云南省自然科学基金(2009ZC151M)
- 作品数：5 被引量：31H指数：2
- 相关作者：何洁潘兴华庞荣清赵晶张永云更多>>
- 相关机构：成都军区昆明总医院云南农业大学中山大学附属第一医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种从骨髓中分离胚胎样干细胞的技术方法
- 2012年
- 目的建立从成体骨髓中分离胚胎样干细胞的技术方法。方法采用密度梯度离心法从成体骨髓中分离单个核细胞,运用胚胎干细胞扩增用的无血清knockout-DMEM培养基在明胶包被过的培养瓶中扩增培养,光学显微镜下观察细胞形态特征,分别采用免疫荧光染色和RT-PCR方法鉴定多潜能干细胞标志的表达。结果采用无血清培养基在明胶包被过的培养瓶中培养的方法,可从成体骨髓中分离到贴壁生长的细胞,这些细胞与传统方法分离到的间充质干细胞相比体积更小、形态纤细均一,传代后均匀分布生长,不易老化,而且这些细胞弱表达多潜能抗原标志Oct-4、Nanog-3和Sox-2。结论采用扩增胚胎干细胞的技术方法可以从成体骨髓中分离到表达部分多潜能干细胞标志的胚胎样干细胞。
- 张永云庞荣清何洁赵晶瞿良王桂华潘兴华张成
- 关键词：多潜能干细胞骨髓
- 人骨髓胚胎样干细胞向多核肌纤维诱导分化的研究被引量：2
- 2012年
- 目的:比较骨髓来源的胚胎样干细胞(ELSCs)与间充质干细胞(MSCs)的体外成肌分化能力。方法:采用胚胎干细胞扩增用的无血清Knockout-DMEM培养基在明胶包被过的培养瓶中培养人骨髓单个核细胞以分离ELSCs,传统方法从相同骨髓中分离MSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态特征,采用免疫荧光染色鉴定多潜能抗原标志的表达。成肌分化液分别培养ELSCs和MSCs,采用免疫染色法检测肌纤维特异性抗原标志肌球蛋白重链(MHC)、成肌素(myogenin)和MyoD蛋白的表达,RT-PCR检测MHC、myogenin和MyoD mRNA的表达,计算MHC阳性肌纤维的比例以比较ELSCs与MSCs的体外成肌分化能力。结果:无血清培养基可从骨髓中分离到弱表达多潜能抗原标志Oct-4、Nanog-3和Sox-2的ELSCs,体积较小,形态纤细均一,在形态方面不同于相同骨髓来源的MSCs,后者不表达多潜能抗原标志。在成肌分化液中培养,ELSCs和MSCs均可被诱导为在蛋白和mRNA水平表达MHC和myogenin的多核肌纤维,但诱导培养10 d时,ELSCs的MHC蛋白阳性肌纤维的比例为(25.7±4.1)%,MSCs为(15.8±7.6)%,ELSCs的成肌分化能力明显高于MSCs(P<0.05)。结论:骨髓ELSCs能被诱导为多核肌纤维,并具有比来自相同骨髓的MSCs更强的成肌分化能力,ELSCs是肌病治疗更理想的种子细胞。
- 庞荣清张永云阮光萍朱向情何洁赵晶王利民潘兴华张成
- 关键词：骨髓成肌分化肌纤维
- 异体骨髓间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮的护理被引量：3
- 2012年
- 系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种比较常见的系统性自身免疫性疾病，其典型病变特征包括多种自身抗体阳性以及皮肤、关节、肾脏等全身多个器官或系统受到损害。SLE发病多见于年轻妇女，病程长且反复发作。现有的糖皮质激素治疗虽然疗效尚可，但是不良反应大且需长期甚至终身用药，患者心理压力很大。因此，研究不良反应小且疗效确切的SLE治疗方法是医学界面对的一个重要挑战。从2010年初开始，我科对5名病情反复发作的SLE患者实施异体问充质干细胞移植术，效果良好，现将护理体会介绍如下。
- 赵晶何洁潘兴华余月明曹礼应王晓华蔡学敏梁虹庞荣清
- 关键词：骨髓间充质干细胞异体移植系统性红斑狼疮护理
- 骨髓胚胎样干细胞的形态结构特征观察被引量：1
- 2012年
- 目的观察胚胎样干细胞(ELSCs)的形态结构特征。方法分别采用无血清培养基在明胶包被过的培养瓶和传统方法在未包被的培养瓶中分离骨髓胚胎样干细胞和间充质干细胞(MSCs),以MSCs为对照,在光学显微镜下观察ELSCs的细胞形态,在透射电镜下观察ELSCs的超微结构,并采用染色体技术分析传代细胞的核型。结果与MSCs相比,ELSCs体积更小、形态纤细均一,传代后细胞贴壁快,在细胞培养瓶中均匀分布生长,不易老化。第四代ELSCs的绝大多数细胞膜显示显著的花多样伪足,细胞浆中有丰富的粗面内质网。而部分MSCs的细胞膜光滑,部分MSCs膜表面有微绒毛,多数细胞胞浆内有空泡和丰富的粗面内质网而且明显扩张形成内质网池,内含中等电子密度的分泌物。第十代ELSCs和MSCs都有正常的核型。结论 ELSCs具有比MSCs更不成熟的细胞形态结构特征,传代10代后细胞仍然是安全的。
- 庞荣清张永云邓永丽马丽花何洁赵晶潘兴华张成
- 关键词：多潜能干细胞骨髓超微结构细胞形态
- 一种简单的人脐带间充质干细胞分离培养方法被引量：26
- 2011年
- 目的建立一种简单的人脐带间充质干细胞分离培养方法。方法取新鲜脐带,剪成5cm长的小段,直接剪碎为糊状,加入含10﹪胎牛血清的DMEM/F12在培养瓶中培养,光学显微镜下观察细胞的生长特征,运用流式细胞仪检测分析细胞的抗原标志表达,并检测其体外多向分化潜能。结果运用不剥离血管组织、不用酶消化的组织贴块培养法可以从新鲜脐带中分离到贴壁生长的成纤维细胞样细胞,这些细胞表达CD29、CD44、CD90和CD105,并可在体外诱导分化为脂肪、骨和软骨细胞。结论运用不剥离血管组织、不用酶消化的组织贴块培养法可以从人脐带中分离到间充质干细胞,其生物学特性与骨髓间充质干细胞相似。
- 庞荣清何洁李福兵赵晶阮光萍王桂华瞿良李黎蔡学敏潘兴华
- 关键词：脐带间充质干细胞
