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一种基于人miR-30结构高效干扰LMP1基因表达的慢病毒载体的构建: 2014年; 目的:构建慢病毒载体并利用miRNA原理进行LMP1病毒癌基因干扰的可行性及有效性研究。方法:基于人miR-30a结构,利用靶点分析软件设计4个LMP1的候选干扰靶点,报告基因EGFP与miRLMP1靶点形成共顺反子表达,靶点载体质粒与LMP1高表达质粒用脂质体共转染工具细胞293FT,用Western blot方法筛选最有效的干扰靶点并用三质粒系统在293FT细胞中包装慢病毒,进行滴度鉴定。结果:在293FT工具细胞中成功筛选到一个高效干扰LMP1基因的靶点序列,在Western blot水平的蛋白干扰率高达95%;在20ml培养上清中可获得具有活性慢病毒颗粒7.2×108个,经纯化浓缩获得重组慢病毒颗粒,滴度高达6×109TU/ml,经流式细胞仪检测在80MOI时其感染EBV阳性的鼻咽癌细胞株C666-1的感染率高达80%以上。结论:基于人miR-30a结构的miR-LMP1能高效干扰LMP1基因的蛋白表达,利用慢病毒载体来建立稳定基因干扰肿瘤细胞株可能是一个良好的方法。; 黄必军杨长福朱颖慧周玲朱秀云黄铁军; 关键词：EB LMP1 RNA 慢病毒载体

EBV-LMP1促进鼻咽癌细胞系CNE2对顺铂的抗性: 2012年; 目的:EB病毒与鼻咽癌的发生有密切的关系,而其编码的潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)被证实具有转化致瘤的作用。本实验的目的是观察LMP1是否使细胞产生对顺铂的抗性,并探索其中的发生机制。方法:用脂质体转染带有LMP1的质粒进入CNE2细胞,G418筛选构成稳定株,qRT-PCR和western检测其LMP1的表达情况。MTT和Annexin V/PI双染实验检测细胞对顺铂的敏感性。结果:CNE2/LMP1细胞能够稳定表达LMP1。LMP1能够促进细胞抵抗顺铂的生长抑制作用和抗顺铂诱导的凋亡。结论:EB病毒潜伏膜蛋白LMP1增强细胞对顺铂的抗性。; 杨广达杨红杰黄必军; 关键词：EB病毒 LMP1 顺铂

鼻咽癌C666-1细胞中EBV miRNA的表达情况及其功能研究被引量：4: 2012年; 目的观察鼻咽癌C666-1细胞中EB病毒(EBV)所编码的44个miRNA的表达情况(即BART、BHRT家族的表达情况)及BART-15对EBV的即刻早期基因(BZLF-1)表达的影响。方法培养C666-1细胞,取对数生长期的细胞,提取RNA,采用polyA加尾PCR法对EBV miRNA进行扩增,观察BHRF和BART家族的表达情况。将BART-15抑制剂转染C666-1细胞,转染成功后,用real-time PCR法检测BZLF-1的表达。结果在EBV编码的44个miRNA中,BHRF家族的表达普遍低于BART家族。BART-15抑制剂转染C666-1细胞后,转染率为77.0%,BART-15的表达降低了87%。抑制C666-1细胞中BART-15的表达后,BZLF-1的表达增高了2.54倍。结论鼻咽癌C666-1细胞中EBV的miRNA表达谱存在家族性差异,其中的BART-15可能直接或间接作用于EBV的BZLF-1,影响EBV的感染状态。; 杨红杰杨广达黄必军; 关键词：鼻咽癌 EB病毒微小RNA

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广东省科技计划工业攻关项目(2009A030331005)