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国家自然科学基金(30972871)
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稳定转染金属调理素-1对胃癌细胞SGC-7901侵袭能力的影响
2012年
目的构建pEGFP-金属调理素-1(MPS-1)真核表达载体,体外转染至SGC-7901胃癌细胞,观察MPS-1转染后MPS-1蛋白表达,并检测SGC-7901细胞侵袭能力的变化。方法聚合酶链反应(PCR)扩增MPS-1全长255bp的编码序列,将PCR扩增产物连接入pEGFP—C1载体,经测序确认序列无误后成功构建pEGFP-MPS-1真核表达载体。采用Lipofectamine2000转染SGC-7901胃癌细胞株,用浓度为2.0g/L的G418筛选2周后得到外源性MPS-1稳定表达的SGC-7901细胞并扩增。Westernblot法检测MPS-1的表达,TransweH实验检测pEGFP—MPS-1过表达后对胃癌细胞侵袭能力的影响。结果得到外源性MPS-1稳定表达的胃癌细胞株,Westernblot显示外源性MPS-1在胃癌SGC-7901细胞中表达成功,而且,pEGFP—MPS-1过表达后胃癌细胞的Transwell实验显示pEGFP—MPS-1过表达细胞组相对于空载组和空白组的侵袭指数分别为2.10±0.25比1.00±0.00和2.10±0.25比0.85±0.22(P〈0.05),提示MPS-1稳定表达后胃癌细胞的侵袭能力增加。结论pEGFP—MPS-1的稳定表达增加了胃癌细胞SGC-7901的侵袭能力。
杨中印
瞿颖
魏敏
朱正纲
刘炳亚
顾琴龙
关键词:
胃癌
真核表达载体
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