湖南省卫生厅科研基金(B2005-117)
- 作品数：5 被引量：36H指数：4
- 相关作者：黄仁彬陈晓岚莫艳秀汤银娟张建湘更多>>
- 相关机构：郴州市第一人民医院湘南学院中南大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 黄芩甙诱导人脐血间充质干细胞分化为神经元样细胞被引量：7
- 2007年
- 目的探讨中药黄芩甙体外诱导人脐血间充质干细胞(MSCS)分化为神经元样细胞的可行性及其可能的机制。方法无菌条件下采集正常足月胎儿的脐带血,经肝素抗凝,用相对密度1.077的淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞,加入含黄芩甙50μmol/L的液体培养体系中进行扩增培养。取扩增培养2周的人脐血MSCS进行诱导实验。实验共分3组:诱导组(诱导液和维持液均含黄芩甙300～400μmol/L);对照1组(诱导液和维持液均不含黄芩甙及其它抗氧化剂);对照2组(诱导液和维持液均含3mmol/Lβ-巯基乙醇、20g/L二甲基亚砜和20mmol/L丁化羟基苯甲醚,不含黄芩甙)。诱导30min后开始在倒置显微镜下动态观察人脐血MSCS生长情况及诱导前后形态学变化。各组分别在诱导6h、24h、7d留取标本制作细胞爬片,用免疫细胞化学染色法评价神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP-2)阳性细胞的表达率。用Hoechest 33258染色法评价各组细胞存活率。结果黄芩甙诱导7d后,人脐血MSCS形成较典型的神经元样细胞形态,免疫细胞化学染色显示黄芩甙诱导组NSE、MAP-2阳性细胞表达率及细胞存活率分别为77.2%±9.8%、76.6%±6.2%、86.5%±5.2%,显著高于对照1、2组(P<0.01)。分别为4.6%±0.7%、0.7%±0.5%、45.7%±8.3%和68.9%±4.5%、51.5%±5.2%、71.6%±6.4%。结论黄芩甙能诱导人脐血MSCS分化为神经元样细胞,其诱导作用温和、稳定而持久,其诱导机制可能与黄芩甙的抗氧化、调控细胞NF-κB的活性从而刺激多种细胞因子的生成有关。
- 陈晓岚黄仁彬莫艳秀汤银娟陈继华
- 关键词：黄芩甙人脐血间充质干细胞细胞分化神经元
- 人脐血间充质干细胞静脉移植治疗大鼠局灶性脑缺血的实验研究被引量：12
- 2007年
- 目的探讨来源于人脐血的间充质干细胞经静脉移植治疗大鼠局灶性脑缺血的可行性及其机制。方法将人脐血间充质干细胞在体外纯化、扩增并经BrdU标记后,经尾静脉移植到局灶性脑缺血大鼠体内,通过神经缺损评分观察移植后大鼠神经行为学改善情况,通过组织学方法观察移植到脑内的人脐血间充质干细胞表达脑源性神经营养因子和缺血灶周围微血管密度变化的情况。结果人脐血间充质干细胞移植组大鼠的神经缺损评分显著低于对照组(P<0.05);移植到脑内的人脐血间充质干细胞主要选择性分布于缺血灶周围区域并表达脑源性神经营养因子,移植组大鼠梗死灶周围的微血管密度显著高于对照组(P<0.01)。结论经静脉注射移植人脐血间充质干细胞能明显促进局灶性脑缺血大鼠的神经行为功能恢复,促进缺血灶周边区微血管增生可能是人脐血间充质干细胞移植治疗局灶性脑缺血的机制之一。
- 陈晓岚黄仁彬汤银娟莫艳秀刘科峰刘运海
- 关键词：人脐血间充质干细胞局灶性脑缺血细胞移植
- 人脐血间充质干细胞体外分离培养的实验研究被引量：4
- 2006年
- 目的探讨来源于人脐血的间充质干细胞(MSCs)在体外分离、纯化和扩增培养的可行性和条件。方法无菌条件下收集正常足月胎儿的脐带血,经肝素抗凝,用相对密度1.077的淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,以偏酸性的M esencu ltTM作为培养基进行培养和纯化扩增,用流式细胞仪检测MSCs的表面标志。结果来源于人脐血的单个核细胞种植于特定的培养基中后,可产生贴壁细胞,主要表现为破骨样细胞和间充质样细胞,传3代后,可得纯化扩增的人脐血MSCs。6.6×105个脐血原代MSCs在体外扩增10代后,获得9.9×108个细胞。流式细胞仪检测结果显示,人脐血MSCs不表达CD34、CD11 a和CD11b,强表达CD29,弱表达CD71,与骨髓MSCs表面抗原特性一致。结论源于人脐血的MSCs在体外可以培养、扩增,可作为干细胞来源之一用于实验研究和临床。
- 陈晓岚黄仁彬汤银娟莫艳秀张建湘
- 关键词：人脐血间充质干细胞纯化扩增
- 枸杞多糖诱导人脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究被引量：7
- 2007年
- 目的:探讨枸杞多糖诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的可行性及其机制。方法:无菌条件下收集正常足月儿的脐带血,经肝素抗凝,用相对密度1.077的淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,用低糖DMEM培养基进行培养和纯化扩增。选取第3代细胞进行诱导实验,当传代细胞长满瓶底的80%以上时,先用含15%FBS和10ng/ml bFGF的DMEM完全培养基预诱导24小时,然后用不含血清含1g/L枸杞多糖的DMEM培养基诱导,光镜下观察细胞形态,用免疫组化技术检测细胞Nestin和NF的表达。结果:预诱导后MSCs没有变化,而经枸杞多糖诱导4h后细胞即出现形态学上的改变,细胞变成不规则形,立体感增强,从胞体伸出突起。免疫组化检测显示,细胞Nestin、NF呈阳性。结论:人脐血间充质干细胞经枸杞多糖诱导可转化为神经元样细胞,其诱导机制可能与枸杞多糖的抗氧化作用有关。
- 陈晓岚陈芬莫艳秀汤银娟
- 关键词：人脐血间充质干细胞枸杞多糖诱导分化神经元样细胞
- 恒磁场对人脐血间充质干细胞增殖及细胞周期的影响被引量：7
- 2006年
- 目的:观察不同强度恒磁场辐射对人脐血间充质干细胞增殖水平及细胞周期的影响。方法:实验于2005-08/2005-10在中南大学湘雅医学院组织胚胎学教研室完成。①用密度梯度离心法分离人脐血间充质干细胞。②经贴壁筛选法筛选,对生长良好的第3代人脐血间充质干细胞进行恒磁场辐射(强度分别为0.05,0.1,0.5和1.0mT),连续刺激5d,8h/d。③用四甲基偶氮唑盐法、流式细胞仪法测定细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。结果:①0.05mT组细胞增殖显著高于对照组(0.198±0.011,0.162±0.007,P<0.05);细胞周期静止期/DNA合成前期比例显著降低(66.3±0.1,75.8±0.3,P<0.05);DNA合成期和DNA合成后期/分裂期比例显著增加(14.9±0.3比9.1±0.1,18.8±0.2比15.1±0.1,P<0.05)。②0.1mT组细胞增殖和细胞周期与对照组相比无明显差异。③0.5mT组和1.0mT组细胞增殖均显著低于对照组,细胞周期静止期/DNA合成前期比例显著增加,DNA合成期和DNA合成后期/分裂期比例显著降低(P<0.05)。④各组均未发现DNA倍体异常细胞。结论:恒磁场对人脐血间充质干细胞增殖的影响与磁感应强度有关,0.05mT的磁场促进间充质干细胞的增殖,0.1mT的磁场对间充质干细胞无明显影响,0.5mT和1.0mT的磁场抑制间充质干细胞的增殖。
- 陈晓岚黄仁彬莫艳秀汤银娟刘科峰张建湘
- 关键词：电磁场脐静脉干细胞细胞培养
