山东省自然科学基金(ZR2010HQ037)
- 作品数：11 被引量：43H指数：4
- 相关作者：王晓莉陈玉玺牟青杰赵岩松范蒙蒙更多>>
- 相关机构：潍坊医学院天津市眼科医院潍坊市第二人民医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省教育厅科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 低氧预适应对缺血再灌注损伤大鼠视网膜促红细胞生成素及活性Caspase-3蛋白表达的影响被引量：12
- 2013年
- 目的观察低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)后视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)蛋白及活性Caspase-3蛋白表达的动态变化,探讨HPC预防RIRI的机制,为RIRI的防治提供有效的治疗方案。方法取健康Sprague Dawley成年大鼠随机分为正常对照组(CON组),RIRI组与HPC+缺血再灌注损伤组(HPC组,HPC后采用高眼压法制成RIRI模型),每组根据RIRI时间分为6h、12h、24h及72h4个亚组。采用免疫组织化学法动态观察HPC对RIRI大鼠视网膜细胞EPO蛋白、活性Caspase-3蛋白表达的影响。结果 CON组大鼠视网膜仅见极少量的EPO+细胞;RIRI后6h,HPC组EPO+细胞数开始增加;RIRI后12h,HPC组EPO+细胞数(171±21)mm-2进一步增加,显著高于RIRI组[(149±20)mm-2,P<0.05];RIRI后24h,HPC组EPO+细胞数(287±24)mm-2达较高水平并显著高于RIRI组[(238±22)mm-2,P<0.01];RIRI后72h,HPC组EPO+细胞数开始下降,但仍显著高于RIRI组(P<0.05)。RIRI后6h,RIRI组活性Caspase-3+细胞数(60±5)mm-2开始增加,显著多于HPC组[(53±5)mm-2,P<0.05];RIRI后12h,RIRI组与HPC组活性Caspase-3+细胞数进一步增加,HPC组活性Caspase-3+细胞显著少于RIRI组(P<0.01);RIRI后24h,RIRI组与HPC组活性Caspase-3+细胞数达较高水平,HPC组活性Caspase-3+细胞数(578±26)mm-2显著少于RIRI组[(624±25)mm-2,P<0.01];RIRI后72h,HPC组与RIRI组活性Caspase-3+细胞数均开始下降,HPC组Caspase-3+细胞数仍少于RIRI组(P<0.05)。结论 HPC可促进RIRI大鼠视网膜细胞EPO蛋白的表达,减轻活性Caspase-3蛋白的表达,从而减轻细胞凋亡,具有神经保护作用。
- 赵岩松赵堪兴王晓莉牟青杰王丽毕学辉
- 关键词：视网膜缺血再灌注损伤低氧预适应促红细胞生成素
- 脐血单个核细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠促红细胞生成素蛋白及少突胶质祖细胞的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨脐血单个核细胞(UCBMC)移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑促红细胞生成素(EPO)蛋白及少突胶质祖细胞的影响。方法 7日龄健康Sprague-Dawley新生大鼠40只随机分为正常对照组、HI组、UCBMC对照组和HI+UCBMC组,每组10只。采用经典Rice法制成HIBD模型,造模24 h后,正常对照组和HI组经侧脑室注入2μL PBS,UCBMC对照组和HI+UCBMC组经侧脑室注入3×106UCBMC。移植后7d,采用EPO/DAPI与NG2/DAPI免疫荧光双标法观察损伤侧室管膜下区(SVZ)EPO蛋白及少突胶质祖细胞的变化,并进行相关性分析。结果移植后7 d,HI+UCBMC组NG2+DAPI+及EPO+DAPI+细胞数均显著高于UCBMC对照组(均P<0.05)、HI组及正常对照组(均P<0.01),UCBMC对照组NG2+DAPI+及EPO+DAPI+细胞数均显著高于正常对照组和HI组(均P<0.01),正常对照组NG2+DAPI+细胞数显著高于HI组(P<0.01)。HI+UCBMC组NG2+DAPI+细胞数与EPO+DAPI+细胞数呈正相关(r=0.898)及直线回归(β=1.4604,P<0.01)。结论 UCBMC可促进HIBD新生大鼠少突胶质祖细胞的表达,其机制与EPO蛋白的表达增加相关,从而修复脑白质损伤。
- 季加芬张金萍王晓莉牟青杰范蒙蒙陈玉玺
- 关键词：脐血单个核细胞缺氧缺血性脑损伤促红细胞生成素新生大鼠
- 脐血单个核细胞对脑白质损伤低龄大鼠少突胶质细胞及髓鞘碱性蛋白的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨脐血单个核细胞(umbilical cord blood monocytes,UCBMC)移植对低龄大鼠脑白质损伤(white matter damage,WMD)中少突胶质细胞及髓鞘碱性蛋白表达的影响。方法将3日龄健康Sprague-Dawley新生大鼠80只随机分为正常对照(control,CON)组、WMD组、WMD+UCBMC组与UCBMC对照组。通过单侧缺血联合缺氧的方法制成WMD模型(每个时间点每组各5只),造模24h后,CON组和WMD组经侧脑室注入2μL PBS,UCBMC对照组和WMD+UCBMC组经侧脑室注入3×106 UCBMC。移植后24h、3d、7d和14d,采用2',3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶(CNPase)/活性半胖氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase-3)及髓鞘碱性蛋白(MBP)/4'6-二脒基-2苯基吲哚(4'6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)免疫荧光双标观察UCBMC移植对纹状体处少突胶质细胞及MBP的变化,并行机制的探讨。结果移植后24h、3d和7d,WMD组CNPase+Cleaved Caspase-3+细胞数均高于CON组、WMD+UCBMC组与UCBMC对照组(均P<0.01),且在24h开始增加,3d达高峰,7d有所下降;WMD+UCBMC组CNPase+Cleaved Caspase-3+细胞数显著少于WMD组(P<0.01)。移植14d后,WMD组MBP+DAPI+细胞数显著少于CON组及UCBMC对照组(P<0.01);WMD+UCBMC组MBP+DAPI+细胞数显著高于WMD组,仍少于CON组(P<0.01)。结论 UCBMC侧脑室移植可减少脑白质损伤低龄大鼠的少突胶质细胞的凋亡,减少髓鞘的脱失,从而修复损伤的脑白质。
- 王芳王晓莉范蒙蒙刘培莉刘长云赵岩松
- 关键词：脐血单个核细胞脑白质髓鞘碱性蛋白少突胶质细胞
- 脐血单个核细胞移植对HIBD大鼠脑白质损伤的影响被引量：2
- 2011年
- 目的 探讨脐血单个核细胞（ UCBMC）侧脑室移植对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑白质损伤的影响.方法 7日龄Sprague-Dawley新生大鼠,随机分为正常对照组、HIBD组、移植组与磷酸盐缓冲液（PBS）组.采用Rice法制成HIBD模型.体外分离人UCBMC.HIBD后24 h,侧脑室移植UCBMC.移植后14d,28d,采用髓鞘碱性蛋白（MBP）免疫组织化学法比较各组纹状体与胼胝体MBP吸光度的变化.结果 移植后14d,HIBD组MBP吸光度显著低于对照组（P＜0.01）,移植组与HIBD组MBP吸光度差别不显著（P＞0.05）；移植后28d,移植组胼胝体、纹状体MBP吸光度显著高于HIBD组与PBS组（P＜0.01）,但仍少于正常对照组（P＜0.05）,HIBD组与PBS组MBP吸光度差别不显著（P＞0.05）.结论 HIBD后24h,UCBMC侧脑室移植可促进HIBD新生大鼠胼胝体、纹状体MBP表达增加,从而减轻HIBD新生大鼠脑白质损伤.
- 郭媛媛窦泉玲陈玉玺董鹏王晓莉孙业全龙金凤
- 关键词：脐血单个核细胞脑白质新生大鼠
- RNA干扰沉默AKT基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡影响研究被引量：6
- 2013年
- 目的:通过小分子干扰RNA(siRNA)技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中PI3K/AKT信号通路关键基因蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)基因的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,随机分为对照组、空白载体组和siRNA干扰组,siRNA干扰组通过脂质体介导AKT siRNA转染SKOV3细胞。荧光定量PCR法检测AKT在干扰前后AKT mRNA的表达,免疫荧光细胞化学法检测PI3K、AKT与PCNA蛋白在各组中的表达,MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞仪AnnexinⅤ/PI法检测细胞凋亡率的变化。结果:siRNA干扰组AKT mRNA的表达量为(0.325±0.04)明显抑制,并显著低于对照组,q=58.96,P<0.001;免疫荧光细胞化学结果示,siRNA干扰组的AKT、PCNA蛋白的荧光强度较对照组与空白载体组明显降低,而PI3K蛋白在3组间差异无统计学意义,P=0.637;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI法检测结果示,siRNA干扰组细胞凋亡率高达(79.52±2.31)%,较对照组(27.35±2.01)%与空白载体组(28.64±1.96)%明显升高,约是空白载体组(q=60.880,P<0.001)与对照组(q=58.553,P<0.001)的3倍,差异有统计学意义。结论:AKT siRNA可干扰AKT基因的表达,抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,有望成为治疗卵巢癌的新方法。
- 胡明英王晓莉毕学辉刘晓文
- 关键词：小分子干扰RNA蛋白激酶B
- 体外靶向PI3K基因RNA干扰对卵巢癌SKOV3细胞Akt表达的影响
- 2013年
- 目的采用RNA干扰技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中PI3K/Akt信号转导通路中关键基因PI3Kp110α,观察其对PI3K/Akt信号通路下游信号蛋白Akt的影响,以期为卵巢癌的基因治疗提供可靠的理论依据。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,脂质体介导靶向P13Kp110α基因的小干扰RNA(siRNA)转染卵巢癌SKOV3细胞,采用荧光定量PCR法检测干扰后PI3K、Akt mRNA的表达,免疫荧光双标法观察RNA干扰48 h后对PI3K、Akt蛋白的影响。结果 Real-time PCR结果示RNA干扰组PI3K、Akt mRNA相对含量显著低于空白载体组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),而空白载体组与对照组表达差异无统计学意义(P>0.05);免疫荧光细胞化学结果示RNA干扰组的PI3K、Akt蛋白阳性率较对照组与空白载体组明显减少,而对照组与空白载体组比较无明显差异。结论 siRNA可沉默卵巢癌SKOV3细胞P13Kp110α基因的表达,同时减轻PI3K蛋白及下游信号蛋白Akt的表达,以PI3Kp110α为靶点的RNA干扰技术可望成为卵巢癌基因治疗的新策略。
- 毕学辉胡明英王晓莉梁玉林陈玉玺
- 关键词：RNA干扰PI3KAKT
- 不同浓度的氯化钴对PC12分化细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 目的观察不同浓度的氧化钴(CoCl_2)对肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)分化细胞增殖与凋亡的影响,探讨合理的体外化学模拟缺氧模式。方法应用不同浓度CoCl_2作用于PC12分化细胞不同时间,建立化学性缺氧诱导细胞凋亡的实验模型;将PC12细胞分为空白对照组、不同浓度不同时间的CoCl_2处理组;应用细胞计数、MTT、Hoechst33342/PI双染色法检测不同浓度CoCl_2对PC12分化细胞的增殖与凋亡的影响。结果①CoCl_2(≤200μmol/L)在6h内使PC12细胞存活率轻度增加,12h后开始出现细胞存活率降低,并呈现比较明显的剂量和时间依赖关系;CoCl2(≥300μmol/L)诱导PC12分化细胞6h即开始出现存活率降低(P<0.01);②150μmol/L CoCl_2诱导PC12分化细胞24h后细胞数量明显减少(P<0.01);③通过荧光显微镜可见150μmol/L CoCl_2诱导PC12分化细胞24h内受损细胞多为早期凋亡,48h后开始出现晚期凋亡和坏死细胞增多。结论 CoCl_2对PC12分化细胞增殖与凋亡的影响呈时间和浓度依赖性,进行化学模拟缺氧要考虑CoCl_2的作用浓度和作用时间。
- 范蒙蒙王晓莉李强王芳刘长云杨培培
- 关键词：氯化钴细胞凋亡
- 骨髓间充质干细胞对脑缺血大鼠神经干细胞分化的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对局灶性脑缺血大鼠内源性神经干细胞(NSCs)分化的影响,为BMSCs移植治疗局灶性脑缺血性疾病提供科学的理论依据。方法采用完全随机法将40只Sprague-Dawley大鼠分为正常对照(CON)组、大脑中动脉阻塞模型(MCAO)组、BMSCs移植组与磷酸盐缓冲液(PBS)组。贴壁法体外培养大鼠BMSCs,采用线栓法制成大鼠局灶性脑缺血模型,造模后24h侧脑室移植BMSCs,腹腔注射5-bromo-2-deoxyuridine(BrdU)标记增殖细胞。移植后28d,采用BrdU/3-tubulin与BrdU/GFAP免疫荧光双标法检测BMSCs移植对内源性NSCs分化的影响,并采用尼氏染色法观察各组大鼠损伤侧脑组织神经元的变化。结果移植后28d,MCAO组可见少量BrdU^+β-tubulin^+细胞,显著少于CON组(P<0.01),PBS组与MCAO组BrdU^+β-tubulin^+细胞差异无显著性(P>0.05),BMSCs移植组可见大量BrdU^+β-tubulin^+细胞,显著高于MCAO组(P<0.01)与PBS组(P<0.01);MCAO组可见大量BrdU^+GFAP^+细胞,显著高于CON组(P<0.01),PBS组与MCAO组BrdU^+β-tubulin^+细胞差异无显著性(P>0.05),BMSCs移植组可见少量BrdU^+GFAP^+细胞,显著低于MCAO组(P<0.01)与PBS组(P<0.01)。MCAO组大鼠损伤侧大脑皮层神经元细胞数明显少于CON组(P<0.01),PBS组与MCAO组差别不显著(P>0.05);BMSCs移植组大鼠大脑皮层神经元细胞数显著多于MCAO组,差异具有统计学意义(P<0,01)。结论 BMSCs可促进局灶性脑缺血大鼠内源性NSCs分化成为成熟的神经元与星形胶质细胞,修复脑损伤。
- 张睿馨陈玉玺王晓莉李卫萍杨艳
- 关键词：骨髓间充质干细胞脑缺血神经干细胞分化
- 骨髓间充质干细胞移植对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质神经元核抗原和神经元素1表达的影响
- 2014年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cell,BMSC）移植对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质神经元核抗原（neuronal nuclei,NeuN）和神经元素l（neurogeninl，Ngnl）的影响。方法64只健康雄性成年Sprague—Dawley大鼠随机分为正常对照（normal,N）±磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）组、大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）±PBS组、正常对照＋BMSC组和MCAO＋BMSC组，每组16只。线栓法制作大鼠MCAO模型。体外培养BMSC，在模型制作后24h进行脑内移植。采用MRI活体检测脑梗死体积，NeuN／DAPI和Ngn1／DAPI免疫荧光双标法以及蛋白印迹法检测缺血周围脑组织NeuN和Ngnl表达。结果移植后14d，MCAO组大鼠T1和T2加权成像均可见大脑皮质和纹状体存在异常信号区，MCAO＋BMSC组脑梗死体积显著性小于MCAO＋PBS组（32．5％±4．2％对47．9％±7．9％；P〈0．001）。免疫荧光双标染色显示，MCAO±PBS组NeuN^＋／DAPI^＋[（976．2±87．5）个／mm^2对（1908．3±127．8）个／mm^2；P〈0．01]和Ngn1^＋／DAPI^＋[（251．6±23．1）个／mm^2对（285．1±25．2）个／mm^3；P〈0．01]细胞数量均显著性少于N±PBS组，但MCAO±BMSC组NeuN’／DAPI^＋[（1439．9±101．7）个／mm^2；P〈0．01]和Ngn1^＋／DAPI^＋[（356．3±35．6）个／mm^2；P〈0．01]显著性多于MCAO±PBS组。蛋白质印迹分析显示，MCAO±PBS组NeuN（0．69±0．06对0．91±0．09；P〈0．01）和Ngn1（0．53±0．05对0．62±0．07；P〈0．01）蛋白表达水平显著性低于N＋PBS组，但MCAO±BMSC组NeuN（0．82±0．07；P〈0．01）和Ngn1（0．77±0．09；P〈0．01）蛋白表达水平显著性高于MCAO＋PBS组。结论BMSC移植可促进NeuN和Ngnl表达，减轻MCAO脑损伤。
- 牟青杰赵岩松王晓莉蔡立珍王芳
- 关键词：脑缺血骨髓间充质干细胞
- 骨髓间充质干细胞移植对视网膜病变新生大鼠视网膜细胞凋亡的影响被引量：7
- 2012年
- 目的探讨早产儿视网膜病变(ROP)大鼠玻璃体内注射骨髓间充质干细胞(BMSCs)对视网膜细胞凋亡及视网膜中神经营养素-3(NT-3)、睫状神经营养因子(CNTF)表达的影响。方法 40只7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为正常对照组、ROP模型组、骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植组与磷酸缓冲液组(PBS组),每组10只。采用高氧法制成ROP模型,持续高氧5 d后分别给予BMSCs移植组与PBS组玻璃体内注射BMSCs和PBS。移植7 d后,采用TUNEL/DAPI、NT-3/DAPI、CNTF/DAPI免疫荧光双标法观察BMSCs移植对视网膜细胞凋亡及NT-3、CNTF表达的影响。结果移植7 d后,正常对照组视网膜几乎未见TUNEL+DAPI+细胞,BMSCs移植组视网膜可见少量TUNEL+DAPI+细胞,显著低于ROP模型组与PBS组(P<0.01),而ROP模型组与PBS组差异无统计学意义(P>0.05);正常对照组视网膜可见极少量的NT-3+DAPI+与CNTF+DAPI+细胞,ROP模型组与PBS组大鼠视网膜可见少量NT-3+DAPI+与CNTF+DAPI+细胞,较正常对照组增多,但差异无统计学意义(P>0.05);BMSCs移植组大鼠视网膜NT-3+DAPI+与CNTF+DAPI+细胞数均显著多于ROP模型组与PBS组(P<0.01),而ROP模型组与PBS组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BMSCs移植可减轻ROP大鼠视网膜细胞的凋亡,其机制可能与其促进ROP大鼠视网膜细胞NT-3与CNTF的表达有关。
- 赵岩松赵堪兴王晓莉陈玉玺王丽牟青杰
- 关键词：视网膜病变骨髓间充质干细胞移植凋亡神经营养素-3睫状神经营养因子
