国家自然科学基金(30772052)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 弓形虫可溶性抗原混合液延长小鼠移植心脏存活时间
- 2011年
- 目的探讨弓形虫可溶性抗原混合液（STAgs）延长小鼠移植心脏存活时间的作用及其作用机制。方法通过在冰浴中超声粉碎弓形虫速殖子制备弓形虫STAgs。实验分为3组，每组受者9只。STAgs组和急性排斥反应（AR）组：供者为Balb／c小鼠，受者为C57BL／6小鼠，移植前4d两组受者分别皮下注射STAgs5μg和磷酸盐缓冲液100ul，同系对照组供、受者均为C57BL／6小鼠，术前未进行任何处理。分组后建立小鼠颈部异位心脏移植模型。术后观察移植心脏存活时间，术后第7天每组处死3只受者，获取移植心脏行病理学检查观察排斥反应，采用免疫组织化学检测移植心中CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞。结果同系移植组在观察终点100d时均存活，AR组和STAgs组移植心脏存活时间分别为（6．7±0．5）和（70．8±3．5）d，3组间两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。术后第7天，同系移植组、AR组和STAgs组移植心排斥反应分级分别为0级、Ⅲ～Ⅳ级和0～I级；免疫组织化学检测显示STAgs组CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞比例明显少于AR组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论弓形虫STAgs能显著延长小鼠移植心脏的存活时间，减轻移植心脏的排斥反应，具体机制可能与弓形虫STAgs可影响TH1／Tst2比例相关，也可能通过刺激机体产生脂氧素A4抑制树突状细胞活化发挥作用。
- 王升方正明黄霞蔡兰军余道武方泽民唐燕雷罗鲜樟宫念樵明长生
- 关键词：弓形虫属可溶性抗原小鼠排斥反应
- 纤维素滤膜过滤法纯化弓形虫速殖子并制备可溶性抗原被引量：2
- 2010年
- 取弓形虫RH株感染小鼠腹腔灌洗液20ml,加入无菌生理盐水至250ml,在5μm滤膜孔径的容器过滤器上过滤。收集的滤液经1512×g离心15min,沉淀即为纯净虫体。超声粉碎虫体,11200×g离心30min,收集上清即为弓形虫可溶性抗原。采集感染弓形虫SD大鼠慢性期血清和健康SD大鼠血清,用上述抗原作间接酶联免疫吸附试验(indirectELISA),检测抗原特异性和抗原效价。结果显示,通过改进过滤器、滤膜孔径和过滤方法纯化弓形虫速殖子,平均白细胞清除率为99.9%,红细胞清除率为80.3%,虫体回收率为71.0%。平均每只小鼠提取1.38mg弓形虫可溶性抗原。间接ELISA试验结果表明,抗原效价为5μg/ml。
- 方正明王升苏斌涛宫念樵刘文琪明长生
- 关键词：弓形虫纯化抗原
- 改良法分离小鼠移植心内浸润淋巴细胞被引量：1
- 2010年
- 目的 建立简便而高效的分离小鼠心脏移植物内浸润淋巴细胞的方法.方法 移植物剪碎后用Ⅱ型胶原酶（250 U/ml,30～40 min）消化,Ficoll密度梯度离心（800 g/min,20 min）分离单个核细胞,荧光标记抗体行表面抗原或胞内细胞因子染色后用流式细胞仪分析其亚群.结果 移植物分离的单个核细胞数量稳定在1 × 10^6个以上,淋巴细胞的比例为（31.9±2.3）%,活性（95.1±2.1）%,流式细胞仪能同时检测到荧光标记的淋巴细胞表面和胞内的抗原.结论 本法单用胶原酶消化移植心,减少了对心脏移植物内浸润淋巴细胞的损伤,获得的细胞可进一步用于流式表型分析.
- 方泽民何文涛王升周鸿敏陈忠华明长生
- 关键词：心脏移植淋巴细胞移植物流式细胞仪
- Tim-3在小鼠心脏移植受者体内不同部位T淋巴细胞上表达的变化被引量：3
- 2010年
- 目的 检测激活的TH1类淋巴细胞标记分子“T淋巴细胞免疫球蛋白域及粘蛋白域蛋白-3（Tim-3）”在受者体内不同部位T淋巴细胞上表达的变化，探讨其与急性排斥反应的关系。方法建立小鼠同基因和异基因心脏移植模型（简称：同基因组和异基因组）；移植术后第3和第6天，分离和制备两组受者外周血、脾脏、引流淋巴结和移植心内淋巴细胞悬液，采用流式细胞仪检测Tim-3阳性细胞在CD4＋和CD8＋T淋巴细胞中的比值。结果两组受者术后外周血和脾脏内Tim-3＋／CD4＋以及Tim-3＋／CD8＋的比值比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。与同基因组比较，异基因组引流淋巴结内Tim-3＋／CD4＋比值轻度升高（P〈0．05）；但异基因组术后第6天与第3天比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。与同基因组比较，移植心内Tim-3＋／CD4＋和Tim-3＋／CD8＋比值均显著升高（P〈0．01）；异基因组术后第6天与第3天比较，移植心内Tim-3＋／CD4＋和Tim-3＋／CD8＋比值也显著升高（P＜0．01）。结论小鼠异基因心脏移植受者引流淋巴结和移植心内T淋巴细胞上Tim-3的表达升高与急性排斥反应的进展动态相关。
- 方泽民何文涛王升蔡兰军雒真龙张维娜周鸿敏陈忠华明长生
- 关键词：TIM-3心脏移植移植物排斥T淋巴细胞
