博士科研启动基金(01140401)
- 作品数：4 被引量：14H指数：3
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- 禽脑脊髓炎病毒YL株的分离鉴定被引量：5
- 2014年
- 为弄清陕西杨凌某鸡场种鸡产蛋量突然下降,种蛋孵化率降低,死雏、弱雏增多的原因,通过采集发病鸡脑组织进行SPF鸡胚连续传代、琼脂扩散试验（AGP）、人工感染试验、VP1基因的克隆及序列分析等对病原进行鉴定.结果显示,分离毒YL株与AEV标准阳性血清之间出现特异的沉淀线;在人工感染试验中可见雏鸡有震颤、共济失调等症状,剖检大脑有轻微的水肿和软化;成功克隆出AEV YL株的VP1基因,全长810 bp,编码270个氨基酸残基;与AEV参考毒株VP1基因核苷酸同源性92.0％～99.8％,氨基酸同源性为89.3％～99.3％;进化树分析表明,YL株与1143株、L2Z株和SX株亲缘关系较近,与VR株、HB株、SD株和NH937株亲缘关系较远.结果表明,分离毒株为禽脑脊髓炎病毒,与AEV已知毒株在进化方面存在一定程度的差异.
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- 关键词：VP1基因
- 禽脑脊髓炎病毒陕西分离株VP1基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2012年
- 对禽脑脊髓炎病毒(AEV)陕西分离株SX株VP1基因进行克隆和序列分析,了解VP1基因的分子生物学特征。根据发表的AEV VP1基因序列,设计并合成一对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增出AEVSX分离株的VP1基因,将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列测定后与已知的AEV毒株序列进行比较分析。结果表明,获得的AEV SX分离株VP1基因的全长为810bp,编码270个氨基酸残基;SX株与参考毒株VP1基因的核苷酸同源性为91.5%～99.4%,推导的氨基酸同源性为88.5%～98.9%;在1～7、19～25、149～155处有3个潜在抗原位点。系统进化树表明,SX株与1143、L2Z参考毒株的亲缘关系较近。
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- 关键词：禽脑脊髓炎病毒VP1基因克隆
- 禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 对AEV陕西分离株VP1基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物;以纯化的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对反应条件进行优化。结果表明,VP1蛋白在大肠杆菌中成功表达,产物约为50 000的融合蛋白,具有良好的反应原性;优化的ELISA最佳工作条件为:重组抗原包被质量浓度3.8mg/L,37℃2h后4℃过夜,1%BSA 37℃封闭2h,待检血清1∶50稀释37℃孵育0.5h,酶标抗体1∶4 000稀释,37℃作用30min,底物37℃显色5min,临界值为0.360;建立的ELISA方法特异性强、重复性好、敏感性高;临床检测180份样品,与美国IDEXX公司AEV抗体检测试剂盒检测结果符合率为91.9%。该方法可用于临床样品的大批量检测。
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- 关键词：禽脑脊髓炎ELISA
- 禽脑脊髓炎病毒感染雏鸡的病理组织学观察被引量：9
- 2009年
- 张淑霞杨增岐季芳王向鹏薛登民赵余放
- 关键词：禽脑脊髓炎病毒组织学观察雏鸡接触性传染病晶状体混浊
