上海市科委科技支撑计划(12441903300)
- 作品数：8 被引量：21H指数：2
- 相关作者：张舒林赵俊伟孙战强叶娟王凤平更多>>
- 相关机构：上海交通大学苏州市第五人民医院郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：上海市科委科技支撑计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 武汉地区结核分枝杆菌异烟肼耐药性的基因分析被引量：2
- 2015年
- 探讨武汉地区结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药相关基因突变特征。通过PCR直接序列分析法对异烟肼耐药相关基因kat G基因及mab A-inhA启动子进行序列分析。20株异烟肼敏感株未检测到突变,49株耐药株中有40株(81.6%)存在突变,其中katG的S315突变率占主导优势,突变率为73.5%(36/49),mab A-inhA启动子区核苷酸置换率为8.2%(4/49),其中一株同时检测到了katG和mabA-inhA启动子区的突变。此外,还检测到了一种国内尚未报道的katG突变类型P232S(CCG→TCG)。研究证实kat G基因和mabA-inhA启动子的突变与异烟肼耐药相关,为进一步研究结核分枝杆菌异烟肼耐药性奠定了基础。
- 孙战强陈高瞻余晓丽
- 关键词：结核分枝杆菌异烟肼耐药KATG基因
- 结核感染T细胞检测在肺外结核诊断应用价值被引量：11
- 2014年
- 目的探讨结核感染T细胞检测在肺外结核诊断应用价值。方法选取本院2012年1月-2013年12月依据结核病原学、组织病理学、诊断性治疗有效及影像学支持临床诊断肺外结核病例80例,25例非结核肺部疾病以及8例健康对照。选用英国Oxford Immunotec Ltd.生产的结核感染T细胞检测试剂盒,按照使用说明操作六部法进行检测。利用蛋白芯片技术检测结核杆菌三种抗原的IgG抗体、痰抗酸染色涂片检查及痰结核分枝杆菌培养(采用改良罗氏法)。结果T-SPOT.TB在肺外结核病阳性率为81.3%、敏感度为84.2%、特异度97.1%、诊断效率87.6%。肺外结核组TSPOT.TB检测阳性率明显高于非结核疾病和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。肺外结核疾病各组间敏感度、特异度、诊断效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。肺外结核疾病利用T-SPOT.TB和结核杆菌蛋白芯片检测方法配对比较,前者明显高于后者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论肺外结核多脏器及临床表现差异性及复杂性,需要临床经验、有效的辅助检查诊断,T-SPOT.TB检测是结核病诊断金标准之外的非常有效辅助诊断方法,可节约诊断时间及不必要检查,可更好利用医疗资源同时减轻患者负担,更好防治结核病。
- 王凤平陈蕾陈苏芳赵静傅春玲
- 关键词：T-SPOT.TB肺外结核
- 分枝杆菌脂聚糖的分离、纯化及其结构和功能分析被引量：2
- 2014年
- 【目的】建立分离、纯化分枝杆菌脂聚糖的方法,初步比较分析不同菌株来源的脂阿拉伯甘露聚糖(Lipoarabinomannan,LAM)和脂甘露聚糖(Lipomannan,LM)的结构差异及研究脂聚糖刺激对巨噬细胞环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白表达的影响。【方法】应用Triton X-114液相法提取脂聚糖,电洗脱法分离纯化,基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)进行分子量鉴定;基于特异性识别非还原性末端α-D-甘露糖基的刀豆球蛋白(Concanavalin A,Con A)分析新诺分枝杆菌JDM601、结核分枝杆菌H37Rv标准株和耻垢分枝杆菌mc2155脂聚糖的结构差异;进一步用Western blot检测脂聚糖刺激的RAW 264.7巨噬细胞COX-2蛋白的表达。【结果】通过电洗脱法成功纯化出3种菌株脂聚糖;MALDI-TOF/TOF-MS鉴定发现,分子量从小到大依次为新诺分枝杆菌JDM601、耻垢分枝杆菌mc2155和结核分枝杆菌H37Rv来源的脂聚糖。Western blot显示,Con A能与结核分枝杆菌H37Rv标准株来源的LAM相互作用,而不能与新诺分枝杆菌JDM601和耻垢分枝杆菌来源的LAM相互作用;并且发现Con A与新诺分枝杆菌JDM601来源的LM有很强的反应,然而与其余两种来源的LM反应很弱。3种菌株来源的脂聚糖均能刺激RAW 264.7巨噬细胞COX-2蛋白的表达。【结论】首次成功对来源于中国临床分枝杆菌分离株的脂聚糖进行了分离纯化,初步探讨了不同菌株来源分枝杆菌脂聚糖的结构差异,并表明LAM和LM均能刺激巨噬细胞诱导COX-2蛋白的表达,为进一步研究其对宿主的毒力和免疫机制奠定了基础。
- 玄松花赵俊伟孙战强周业成张朝宝余晓丽郭晓奎刘文第张舒林
- 关键词：分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖
- 结核分枝杆菌特异性抗原ESXO的重组制备及其免疫原性评估被引量：1
- 2012年
- 目的评估结核分枝杆菌(MTB)重组特异性抗原ESXO在大肠埃希菌中的高效表达,并评价其免疫原性。方法采用常规分子克隆方法获得MTB重组蛋白ESXO。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测84份确诊结核病(TB)患者血清和48份健康人血清中相应的抗结核ESXO抗体水平,评价血清学抗原活性,并与结核早期分泌蛋白ESAT-6和CFP-10的检测结果进行比较。结果重组特异性抗原ESXO在大肠杆菌中获得成功表达,其在E.coli BL 21 plysS(DE3)中以可溶性和包涵体两种形式存在,相对分子质量(27 300)与预期相符,血清学抗原活性评估结果显示其特异度和敏感度分别为94.0%(45/48)和32.1%(27/84),特异度与ESAT-6和CFP-10相当,敏感度高于ESAT-6。结论结核特异性抗原ESXO有望成为新的TB诊断与疫苗设计的候选抗原。
- 封莉叶娟王凤平赵俊伟吴兴福张舒林
- 关键词：克隆基因表达血清学诊断
- 结核分枝杆菌特异性抗原Rv3117的克隆表达和诱导小鼠免疫应答的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的克隆表达结核分枝杆菌Rv3117蛋白,并进行诱导小鼠免疫应答的初步研究。方法通过聚合酶链反应(PCR)扩增结核分枝杆菌Rv3117基因,克隆入pET32a载体,构建重组质粒pET32a-Rv3117,转化入大肠埃希菌BL21(E.coli)plysS(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍柱亲和纯化,通过SDS-PAGE鉴定其表达情况;以目的蛋白免疫C57BL/6小鼠血清并行Western blotting分析。结果成功构建原核表达载体pET32a-Rv3117,获得纯化的目的蛋白,其在E.coli BL21 plysS(DE3)中主要以可溶性形式表达,相对分子质量(48 100)与预期相符。Western blotting分析结果显示在目标位置有阳性条带。结论成功克隆结核分枝杆菌重组蛋白Rv3117,其能够诱导C57BL/6小鼠的免疫应答。
- 汤俊明陈翠翠王学才赵俊伟张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌WESTERNBLOTTING
- 结核分枝杆菌Rv0315重组蛋白ELISPOT辅助诊断活动性肺结核的应用价值被引量：1
- 2013年
- 目的用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在活动性肺结核病诊断中的应用价值。方法选取初治肺结核病患者25例和健康体检者28名分别作为结核组和对照组,应用Rv0315蛋白作为抗原对受试者外周血单核细胞进行ELISPOT检测斑点形成细胞(SFCs)的数量,判断结核分枝杆菌感染情况,并与结核早期分泌靶向抗原(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP10)抗原的检测结果进行比较。结果以Rv0315、EAST6和CFP10作为抗原,用ELISPOT方法检测结核分枝杆菌感染的敏感度分别为84.0%(21/25)、80.0%(20/25)和92.0%(23/25),特异度分别为89.2%(25/28)、89.2%(25/28)和92.8%(26/28),其中Rv0315的敏感度高于EAST6但低于CFP10。结论应用重组蛋白Rv0315作为抗原建立的ELISPOT方法具有应用于活动性肺结核病辅助诊断的潜在价值。
- 周业成陈翠翠叶娟赵俊伟玄松花杨志荣张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌酶联免疫斑点技术细胞免疫
- 结核分枝杆菌新型抗原Rv3117联合DDA/MPL佐剂作为亚单位疫苗在小鼠体内的免疫评估被引量：1
- 2015年
- 目的用结核分枝杆菌(M.tuberculosis)特异性抗原Rv3117联合双十八烷基二甲基溴化铵(DDA)/单磷酰脂质体A(MPL)佐剂构建结核亚单位疫苗(Rv3117/DDA/MPL),并在C57BL/6小鼠体内评估其加强卡介苗(BCG)首次免疫后的免疫效应。方法采用分子克隆方法构建重组质粒p ET32a-Rv3117,转入感受态大肠埃希菌BL21(DE3)PLys S,诱导表达并纯化目的蛋白,用Triton X-114相分离法去除目的蛋白中的内毒素,然后与DDA/MPL佐剂充分乳化构建亚单位疫苗。C57BL/6小鼠随机分为对照组(未予任何处理)、PBS组(免疫PBS)、BCG组(单纯首次免疫BCG)、BCG+DDA/MPL组(首次免疫BCG,2周后用佐剂DDA/MPL加强免疫2次)和BCG+Rv3117/DDA/MPL组(首次免疫BCG后用亚单位疫苗Rv3117加强免疫2次),每组5只。分别采用酶联免疫斑点检测(ELISPOT)和酶联免疫吸附测定(ELISA)技术对免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫进行评估。结果成功克隆表达并纯化结核特异性抗原Rv3117。ELISPOT和ELISA结果显示:受10.0μg/m L结核菌素纯化衍生蛋白(PPD)刺激后,与对照组、PBS组、BCG组和BCG+DDA/MPL组比较,BCG+Rv3117/DDA/MPL组小鼠T细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的水平明显升高(P<0.05);BCG+DDA/MPL组培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素12(IL-12p70)细胞因子水平均显著高于对照组和PBS组(P<0.05),总抗体Ig G和Ig G1亚型水平亦较高;而BCG+Rv3117/DDA/MPL组上述指标水平均显著优于BCG+DDA/MPL组(P<0.05)。结论亚单位疫苗Rv3117/DDA/MPL在C57BL/6小鼠体内可增强BCG的细胞免疫和体液免疫效应。结核分枝杆菌特异性抗原Rv3117有望成为新的结核疫苗设计及结核诊断的候选抗原。
- 叶娟高孟哲张舒林陈力孙战强
- 关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗体液免疫
- 结核分枝杆菌细胞壁糖复合物研究进展被引量：3
- 2013年
- 结核病是由感染结核分枝杆菌引起的、以呼吸道发病为主的慢性传染病,目前仍然是单一病原体感染发病致死率最高的感染性疾病,深入了解结核分枝杆菌的生理代谢及其致病机制是防控结核病传播的重要途径。结核分枝杆菌细胞壁上特殊的糖复合物在维持细胞壁结构和致病过程中发挥着极其重要的作用,因此已成为当今的研究热点。该文仅对结核分枝杆菌细胞壁上糖复合物作一综述,以期为结核分枝杆菌的相关基础研究及临床应用提供参考。
- 邹运林文锋张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌细胞壁糖复合物
