上海市科学技术发展基金(064119648)
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- 丁硫氨酸硫酸亚胺早期处理抑制单核细胞向树突状细胞的分化
- 2007年
- 目的研究细胞氧化-还原态对树突状细胞(DC)分化和功能的影响。方法细胞氧化-还原态的调控应用特异性谷胱甘肽(GSH)合成抑制剂丁硫氨酸硫酸亚胺(BSO)。自健康人外周血单个核细胞(PBMC)分离单核细胞,在含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和IL-4的RPMI 1640培养液中诱导分化DC。将单核细胞分为BSO早期(培养第1天)用药组、BSO晚期(培养第5天)用药组和不予BSO处理的对照组。BSO用药剂量为终浓度1mmol/L,换液时补加相应剂量的BSO。培养第5天,分别给予加入脂多糖(LPS)100ng/ml(LPS刺激组)或重组人干扰素γ(rhIFN-γ)20 U/ml(IFN-γ刺激组)或不予刺激(无刺激组)的处理;培养第7天收集各组悬浮细胞进行表型分析和功能检测,并在倒置显微镜下观察BSO早期用药组和对照组贴壁细胞。表型分析采用特异性荧光标记单抗及流式细胞仪。功能检测采用混合淋巴细胞反应试验,将经丝裂霉素C处理的DC(刺激细胞)与异基因非贴壁PBMC(反应细胞)混合(刺激细胞:反应细胞分别为1:25、1:50、1:100)培养5d后,用3H-胸腺嘧啶核苷法检测淋巴细胞增殖情况。结果培养第7天,镜下观察显示BSO早期用药组贴壁细胞明显多于对照组;流式细胞仪检测显示BSO早期用药组CD86和CD1a表达明显低于对照组,CD86平均荧光强度(MFI)分别为311.3±97.3、552.0±97.9(P=0.01),CD1a分别为52.2±22.2、121.2±4.2(P=0.03);BSO早期用药组及对照组3H-胸腺嘧啶核苷掺入量(cpm)在刺激细胞:反应细胞=1:25时分别为1587±1458和9336±1333(P=0.015);加入rhIFN-γ20U/ml刺激后二组CD86MFI分别为495.9±143.9和800.4±27.7(P=0.06),而加入LPS100ng/ml刺激后二组CD86MFI分别为1736.7±375.7和1960.8±494.5(P>0.05)。表明单核细胞分化早期加入BSO对DC的分化和功能有抑制作用,并对IFN-γ诱导DC成熟有抑制作用。BSO晚期用药组DC抗原提呈功能分子的表达及与对照组比较均无明显差异,对LPS或rhIFN-γ刺激的
- 冯永红李莲
- 关键词：单核细胞
