福建省自然科学基金(C0710018)
- 作品数：3 被引量：25H指数：1
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- 神经生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞在糖尿病大鼠膀胱中的生长及表达被引量：1
- 2011年
- 目的将转入神经生长因子（NGF）的大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）移植于糖尿病大鼠膀胱平滑肌组织内，观察MSC在膀胱组织内的存活和NGF基因的表达情况。方法糖尿病组（30只）大鼠按链脲佐菌素（STZ）60mg／kg行单次腹腔注射，对照组（15只）腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液。实验分组：对照组（正常大鼠膀胱）、发病组（糖尿病大鼠膀胱）、治疗组（糖尿病大鼠膀胱内移植转染NGF基因的MSC）。溴苷法示踪NGF基因修饰的MSC在大鼠膀胱内的存活情况；RT—PCR、ELISA法检测NGF基因在糖尿病大鼠膀胱内的表达情况。结果单次腹腔注射STZ造模成功，8周后血糖仍处高位。NGF基因修饰的大鼠MSC移植入糖尿病大鼠膀胱内4周仍存活。ELISA检测结果显示对照组、发病组、治疗组大鼠膀胱NGF蛋白含量分别为（114±3）、（70±2）、（110±2）pg／ml，RT—PCR检测mRNA表达量分别为0．183±0．004、0．032±0．139、0．130±0．165。发病组与对照组相比NGF表达下降（P〈0．05），治疗组与发病组相比NGF表达上升（P〈0．05）。结论转入NGF基因的大鼠MSC能在糖尿病大鼠膀胱中存活并稳定表达。
- 黄世勇朱绍兴苏一鸣蔡鹏朱德胜方荣金
- 关键词：神经生长因子间质干细胞骨髓糖尿病
- 全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞及其诱导分化被引量：24
- 2009年
- 背景:骨髓中的间充质干细胞含量极少,每1×104～1×105个单核细胞中约有1个骨髓间充质干细胞,需要在体外分离、纯化、扩增后才能满足体内移植要求。目的:观察体外分离培养的骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-12在福建医科大学附属协和医院泌尿外科研究室完成。材料:清洁级雄性近交系SD大鼠30只,由上海斯莱克实验动物有限公司提供。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,待细胞融合至80%～90%胰蛋白酶消化传代。取传至第3代细胞,分别向成骨、成脂方向诱导分化。主要观察指标:倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测其表面标记,茜素红染色检测其成骨能力,油红O染色检测其成脂能力。结果:原代及传代的骨髓间充质干细胞均呈长梭形成纤维细胞样,连续传代10代以上,细胞始终保持旺盛的生长及扩增能力。第3代骨髓间充质干细胞CD90,CD44,CD106均呈阳性表达,而CD34,CD45,CD11b呈阴性。成骨诱导21d后,可见大量橘红色矿化结节形成。成脂诱导2周后,可见细胞的胞浆内出现大量红染脂滴。结论:全骨髓贴壁培养法可大量分离纯化、扩增骨髓间充质干细胞,所获细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能。
- 蔡鹏朱绍兴苏一鸣黄世勇
- 关键词：间充质干细胞骨髓生物学特性分化
- 人神经生长因子β亚基慢病毒载体的构建
- 2011年
- 背景:糖尿病神经源性膀胱的发病与神经生长因子缺乏有关,β亚基是构成神经生长因子(NGF)3种亚基中惟一具有生物活性的亚基,慢病毒载体是基因治疗的理想载体。目的:构建过表达人神经生长因子β亚基(β-NGF)基因的慢病毒载体。方法:通过目的基因的获得,载体质粒双酶切,载体质粒与目的基因的连接将人β-NGF基因克隆到慢病毒载体质粒pGC-FU中,构建重组慢病毒载体质粒pGC-FU-β-NGF。观察人β-NGF基因的克隆情况,并进行重组慢病毒载体质粒pGC-FU-β-NGF的PCR鉴定和测序。结果与结论:构建的重组慢病毒载体质粒pGC-FU-β-NGF进行PCR实际获得的产物与预计PCR产物大小一致,即初步判断为构建成功的重组质粒。所获得的β-NGF基因经测序后与GenBank报道序列完全一致。说明pGC-FU-β-NGF中携带有正确的β-NGF基因。结果证实,实验成功构建了携带人β-NGF基因的重组慢病毒载体质粒。
- 苏一鸣朱绍兴蔡鹏
- 关键词：神经生长因子慢病毒载体克隆基因治疗
