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鼠疫菌抗原CTL表位预测方法的建立: 2008年; 目的建立鼠疫菌抗原CTL表位的预测方法，为鼠疫菌表位组学研究提供行之有效的研究平台。方法采用nHLAPred、BIMAS和SYFPEITHI网络预测法对LcrV抗原的CTL表位进行预测。结果预测得到了LcrV的特异性CTL优势表位：V8～16NPQHFIEDL、V311～319KYDSVMQRL和V258～264SYNKDNNEL。结论结合不同预测方法进行T细胞表位的预测，可得到鼠疫菌LcrV抗原的CTL表位，具有较高的准确率，可为表位图谱的绘制提供参考依据。; 王文敬张艳玲李明; 关键词：CTL表位

布氏菌外膜蛋白bp26的表达和鉴定被引量：1: 2007年; [目的]研究布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因的克隆、表达与测序,并对其进行初步的血清学鉴定。[方法]从布鲁氏菌基因组中获得bp26基因连接入PMD18-T克隆质粒并测序,目的基因与融合表达载体PGEX-4T-1连接,构建重组质粒PGEX-4T-1/bp26,在大肠杆菌中表达该蛋白。用western-blot鉴定重组表达的GST-bp26蛋白。[结果]成功构建了PGEX-4T-1/bp26原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了bp26基因,布鲁氏菌免疫动物血清能特异性识别所表达的蛋白。[结论]布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因的成功表达,它可以与布鲁氏菌免疫血清产生特异性结合反应,为之后的抗原性以及免疫原性研究打下良好的物质基础。; 陈瑶李明; 关键词：布鲁氏菌免疫

布鲁氏菌猪种标准株外膜蛋白OMP25的原核表达被引量：4: 2006年; 目的克隆布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因并构建基因的原核表达系统。方法用聚合酶链反应技术扩增得到布鲁氏菌基因组,得Omp25基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列,将目的基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,经双酶切和DNA测序测定,将构建的重组质粒转化大肠杆菌(E.coliHB101,TOP10),经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白rOmp25表达情况。结果经DNA测序显示Omp25DNA序列和插入位点正确,成功构建了重组质粒pGEX-4T-1-Omp25,经IPTG诱导,特异性表达出以包涵体形式存在48kDa的Omp25融合蛋白。结论制备、克隆了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因片段,并在大肠杆菌中表达出Omp25融合蛋白。; 江洁华骆利敏李明芮勇宇廖伟娇徐军; 关键词：布鲁氏菌免疫

中国布鲁氏菌16s-23s rRNA间隔区多态性研究被引量：4: 2005年; 目的利用16 s-23 s rRNA间隔区(ITS)的多态性,对中国布鲁氏菌种间或种内生物型进行鉴别,评价ITS作为基因标识物的意义,寻找适合布鲁氏菌分型研究的基因标识物。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术,对中国120株布鲁氏菌的ITS进行分析和筛选,测序结果与Genbank中的布鲁氏菌ITS序列进行比较分析。结果对16 s-23 s rRNA间隔区的SSCP结果分析,得到4种不同的带型(ⅠI、I、Ⅲ、Ⅳ),测序序列有3个位点的差异,达到99.87%的一致性。结论中国布鲁氏菌的ITS序列高度保守,具有一定探讨其作为布鲁氏菌属种内分型的基因标识的价值。; 王文敬芮勇宇陈瑶骆利敏李明; 关键词：布鲁氏菌 16S-23S 多态性 PCR-SSCP 测序

一种新型疫苗递送系统——GEM微球: 2009年; 目的介绍一种新型疫苗递送系统"GEM微球",可用于制备诱发机体同时产生局部黏膜免疫和系统免疫的多价疫苗。方法利用乳酸菌制备GEM微球,获得融合了蛋白锚定结构(PA)的抗原或多肽等免疫原,二者结合后直接运载至黏膜作用于靶点,进而发挥诱导机体免疫应答的疫苗作用。结果与PA融合表达的蛋白,可高载量与革兰氏阳性菌递送系统"GEM微球"结合,制备多价疫苗。结论本文提供的构建"GEM微球疫苗"的相关实验技术,即GEM新型的疫苗递送系统,可为对迄今无安全有效疫苗的布鲁氏菌病的免疫防护和治疗提供有价值的依据。; 王文敬张艳玲李明; 关键词：黏膜免疫

布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因的克隆、表达和免疫学特性的初步研究被引量：3: 2006年; 目的研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP31的克隆、测序和表达,并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁氏菌基因组中获得OMP31基因连接入PMD-18T克隆质粒并测序,克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,构建重组质粒PGEX-4T-1/OMP31,在大肠杆菌中将该蛋白表达。用Western-blot分析重组表达的GST-OMP31的免疫学特性。结果成功构建了PGEX-4T-1/OMP31原核表达载体并在大肠杆菌中表达了OMP31基因,布鲁氏菌免疫动物血清能特异性识别所表达的蛋白。结论成功表达了布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因,它可以与布鲁氏菌免疫血清产生特异性结合反应,为之后的抗原性以及免疫原性研究打下良好的基础。; 陈瑶骆利敏李明; 关键词：布鲁氏菌免疫

中国布鲁杆菌OMP28基因PCR-SSCP多态性分析被引量：10: 2006年; 目的对布鲁杆菌OMP28基因进行多态性分析,评价其作为基因标识的价值。方法根据聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术原理,对中国120株布鲁杆菌的OMP28基因进行PCR扩增、酶切、电泳分析和筛选,取不同带型菌株的目的基因进行测序,将结果与Genbank中的布鲁杆菌OMP28序列进行比较。结果 120株布鲁杆菌呈现4种不同图谱(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ),仅有3个碱基变异,即Ⅳ型与其他3个型第 304碱基A-G,Ⅱ型与另外3个型第405碱基C-T,Ⅰ与其他3个型第498碱基C-T变异,而且均未改变氨基酸序列。结论布鲁杆菌OMP28基因高度保守,具稳定的抗原特征。; 王文敬王萍芮勇宇李明; 关键词：布鲁杆菌基因

中国98株布鲁杆菌OMP25基因高度保守被引量：2: 2008年; 目的分析布鲁杆菌毒力相关基因OMP25（编码外膜蛋白OMP25）在中国布鲁杆菌中的多态性分布，为研究致病机制，预防和控制大规模暴发布鲁菌病的流行病学研究提供理论基础。方法利用聚合酶链反应单链构象多态（single-strand conformation polymorphism，PCR-SSCP）方法检测116株布鲁杆菌（18株标准菌株和中国98株野生菌株）OMP25基因，取不同带型菌株的OMP25基因进行测序。结果116株布鲁杆菌呈现8种不同图谱（1～8型），其中2型和7型是个别中国野生株所特有。8种带型仅有10个不同碱基在对应类型中发生变异，对编码蛋白氨基酸的改变不多。中国98株布鲁杆菌的OMP25基因高度保守，具有比较稳定的抗原特征。结论高度保守性有助于布鲁杆菌的流行病学检测，为研制更安全有效的疫苗提供了理论依据。; 王文敬李明芮勇宇; 关键词：细菌外膜蛋白质类单核苷酸聚合酶链反应多态现象单链构象

布鲁氏菌bp26和OMP10基因的原核表达和鉴定被引量：9: 2006年; 目的研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP10和bp26基因的表达、克隆与测序,并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁氏菌基因组中获得OMP10和bp26基因连接入PMD18-T克隆质粒并测序,克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,构建重组质粒PGEX-4T-1/OMP10和PGEX-4T-1/bp26,在大肠杆菌中将该蛋白表达。用western-blot分析重组表达的GST-OMP10和GST-bp26的免疫学特性。结果成功构建了PGEX-4T-1/OMP10和PGEX-4T-1/bp26原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了OMP10和bp26基因,布鲁氏菌免疫动物血清能特异性识别所表达的蛋白。结论布鲁氏菌外膜蛋白OMP10和bp26基因的成功表达,它可以与布鲁氏菌免疫血清产生特异性结合反应,为之后的抗原性以及免疫原性研究打下良好的物质基础。; 陈瑶李明; 关键词：布鲁氏菌免疫

布鲁杆菌外膜蛋白OMP31和bp26基因的克隆、表达及鉴定被引量：1: 2006年; 目的克隆并测序中国布鲁杆菌外膜蛋白基因OMP31和bp26,重组表达OMP31和bp26蛋白, 并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁杆菌基因组中获得OMP31和bp26基因,连接入PMD18-T克隆质粒并测序。测序后分别克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,在大肠埃希菌中表达融合蛋白。用Western-blot技术分析重组表达的GST-OMP31和GST-bp26的免疫学特性。结果 OMP31和bp26基因的测序结果与 GeneBank中已报道的布鲁杆菌株完全一致,并在大肠埃希菌中成功表达了GST-OMP31和GST-bp26融合蛋白。布鲁杆菌免疫兔血清能特异性识别所表达的蛋白而不与载体蛋白发生反应。结论成功表达了布鲁杆菌外膜蛋白OMP31和bp26,它可以被布鲁杆菌免疫血清特异性识别,表现出良好的抗原性,为之后的实验室诊断和亚单位疫苗的研究打下良好的物质基础。; 陈瑶李明; 关键词：细菌外膜蛋白质类免疫活性

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国家重点基础研究发展计划(2002CB513201)

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