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酪氨酸蛋白激酶抑制剂Tyrphostin AG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用(英文)被引量：2: 2002年; 目的　为了观察TyrphostinAG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机理。方法　利用基因工程克隆 ,表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 32 P]ATP或 [γ 32 P]GTP的 [32 P]放射活度来检测。结果　重组人CK2是一种Ca2 +、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG114对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 2 0 .8μmol·L- 1,抑制强度介于已知CK2抑制剂 5 ,6 二氯 1 β 呋喃糖苯并咪唑 (DRB)和N (2 氨乙基 ) 5 氯萘 1 硫胺 (A3)之间。AG114对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP呈混合竞争性抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论　AG114不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂。; 刘新光梁念慈; 关键词：酪氨酸蛋白激酶抑制剂 TYRPHOSTIN

Tyrphostin AG213对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制动力学被引量：3: 2002年; 利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组人CK2全酶 .以重组人CK2全酶为分子靶点 ,研究tyrphostinAG2 13对该全酶的直接作用及其抑制动力学 .通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]GTP的 [3 2 P]放射活度 ,检测CK2活性 .结果表明 :重组人CK2是一种Ca2 + 、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致 .AG2 13对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 1 1μmol L ,抑制作用远大于已知CK2的抑制剂 5 ,6 二氯 1 β 呋喃糖苯并咪唑 (DRB)和N (2 氨乙基 ) 5 氯萘 1 硫胺 (A3) .AG2 13对重组人CK2全酶的动力学研究表明 :它与GTP呈现非竞争竞争性混合型抑制作用 ,抑制常数Ki 和Ki′值分别为 0 6 μmol L与 1 4 μmol L ;与酪蛋白呈非竞争性抑制作用 ,Ki 值为 0 9μmol L .结果说明 ,tyrphostinAG2 13不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂 .重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点 .; 刘新光梁念慈马涧泉; 关键词：蛋白激酶CK2 全酶抑制动力学重组蛋白

人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定被引量：25: 2004年; 通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符的重组质粒 (命名为pTCKA′) .将其转化BL2 1(DE3)菌 ,IPTG诱导后未见高效特异表达 .然后将人CK2α′cDNA亚克隆至GST融合蛋白表达载体 ,经同样转化和诱导步骤后可见一蛋白特异高效表达 .Western印迹结果证明 :该蛋白能与兔抗人CK2α′3 3 3 3 50 肽段抗血清发生特异性免疫反应 .采用GSH Sepharose 4B柱纯化 ,凝血酶酶切 ,最后从 4g细菌获 4 4mg纯化重组蛋白 .通过性质鉴定和酶动力学分析证明 :克隆、表达和纯化的重组蛋白是有生物学活性的人CK2α′亚基 .; 陈小文刘新光梁景耀梁念慈; 关键词：大肠杆菌克隆纯化重组蛋白

人蛋白激酶CK2α′亚基cDNA的克隆与测序: 2002年; 目的　构建人蛋白激酶CK 2α′亚基cDNA重组表达质粒 ,研究CK 2的结构与功能。方法　采用RT -PCR、定向克隆和DNA测序等一系列分子生物学技术进行本实验。结果　从人白血病细胞 (HL 60 )中获得了人CK 2α′亚基cDNA ,使用NdeⅠ /HindⅢ双酶切PCR产物和表达载体 pT 7-7进行定向克隆 ,限制性酶切鉴定证明重组获得成功。 4个阳性克隆DNA测序结果显示有 1个含有正确插入的人CK 2α′cDNA ,命名为 pTCKA′ ;其余 3个克隆均存在碱基突变。结论　成功克隆到人CK 2α′亚基cDNA的重组表达质粒。; 刘新光陈小文梁念慈; 关键词：CDNA 克隆测序

三种Tyrphostin对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响被引量：1: 2001年; 目的 :观察三种 Tyrphostins AG110 9、AG5 5 5和 AG1394对重组人蛋白激酶 CK2全酶的直接作用。方法 :利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶 CK2α和β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组 CK2全酶 ,在不同条件下测定 CK2的活性。 CK2活性通过测定转移到 CK2底物上的 [γ-3 2 P] ATP或 [γ-3 2 P] GTP的 [3 2 P]放射活度来检测。结果 :重组人 CK2是一种 Ca2 +、c AMP和 c GMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然 CK2的性质一致。 AG110 9对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用 ,IC50 为 9.7μmol/L ,抑制作用稍大于已知 CK2抑制剂 DRB和 A3。 AG5 5 5对重组人 CK2全酶具有一定的抑制作用 ,而 AG1394则对人 CK2全酶基本无影响。 AG110 9对重组人 CK2的动力学研究表明 :它与 GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论 :AG110 9不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶 CK2的抑制剂。重组人蛋白激酶 CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的 CK2抑制剂的分子靶点。; 刘新光梁念慈; 关键词：蛋白激酶CK2 重组蛋白 TYRPHOSTIN 酶动力学

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博士科研启动基金(9907)