广东省科技计划工业攻关项目(2010B031000024)
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
- 相关作者：李林海石玉玲陈建芸陈丽丹廖杨更多>>
- 相关机构：广州军区广州总医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备以及应用分析被引量：1
- 2012年
- 目的制备针对西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体,并分析其在临床检测中的应用价值。方法采用原核表达系统表达西尼罗河病毒preM/E融合蛋白,作为抗原,免疫BALB/c小鼠,按常规单克隆抗体技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用有限稀释法筛选能稳定分泌抗preM/EⅢ单抗的杂交瘤细胞株。接种杂交瘤细胞于小鼠腹腔,抽取腹水纯化单克隆抗体。采用间接ELISA和Western blotting对抗体特异性和效价进行分析,并对临床样本进行检测。结果获得了1株能稳定分泌preM/EⅢ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为ME1。纯化后抗体效价为10-6,其亚类为IgG1。ME1单抗能与西尼罗病毒preM/EⅢ蛋白以及西尼罗病毒发生特异性反应,而与日本脑炎病毒(JEV)、圣路易斯脑炎病毒(SLEV)、黄热病毒(YFV)和登革热病毒(DENV)无交叉反应。临床诊断准确率为97.78%。结论 ME1单克隆抗体具有较高的特异性,临床诊断准确性较高,具有临床应用价值。
- 李林海陈丽丹廖杨陈建芸石玉玲
- 关键词：西尼罗河病毒单克隆抗体特异性
- 西尼罗河病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用研究被引量：5
- 2012年
- 目的:建立特异、敏感、快速检测西尼罗河病毒(WNV)的SYBR Green实时荧光定量PCR方法。方法:针对西尼罗河病毒囊膜蛋白(E)的保守序列设计引物,建立WNV的实时荧光定量检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性以及稳定性。对保存的54例WNV感染者的血清样本进行检测,分析其检测的准确性。结果:建立的SYBR Green实时荧光定量PCR方法对WNV的检测具有高度的特异性,而对日本脑炎病毒(JEV)、圣路易斯脑炎病毒(SLEV)等均无交叉反应,检测的灵敏度可达到100pg。标准曲线具有较好的线性关系,相关系数为0.995,实时荧光定量PCR效率为100%。对54例WNV感染样本进行检测,准确率高达98.15%。结论:实时荧光定量PCR技术检测WNV具有较高的特异性、敏感性和稳定性,可作为临床诊断WNV的手段。
- 李林海陈丽丹廖杨陈建芸石玉玲
- 关键词：西尼罗河病毒实时荧光定量PCR特异性日本脑炎病毒
- 中国汉族人群中YWHAE基因与帕金森病的相关性研究
- 2013年
- 目的探讨YWHAE基因多态性与中国汉族人群帕金森病(PD)之间的相关性。方法采用TaqMan检测法对中国汉族人群258例PD患者(病例组)和260例健康体检者(对照组)YWHAE的3个位点(rs1873827、rs12452627、rs1532976)进行关联分析和单核苷酸多态性分析,比较病例组和对照组等位基因频率、基因型频率及单倍型的差异。结果两组间YWHAE的3个位点基因频率、基因型频率比较差异无统计学意义。rs1873827与rs12452627的LD分析其D’值较大(D’=0.933)。进一步对两位点的单倍型分析发现其各种组合间差异均无统计学意义。结论研究结果提示YWHAE基因的3个位点与中国汉族人群PD的发生不存在相关性。
- 李林海陈丽丹廖杨陈建芸石玉玲
- 关键词：帕金森病单核苷酸多态性单倍型分析
- 实时荧光定量PCR检测泌尿生殖道患者尿液解脲脲原体被引量：7
- 2012年
- 目的应用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)检测泌尿生殖道患者尿液解脲脲原体(UU),并评价其敏感性和特异性。方法对140例疑似泌尿生殖道感染患者的拭子和尿液样本,分别采用培养法、SAT进行解脲脲原体检测,检测结果有差异的标本用实时荧光定量PCR法对拭子进行复测,根据实验结果评估SAT检测尿液UU的敏感性和特异性。结果 140例疑似患者试子培养和尿液SAT检测阳性率均为60%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05),其中16例培养结果与SAT检测结果不一致,8例培养法阳性、SAT阴性的拭子PCR结果复测阳性;8例培养法阴性、SAT阳性的拭子标本PCR结果 4例阴性、4例阳性,结合培养法结果和PCR结果作为"扩大金标准",得出SAT对尿液检测的敏感性为95.5%、特异性为100%。结论 SAT检测泌尿生殖道患者尿液UU具有取样方便,检测快速、准确等优点,适用于临床实验室泌尿生殖道UU的检测。
- 李林海何宇玲石玉玲杨永泉陈建芸
- 关键词：解脲脲原体尿液
- 西尼罗病毒前膜蛋白在果蝇细胞S2中的表达与鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的克隆西尼罗病毒(WNV)前膜蛋白(prM)基因,将其在果蝇细胞(S2)中表达,为制备研制诊断试剂所需的单克隆抗体奠定基础。方法以质粒WNV-CME为模板,PCR扩增获得prM基因,与T载体连接,测序正确后酶切,酶切产物与果蝇表达载体pMT/Bip/V5-HisC重组,重组质粒与pCoBlas共转染果蝇S2细胞,25μg/ml Blasticidin筛选获得抗性细胞,500μmol/L CuSO4溶液诱导表达,72h后收集细胞与细胞上清进行Western blot鉴定。结果酶切与测序结果表明成功构建重组表达载体WNV-prM-pMT,Western blot显示目的蛋白在果蝇细胞S2内稳定表达。结论在果蝇S2细胞内成功地稳定表达WNV prM蛋白,为下一步WNV单克隆抗体的制备奠定了实验基础。
- 李林海杜鹏陈丽丹王文敬石玉玲黎诚耀
- 关键词：西尼罗病毒
