异性序列产生重组反应,将外源基因定点整合到生物基因组中。在基因治疗研究中应用φC31整合酶,可使外源基因长期高水平表达,从而达到较好的治疗效果;且由于外源基因定点整合,故安全隐患较小。此外,фC31整合酶还可以用来生产外源基因定点整合的转基因动物,在基础研究和应用研究领域都有很高的潜在应用价值。
- 徐焕宇马晴雯
- 关键词：ΦC31整合酶基因治疗转基因动物
- φC31整合酶与转基因动物研制被引量：1
- 2009年
- 链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点性特异重组酶。它以单向整合方式进行重组,无须其他辅助因子,且整合效率高、表达稳定,所以近年来越来越多地被用来介导外源基因与宿主基因组的特异性整合,并被应用于哺乳动物的转基因整合技术中,它为攻克转基因动物研制过程中的随机整合、整合效率低、表达水平不高等技术瓶颈提供了新思路。对链霉菌噬菌体φC31整合酶的作用机制和特点优势作了简要的阐述,并对其广阔的应用前景作一展望。
- 曲立娟黄英
- 关键词：ΦC31整合酶转基因动物
- 牛基因组中有利于ΦC31整合酶介导的外源基因高效表达位点的研究
- 来源于链霉菌(Streptomyces)噬菌体的ΦC31整合酶能介导携带 attB 序列的重组载体在人、鼠等动物基因组中实现高效定点整合,染色体上的整合位点称为假 attP 位点。假 attP 位点广泛存在于多种物种的动...
- 欧海龙曲立娟许淼蔡勤巩芷娟黄英曾溢滔
- 关键词：ΦC31整合酶
- 文献传递
- 卵母细胞特异表达φC31整合酶载体pZP3-INT的构建及其在小鼠卵母细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site-specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)间的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法采集生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3(ZP3)启动子驱动的φC31整合酶表达载体pZP3-INT和检测φC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB+,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中。培养48h后,RT-PCR检测φC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB+载体发生重组的情况。结果表明:载体pZP3-INT在卵母细胞中表达φC31整合酶mRNA;并且pBCPB+载体发生了位点特异性重组,提示φC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应。
- 徐焕宇龚秀丽郭歆冰马睛雯曾溢滔
- 关键词：卵母细胞基因操作位点特异性重组
- 构建评价fC31整合酶功能的双荧光报告系统
- fC31整合酶是一种位点特异的重组酶,属于丝氨酸重组酶家族,它可催化噬菌体基因组中 attP 位点(phage attachment site)与链霉菌基因组中 att3位点(bacterial attachment s...
- 徐焕宇马晴雯黄淑帧曾凡一
- 文献传递
