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植物内生菌及其活性代谢产物被引量：48: 2004年; 植物内生菌是一种新的微生物资源,具有潜在的应用价值。近年来,从植物内生菌中寻找新的生物活性物质的研究方兴未艾。对近年来从植物内生菌中发现的抗肿瘤、抗菌、抗病毒、杀虫、免疫抑制、抗氧化、降糖等活性化合物及其相应的产生菌的研究作一简要综述。; 王永中肖亚中; 关键词：植物内生菌生物活性物质

一株新的木素过氧化物酶产生菌的分离和鉴定被引量：2: 2007年; 目的:木素过氧化物酶在工业和环保方面具有潜在应用价值。从腐木上分离得到一株新的木素过氧化物酶合成菌,该菌株具有香栓菌(Trametes suaveolens)的形态特征,需要对其进一步确认。方法:用rDNA ITS序列的分子分类方法对该菌株进行鉴定。结果:PCR得到的ITS片段长621 bp,其序列与一株香栓菌具有最高的相似性(97.6%),并明显不与栓菌其他种聚类。结论:该分离种为一株新的香栓菌,命名为T.suaveolens 1523。; 袁璟洪宇植张小青肖亚中; 关键词：ITS序列木素过氧化物酶

白腐真菌漆酶的固定化及其应用研究被引量：27: 2004年; 以尼龙网为载体 ,戊二醛为交联剂 ,进行固定化真菌漆酶的条件优化和性质研究 ,优化条件为 :尼龙网在 5 %的戊二醛溶液中交联 6h后 ,加入 30U漆酶溶液固定 8h ,酶活回收率为 5 0 3%。与游离酶相比 ,固定化漆酶的热稳定性明显提高 ,最适pH值略有下降。用该固定化漆酶处理低浓度造纸废水 ,经过 8批次连续试验 ,酶活保留 5 2 %。; 张书祥肖亚中王怡平张敏; 关键词：尼龙网固定化真菌漆酶

Trametessp.AH28-2漆酶A的诱导合成及其基因5′-端调控区的克隆与分析被引量：9: 2005年; Trametessp.AH28_2漆酶同工酶的合成需要铜离子的存在,较高浓度的Cu2+有利于漆酶合成。在以葡萄糖为碳源补加0·5mmol/LCu2+的培养基中生长时,发酵液漆酶活性为44·3u/L,同时补加4·0mmol/L邻甲苯胺时,漆酶酶活提高到71·0u/L;而在补加Cu2+和邻甲苯胺的纤维二糖培养基中,酶活上升至2584u/L,为葡萄糖培养基的36·4倍。邻甲苯胺和铜离子诱导产生的漆酶同工酶组分,均为漆酶A(LacA)。竞争性RT_PCR分析表明,漆酶A基因(lacA)转录本的累积伴随有发酵液漆酶活性的增加,邻甲苯胺对lacA的调控发生在转录水平。lacA结构基因长2110bp,含有10个内含子;lacA的cDNA序列为1560bp,编码520aa的漆酶蛋白,其氨基酸序列与其它真菌漆酶具有较高的相似性。采用改进的反向PCR技术,扩增得到的lacA5′_端调控区长1881bp,分析表明,该区域上分布有1个TATA框、7个CAAT框和多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括5个MRE元件、9个CreA结合位点、4个XRE元件、2个STRE元件和7个氮因子调控位点等。这些序列位点的存在部分地对应了菌株摇瓶发酵条件下lacA的表达规律。; 洪宇植肖亚中房伟房伟查向东张书祥周宏敏; 关键词：真菌漆酶定量RT-PCR 顺式作用元件

长距离反向PCR技术高效扩增已知DNA片断的侧翼序列被引量：15: 2006年; 为解决传统反向PCR技术扩增片段短、假阳性多的不足,建立了长距离反向PCR(LD I-PCR)扩增技术:0.5μg DNA/mL的反应体系使DNA酶解片段充分自身环化连接,其产物用25 nt^30 nt的序列特异引物进行长距离PCR。结果表明该方法能特异地扩增出长达16 kb的序列,在已知DNA片段的侧翼序列克隆方面具有高效、简便、特异的优点。; 洪宇植肖亚中房伟童品贵袁璟孙芹英; 关键词：侧翼序列漆酶基因

栓菌420漆酶同工酶B基因克隆及异源表达被引量：3: 2007年; 根据铜结合区的保守氨基酸序列设计简并引物,扩增栓菌420(Trametessp.420)基因组,结合长距离反向PCR(LD-IPCR)技术,克隆得到新型漆酶同工酶B基因(lacB),包括结构基因(2255bp)及5′-和3′-非编码序列。lacB含12个内含子,其cDNA序列长1560bp,编码495aa成熟多肽和24aa信号肽。lacB与其它不同来源的真菌漆酶基因具有较高的同源性,而与植物、细菌、昆虫的漆酶基因同源性低于25%。将不含信号序列的lacBcDNA通过质粒pPIC9克隆到表达载体pPIC9K上,电击转化毕赤酵母GS115细胞,经BMM-ABTS平板筛选得到漆酶分泌阳性转化子。; 李剑凤洪宇植肖亚中; 关键词：毕赤酵母漆酶基因克隆异源表达

野生革耳菌漆酶cDNA在巴斯德毕赤酵母中的表达被引量：9: 2004年; 将分离到的野生革耳菌(Panusrudis)漆酶的cDNA序列克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建成受强启动子AOX1控制的重组表达载体.重组质粒DNA经BglII线性化后,电击转化毕赤酵母GS115细胞,通过G418筛选和PCR鉴定的重组酵母在甲醇诱导后能分泌表达活性漆酶.低温培养是该漆酶基因活性表达的必要条件.培养基中添加400μmol/L的CuSO4最有利于漆酶的活性表达.; 张敏张敏肖亚中余聪; 关键词：漆酶 CDNA序列毕赤酵母

栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质被引量：10: 2007年; 栓菌420（Trametes sp．420）漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）进行异源表达，产生两种重组漆酶：rLacDx（具有天然N-末端）和rLacDe（N-末端带有8个额外的氨基酸残基）。摇瓶发酵18d，rLacDx和rLacDe的产量分别为1．21×10^5u／L、7、38×10^4u／L[以2，2＇-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸（ABTS）为底物]。在高密度发酵条件下，rLacDx的产量增加到2．39×10^5u／L，同时其生产周期降至7．5d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似，且在50℃和pH3～10的范围内均稳定。然而，rLacDx对底物ABTS的比活力（1761u／mg）高于rLacDe（1122u／mg），其表观Km值（427μmol／L）低于rLacDe（604μmol／L）。; 周宏敏洪宇植肖亚中CUI Teng-JiaoWANG Xiao-Tang蒲春蕾; 关键词：异源表达高密度发酵漆酶毕赤酵母

包埋法固定化真菌漆酶及其应用研究被引量：10: 2005年; 采用海藻酸钠包埋法固定真菌漆酶,海藻酸钠和CaCl2的最佳浓度分别为3%和4%,最佳给酶量为30U,最大回收率为48.0%。与游离漆酶相比,固定化漆酶的热稳定性有明显改善,最适反应pH向酸性方向漂移0.5,最适反应温度提高了5℃。使用固定化酶处理低浓度造纸废水,运行8批次后残留酶活为64%。; 张书祥房伟; 关键词：真菌漆酶固定化海藻酸钠

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安徽省优秀青年科技基金(04043048)